Aula 3 - Noções Básicas de Microscopia

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Noções Básicas de 
Microscopia 
Dra. Luciana Cáuper 
INSTRUMENTOS E TÉCNICAS USADOS EM 
CITOLOGIA, DIMENSÕES EM BIOLOGIA 
1 μm = 10-6 m = 10-3 mm (0,001 mm) 
1 nm = 10-9 m = 10-6 mm (0,000001 mm) 
 O limite de resolução do olho 
humano é de 100 µm (0,1 m) 
As unidades de medida utilizadas nestas dimensões estão, assim, adaptadas sendo as mais 
frequentemente utilizadas o micrômetro (µm) para a microscopia óptica e o nanômetro (nm) e o 
angstrom (Å) para a microscopia eletrônica. A sua relação com a unidade fundamental do sistema 
métrico, o metro (m) e com o milímetro (m) é a seguinte: 
As estruturas celulares que necessitamos de 
estudar têm dimensões que, em regra, são 
invisíveis à vista desarmada. 1mm (milímetro) 
= 1 0 µm (micrômetro) = 1 0 0 nm (nanômetro) 
= 10 0 0 Å (Angstrom). 
O Microscópio 
O microscópio apresenta dois sistemas de lentes convergentes; a objetiva e a ocular. 
A Objetiva 
É um conjunto de lentes que 
apresenta pequena distância focal 
e que fornece uma imagem real e 
aumentada do objeto que é 
observado. 
As objetivas de 10x, 40x e 50x são designadas 
objetivas secas. 
As objetivas de imersão, uma vez que, para as 
utilizar, é necessário colocar uma gota de óleo 
de imersão entre elas e a preparação, o qual, 
por ter um índice de refracção semelhante ao do 
vidro, evita o desvio do feixe luminoso para fora 
da objetiva. 
O Microscópio 
O microscópio apresenta dois sistemas de lentes convergentes; a objetiva e a ocular. 
A Ocular 
Também formada por lentes 
convergentes, funciona como 
uma lupa, que nos dá uma 
imagem virtual e aumentada da 
imagem real que se formou em 
pela objetiva 
A aproximadamente 25 cm dos 
olhos do observador. 
As oculares mais utilizadas são 
as de ampliação 10x, mas nos 
microscópios binoculares 
também existem oculares de 
12,5, 8x e 6x. 
O Microscópio 
Condensador 
Conjunto de duas ou mais lentes 
convergentes que orientam e 
espalham regularmente a luz 
emitida pela fonte luminosa 
sobre o campo de visão do 
microscópio. 
Diafragma 
É constituído por palhetas que 
podem ser aproximadas ou 
afastadas do centro através de 
uma alavanca ou parafuso, 
permitindo regular a intensidade 
da luz que incide no campo de 
visão do microscópio. 
O Microscópio 
Manuseio de um microscópio 
óptico 
 1. Verificar se a lâmpada encontra-se acessa. 
2. Movimentar o revólver, colocando em posição a objetiva de menor aumento (3,2X ou 4X). 
3. Tomar a lâmina com a lamínula para cima e colocá-la na platina, prendendo-a. 4. Movimentar 
o charriot, fazendo com que o preparado fique imediatamente abaixo da 
objetivae sendo atravessado pelo feixe de luz. 
5. Com o parafuso macrométrico, elevar a platina ao máximo, observando para que a objetiva 
não toque na lamínula, pois poderá quebrá-la. 
6. Focalizar a preparação para a obtenção de uma imagem nítida, movimentando o parafuso 
macrométrico e abaixando a platina até que se possa visualizar a imagem. 
7. Ajustar o foco com o parafuso micrométrico. 
Manuseio de um microscópio 
óptico 
8. Colocar a região do preparado que se quer ver com maior aumento bem no centro do campo 
frontal da lente. 
9. Movimentar o revólver, colocando em posição a objetiva de 10X (aumento médio). 
10. Repetir o procedimento do item 7. 
11. Colocar a objetiva de 40X (maior aumento) em posição e repetir o item 7. 
12. A objetiva de imersão (100x ) é utilizada com óleo de imersão (n=1,51 – 1,53) : gire o 
revólver no sentido desta objetiva; antes de dispô-la no eixo óptico, ponha sobre a 
preparação uma gota do óleo de imersão fornecido pelo docente ou pelo técnico 
responsável; em seguida gire a objetiva até que a mesma contactar o óleo; use o 
micrométrico para focar. 
Postura em Laboratório 
 1. Obedeça as normas de Biossegurança gerais de trabalho nos laboratórios da instituição. 
2. O uso de jaleco (bata) é OBRIGATÓRIO; O Aluno só ingressará no Laboratório vestindo o 
jaleco, no qual deve constar o nome e o curso. 
3. Não é permitido o uso de telefones celulares nas aulas práticas. 
4. Não é permitido fumar no Laboratório. 
5. Prestar cuidados especiais ao manusear qualquer microscópio e/ ou lupa presentes 
nos laboratórios. 
3. Cada aluno terá sua bancada correspondente, sendo responsável pelo respectivo 
microscópio. 
4. Zelar pela limpeza e conservação dos microscópios. 
5. Ao deixar o laboratório, verificar se o microscópio encontra-se desligado, com o 
potenciômetro de luz no mínimo, a mesa baixa e o equipamento coberto. 
6. Comunicar ao Docente qualquer tipo de problema referente ao laminário e/ou o Microscópio