Resumo e estudo de Biotecnologia Vegetal

Prévia do material em texto

Resumo e estudo de Biotecnologia Vegetal
O que é micropropagação?
Conjunto de técnicas utilizadas para a clonagem de plantas in vitro, em que serão isolados da planta mãe (doadora), um explant que é qualquer parte do material vegetal que se pretende manipular, em condições assépticas controlando condições físicas e químicas.
Condições físicas: trocas gasosas, umidade relativa onde está o explant, luz e temperatura;
Condições químicas: nutrição mineral (macro e micronutrientes), fonte de carbono (sacarose) e reguladores de crescimento (hormônios e vitaminas).
Tipos de micropropagação
- Meristemas pré existentes
- Organogênese
- Embriogênese somática
Objetivos da micropropagação
- Propagação em grande escala de um material vegetal uniforme isentas de patógenos;
- Produção de variedades novas de plantas;
- Propagação de plantas que são difíceis de se propagarem em métodos convencionais;
- Transferência segura de germoplasma;
- Facilitar a transformação genética: essencial numa regeneração vegetal de células transformadas;
- Produção de metabólitos secundários para a indústria farmacêutica.
5 etapas da micropropagação	
Seleção e desinfecção/preparação do explant;
Estabelecimento do explant/iniciação (1º impacto do explant no meio de cultura);
Multiplicação do material vegetal (de brotos ou materiais somáticos);
Enraizamento (controle de hormônios);
Aclimatação (transferir o explant da cultura in vitro para o solo).
Seções de um laboratório de micropropagação
Sala de preparação de meios de cultura;
Sala de esterilização (autoclaves);
Sala de multiplicação e manipulação vegetal (com fluxo laminar);
Sala de crescimento (manipulação de fatores químicos e físicos);
Sala de estufa (aclimatação).
Preparação do meio de cultura 
Os meios de cultura geralmente contêm os seguintes constituintes:
1. Nutrientes inorgânicos (macro e micronutrientes: NPK, Ca2+ , Cl-, Mg2+ ,PO43-);
2. Carbono e fontes de energia (sacarose);
3. Suplementos Orgânicos (vitaminas e aminoácidos);
4. Reguladores de crescimento (hormônios);
5. Agentes solidificadores (Agar, Gelrite).
*Outros cuidados:
pH: entre 5.0 – 6.0;
O meio de cultura é geralmente esterilizado em autoclave a 121°C e 15 psi por 20 minutos;
Hormônios e outros compostos orgânicos (vitaminas) sensíveis ao calor são esterilizados por filtração e adicionados ao meio autoclavado. 
Conservado a 4ºC -10ºC.
+info: http://home.uevora.pt/~zavattieri/Meios.pdf
Meio de cultura MS (Murashige and Skoog)
Meio de Murashige e Skoog pode ser reconstituído a partir de pó ou através da combinação de produtos que são os principais componentes de meio completo de M & S, tais como misturas de macronutrientes e complexos vitamínicos. Mistura de Murashige e Skoog Sal (M5524) contém os macronutrientes e micronutrientes da formulação original clássico. Pode ser combinado com M & S vitaminas ou vitaminas de Gamborg e suplementado com sacarose, agar, auxinas (IAA) e citocininas (cinetina) para gerar um meio completo de cultura de tecido de planta de crescimento.
Importância da escolha do explant
Irá determinar o sucesso ou não da cultura vegetal in vitro, por isso deve se ser muito criterioso para recolher um explant de uma planta mãe. É recomendado recolher o material vegetal na primavera (atividade metabólica maior), aquele tecido que estiver mais jovem e mais vigoroso.
Substâncias químicas usadas na desinfecção do explant
- Etanol;
- Peróxido de hidrogênio;
- Cloreto de mercúrio;
- Nitrato de prata;
- Antibióticos são usados para esterilização superficial.
*O hipoclorito de sódio (NaOCl) tem sido o mais utilizado. O NaOCl é altamente eficaz contra todos os tipos de bactérias, fungos e vírus.
Condições de desinfecção
A desinfecção deve feita de maneira adequada para não perder a viabilidade da planta, por isso deve se ter em mente alguns fatores:
Concentração
Tempo
Tipo
Explant