Prática 2 Isolamento e carcte

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FACULDADES INTEGRADAS DO TAPAJÓS 
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICOS E DA SAÚDE 
CURSO DE ENFERMAGEM 
 
Curso: Enfermagem Período: 1º Período 
Semestre: 2018-1 Disciplina: MICROBIOLOGIA BÁSICA 
Docente: MSc. Telma Lélia Gonçalves Schultz de Carvalho 
 
AULA PRÁTICA Nº: 3, 4 e 5 
DATA: ____/____/ 2018 
 
NOME: _______________________________________________________________________________________ 
 
 
PREPARO DE MEIOS DE CULTURA, SEMEADURA PRIMÁRIA E COLORAÇÃO DE GRAM 
 
1. Introdução 
 
Para o estudo e identificação das bactérias é necessário isolá-las e cultivá-las, fornecendo as condições físicas e 
químicas para que elas se reproduzam e aumentem seu inóculo. O cultivo de bactérias é feito no meio de cultura, meio 
que fornece os nutrientes e condições químicas adequadas para seu crescimento, sendo que a maioria das bactérias 
cresce neles. Há vários tipos de meios de cultura, classificados quanto ao seu estado físico, finalidade e características. 
Quando uma amostra é coletada e levada ao laboratório clínico a fim de realizar sua análise microbiológica, o primeiro 
passo é o cultivo da amostra em um meio de cultura simples, permitindo o crescimento das bactérias presentes, 
denominado de cultivo simples. Após o crescimento, as bactérias da amostra são sujeitas a testes, como a coloração de 
Gram, e cultivos secundários em meios que promovem o isolamento e identificação da bactéria-alvo. 
 
2. Objetivos 
- Aprender a preparar diferentes meios de cultura. 
- Realizar semeadura primária de microrganismos. 
- Realizar coloração de GRAM. 
- Aprender a caracterizar microrganismo. 
 
3. Local da Prática 
 
 Laboratório de Microbiologia da FIT/UNAMA. 
 
4. Material e métodos 
4.1. Materiais: Balança, papel alumínio, liófilo para meio de cultura, água destilada, placas de petri, autoclave, balão 
de vidro, fita adesiva de papel, algodão, papel madeira, bico de Bunsen ou lamparina, estufa, Becker, Tubo de ensaio, 
amostras preservadas de microrganismos, Agulha de semeadura (alça de platina), swabs estéreis; Coloração de Gram 
(lugol, álcool-acetona, cristal violeta, fucsina, água destilada, Lâmina, lamínula, Microscópio óptico. 
 
4.2. Métodos: 
 
I. Preparo do meio de cultura. 
 
Preparar conforme indicação do Fabricante: 
- Realizar cálculo da quantidade de meio de cultura g/ mL de água destilada (conforme especificações do fabricante); 
• Volume de suporte por placa: 20 mL. Ex: 2 placas de meio de cultura à base de Manitol. 
• 1 placa = 20 mL 
• 2 placas = x mL? 
• X = 40 mL de água 
• 111 g = 1 L (1000 mL) 
• X g = 40 mL 
• X = 4,44 g de Manitol 
2 
 
- Aferir a massa do meio de cultura em balança analítica; 
- Dissolver o meio de cultura em água destilada; 
- Misturar a solução por 8 a 10 minutos; 
- Colocar a solução em Elemayer e tampá-los com algodão, papel madeira e fita adesiva; 
- Esterilizar o meio antes de usar, levando-o à autoclavagem; 
- Esperar esfriar o meio de cultura; 
- Despejar o meio de cultura em placas de petri, sempre próximo ao Bico de Bunsen ou lamparina. 
 
 
II. Plantio primário em meio de cultura sólido. 
 
 
 
- Identificar os meios de cultura; 
- Flambar a alça de platina (bacteriológica) no bico de Bunsen; 
- Semear a amostra biológica, em 3 áreas na placa de Petri, em zigue-zague, afundando e flambando a alça de platina a 
cada mudança de área. Realizar esse processo num raio de 10 cm da chama azul do Bico de Bunsen; 
 
 
 
Fig. 2- forma das estrias no meio de cultura sólido. 
 

Encubar em estufa a 37°C, até haver o crescimento bacteriano. 
 
III. Coloração de Gram. 
- Identificar as lâminas com o nome as iniciais do acadêmico e data; 
- Preparar o esfregaço para coloração de Gram. Com a alça de platina, adicionar uma gota de solução salina na lâmina, 
coletar 1 colônia do meio de cultura e misturar na gota, dissolvendo a colônia. Realizar ambos os processos num raio 
de 10 cm da chama azul do Bico de Bunsen, flambando a alça a cada processo; 
 
FACULDADES INTEGRADAS DO TAPAJÓS 
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICOS E DA SAÚDE 
CURSO DE ENFERMAGEM 
 
Curso: Enfermagem Período: 1º Período 
Semestre: 2018-1 Disciplina: MICROBIOLOGIA BÁSICA 
Docente: MSc. Telma Lélia Gonçalves Schultz de Carvalho 
 
- Fixar a amostra do esfregaço utilizando a chama do Bico de Bunsen ou da Lamparina; 
- Cobrir o esfregaço com Violeta Genciana (corante principal) - 1 minuto; 
- Desprezar o corante ou lavar com água destilada; 
- Cobrir o esfregaço com Lugol (mordente) - 1 minuto; 
- Lavar com água destilada; 
- Descorar a amostra com álcool-acetona (descorante), até que não escorra mais a violeta genciana; 
- Lavar com água destilada; 
-Cobrir o esfregaço com Fucsina ou Safranina (corante de fundo ou contracorante) - 30 segundos. 
- Lavar com água destilada e esperar secar. 
 
 
III. Análise microscópica. 
- Analisar no microscópio, com o condensador de luz alto e em objetiva de 100x, usando óleo de imersão. 
- Descrever os resultados. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
4 
 
ESQUEMAS DO MATERIAL VISUALIZADO 
 
 
Aumento de 40X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Aumento de 100X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Aumento de 400X 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Aumento de 1.000X