Método de ELISA

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Faculdade de Ciências Médicas da Paraíba 
Faculdade Anglo Americano de João Pessoa 
Curso de Graduação em Farmácia 
Imunologia Clínica 
 
João Pessoa/PB 
Outubro, 2018 
ELISA 
(enzyme-linked immunosorbent assay) 
Alunos: Anderson Oliveira 
 Nadja Bandeira 
Introdução 
 É um método imunológico desenvolvido para quantificar 
a concentração de antígenos e anticorpos, por 
apresentar grande sensibilidade e especificidade. 
 
 O método de ELISA é um ensaio imunoenzimático, onde 
se aproveita, entre outras coisas, o princípio de 
interação antígeno-anticorpo (Ag-Ac). 
 
Fundamentação 
 Todo Ag tem a propriedade de gerar, in vivo, um Ac, 
dado por sua própria nomenclatura (antigen = antibody 
generator); 
 
 Todo Ag tem uma alta constante de afinidade (Kd) por 
seu Ac; 
 
 Epítopos antigênicos de uma molécula geram 
distintos anticorpos para si; 
 
 Uma vez ligados, Ags e Acs dificilmente podem ser 
separados, graças às interações que ocorrem. 
Objetivo 
 
 Colocar em evidência a presença de anticorpos ou 
antígenos específicos a uma patologia, em uma amostra 
de sangue; 
 
 Doenças infecciosas, alergia a alimentos, doenças 
autoimunes; 
 
 Neste tipo de teste não se pesquisa diretamente a 
presença do vírus, mas sim a existência de anticorpos 
contra o mesmo. 
Tipos de ELISA 
 ELISA Indireto 
 
 Detecta principalmente anticorpos; 
 
 Consiste em imobilizar o antígeno no poço, adicionar o 
anticorpo primário e depois o anticorpo secundário 
conjugado a uma enzima, seguido de agente cromogênico 
e o substrato. Após é realizada a leitura da absorbância. 
 
 Neste tipo de ELISA, quanto maior a absorbância maior 
é a quantidade de antígeno. 
Tipos de ELISA 
Indireto 
Lavagem Lavagem 
Tipos de ELISA 
 ELISA sanduíche ou direto: 
 
 Detecta principalmente antígenos; 
 
 Consiste em imobilizar anticorpo no poço, adição da 
amostra contendo ou não o antígeno de interesse e por fim 
outro anticorpo específico marcado com enzima, seguido 
de agente cromogênico e o substrato. 
 
 Neste tipo de ELISA, quanto maior a absorbância maior 
é a quantidade de antígeno. 
Tipos de ELISA 
Sanduíche 
ou 
Direto 
Lavagem Lavagem 
Tipos de ELISA 
 Método Competitivo 
 
 Detecta antígenos com baixo peso molecular; 
 
 Pode também ser empregado para a detecção de anticorpos. 
 
 Neste método primeiro se adsorve o anticorpo no poço da micro 
placa. Após a adsorção do anticorpo, uma solução que possivelmente 
contém o antígeno é adicionada sobre os anticorpos adsorvidos. 
 
 
 O próximo passo é adicionar o antígeno marcado com uma enzima. 
 
 Os poços que não possuem o antígeno primário (da solução 
problema) aderido ao anticorpo ficam coloridos, enquanto que os poços 
que possuem antígenos aderidos aos anticorpos não mudam de cor. 
Tipos de ELISA 
Competitivo 
Armazenamento 
Reagentes Amostra 
Armazenamento (Reagentes) 
 Os componentes permanecem estáveis até a data de 
validade indicada nos rótulos se conservados entre 2 e 
8ºC; 
 
 A bolsa que contém a microplaca deve estar a 
temperatura ambiente antes de abri-la, para evitar a 
condensação nos pocinhos; 
 
 Uma vez aberta a bolsa, as tiras são estáveis por 3 
meses guardadas a 2-8ºC na bolsa de plástico bem 
fechada, com a bolsinha de silicagel; 
Armazenamento (Reagentes) 
 A solução de lavagem, uma vez diluída, é estável 
durante 2 semanas, se conservada entre 2 e 8ºC; 
 
 Guardar o cromógeno ao abrigo da luz; 
 
 A solução substrato-TMB uma vez preparada não é 
estável, por isso, devem-se seguir estritamente as 
indicações para sua utilização. 
Armazenamento/Obtenção 
(Amostra) 
 Usar soro fresco ou plasma (citrato/EDTA); 
 
 Outros anticoagulantes devem ser avaliados antes de 
serem utilizados; 
 
 As amostras podem ser conservadas por 3 dias entre 2-
8ºC; 
 
 Para guardar por um período de tempo mais longo as 
amostras devem ser congeladas (-20ºC); 
Armazenamento/Obtenção 
(Amostra) 
 Evitar congelar e descongelar as amostras 
repetidamente; 
 
 Partículas em suspensão devem ser eliminadas por 
centrifugação; 
 
 As amostras não devem ser inativadas pelo calor, pois 
podem produzir-se resultados incorretos; 
 
 Não utilizar amostras que contenham azida sódica. 
Reagentes 
Materiais que vem no Kit 
Referências 
• http://books.scielo.org/id/cdbjg/pdf/araujo-9788575413937-16.pdf 
 
• http://www.fcav.unesp.br/Home/departamentos/patologia/HELIOJOSEMONTASSIER/aula-8--
interacoes-antigeno-anticorpo.pdf 
 
• http://www.fcav.unesp.br/Home/departamentos/patologia/HELIOJOSEMONTASSIER/reacoes_ag-
ac_-vet-2012-ketherson.pdf 
 
• https://saude.ccm.net/faq/1829-teste-elisa-definicao 
 
• http://www.laboratorioathena.com.br/saudeemdia/34900/contagem-de-reticulocitos 
 
• http://www.biokit.com/productos/reagents/bioelisa.aspx 
 
• https://biomedicinapadrao.wordpress.com/2010/05/05/elisa/ 
 
• https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/handle/1884/30495/Monografia%20Cecilia%20Mayumi%20S
himoida%20de%20Carvalho.pdf?sequence=1&isAllowed=y 
 
• https://pt.slideshare.net/labimuno/elisa-3454963 
 
• https://gfycat.com/gifs/search/elisa