Aula 2 Biofísica Microscopia

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Microscópio Óptico 
Curso de Fisioterapia– 1º Período
Disciplina: Biofísica
Profª: Dra. Mizia Saboia 
Email: prof.miziasaboia@gmail.com
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MICROSCOPIA 
Microscópio óptico
Microscópio eletrônico
Aumento 100 a 1500 vezes
Aumento 5 mil a 500 mil vezes
Primeiros instrumentos ópticos
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MICROSCOPIA
 Ciência que estuda os métodos e as aplicações em que se usa o Microscópio para observação de objetos, ou pormenores de objetos, com dimensões inferiores ao limite de resolução do olho humano (0,1 mm).
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A história do microscópio óptico começa na antiguidade clássica, com a lente de aumento simples, e apresenta um “renascimento” no séc. XVII.
A História do Microscópio
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Os primeiros microscópios ópticos datam de 1600, mas é incerto quem terá sido o autor do primeiro. A sua criação é atribuída a vários inventores: Zacharias Janssen, Galileu Galilei, entre outros. A popularização deste instrumento é atribuída a Anton van Leeuwenhoek.
A História do Microscópio
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Robert Hooke, estudioso inglês, foi o primeiro (em 1665) a observar células. Para tal valeu-se de um rudimentar microscópio, idealizado anos antes por um outro estudioso, Anthony Van Leeuwenhoeck.
A História do Microscópio
 Hooke observou cortes finos de cortiça, que se apresentavam ao microscópio com um aspecto similar a pequenos favos de mel empilhados. A cada um destes favos Hooke atribuiu a designação de cellulae (células).
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Assim, à medida que se dava a evolução do microscópio óptico, também o conhecimento da constituição dos diferentes organismos ia evoluindo. 
A ciência atravessava uma fase de grande desenvolvimento, que viria a culminar no séc. XIX.
Durante todo este período a preocupação dos homens da ciência centrava-se não só no aperfeiçoamento dos sistemas ópticos, mas também na evolução das técnicas inerentes à preparação do material para observação.
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Em meados do século passado, o aparecimento do microscópio electrónico e, mais recentemente, do microscópio confocal laser, associados a sistemas computadorizados de análise de imagem, contribuíram para o avanço da biologia celular e molecular, continuando assim o conhecimento iniciado por Hooke.
Adaptado de Gonçalves et al, 2002
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MOC – Microscópio Óptico Composto
MET – Microscópio Electrónico de Transmissão
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Escalas e Tamanho de algumas estruturas
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Microscópio Óptico
 MICROSCÓPIO ÓPTICO
 Serve para ampliar um objeto.
 Funciona com um conjunto de lentes (ocular e objetiva) que ampliam a imagem.
 A Iluminação é natural ou artificial.
 É constituído por uma parte mecânica que serve de suporte, e uma parte óptica, constituídas por três sistemas de lentes: o condensador, a objetiva e a ocular.
 MICROSCÓPIO ÓPTICO
 - CONSTITUIÇÃO
Ocular
Canhão
Revólver
Objectivas
Braço
Platina
Fonte luminosa
Diafragma
Pé ou base
Parafuso macromético
Parafuso micromético
Pinças
Condensador
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Oculares
Ampliam a imagem fornecida pelo sistema de objetivas.
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A parte óptica é constituída por:
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Objetivas
Amplia a imagem do objeto que está a ser observado. 
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A parte óptica é constituída por:
OBS: A ampliação total dada pelo microscópio é igual ao produto da ampliação da objetiva pela ampliação da ocular.
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Diafragma
Regula a intensidade da luz no campo visual do microscópio. 
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A parte óptica é constituída por:
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Condensador
Distribui regularmente no campo da preparação a luz que atravessa o diafragma 
A parte óptica é constituída por:
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Fonte de Luz
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A parte óptica é constituída por:
OBS: Lâmpada (iluminação artificial), ou um espelho que refllete a luz solar (iluminação natural). 
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Canhão ou tubo
Serve de suporte ao sistema ocular
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A parte mecânica é constituída por:
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Base ou pé
Constitui a base de suporte de todos os elementos do microscópio. 
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A parte mecânica é constituída por:
Assegurando a sua estabilidade.
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Braço
Serve de suporte à platina e ao revólver. 
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A parte mecânica é constituída por:
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Platina
Serve de suporte à preparação a observar. Tem uma abertura na pane central (janela da platina). 
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A parte mecânica é constituída por:
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Revólver
Serve de suporte às objectivas e permite a sua mudança.
A parte mecânica é constituída por:
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Parafusos Macrométrico e Micrométrico
Permite movimentos (de maior ou menor amplitude) de aproximação ou afastamento entre a preparação e as objectivas. 
A parte mecânica é constituída por:
CARACTERÍSTICAS DA IMAGEM
Antes
Depois
Ampliada
Simétrica
Invertida
Virtual
 A luz, projetada através do objeto de observação, passa pela lentes da objetiva e da ocular e chega ao olho do observador, onde é percebida com a imagem ampliada 
Trajeto de Luz
Imagens obtidas 
Fungos 
Protozoários 
Bactérias 
Poder de resolução 
É a capacidade de separar detalhes 
É expresso pelo limite de resolução, que é a menor distancia que deve existir entre dois pontos para que eles apareçam individualizados. 
Ex.: 
2μm
Resolução 1μm 
Resolução 4μm 
 Multiplicando o aumento fornecido pelo aumento da objetiva, podendo calcular o valor final da ampliação. 
Uma ocular de 10 x com uma objetiva de 50 x o valor final da ampliação será 500x
Potencia das Lentes 
X
Exercício
Quando se usa microscópio, é importante de quanto o instrumento ampliou a imagem do objeto. Se, por exemplo, na ocular estiver marcado 5x e na objetiva 12x, a ampliação é de:
17 diametro (12x + 5x).
7 diametro (12x - 5x).
60 diametro (12x x 5x).
2,4 diametro (12x / 5x)
Exercício 
Uma célula com diâmetro de 10 μm (ou 0,01mm) foi fotografada ao microscópio óptico. Qual o diâmetro dessa célula em uma fotomicrografia ampliada 1.000 vezes?
1mm.
1cm
10cm
100cm
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Na MO temos lentes de vidro que desviam o plano da luz. As lentes do ME são eletromagnéticas e permite direcionar o fluxo de elétrons 
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Quando se fala em microscopia ótica se fala de luz e quando se fala em microscopia eletrônica se fala em feixes de elétrons. 
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Estruturas com tamanho menor que 1mm não serão visíveis ao olho humano. 
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A finalidade do condensador é projetar um cone de luz sobre as células que estão que estão sendo examinado no microscópio. Após atravessar a célula, esse feixe luminoso, em forma de cone, penetra na objetiva. A objetiva projeta uma imagem aumentada no plano focal da ocular, que novamente a amplia. Por fim a imagem fornecida pela ocular pode ser percebida pela retuna.
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A finalidade do condensador é projetar um cone de luz sobre as células que estão que estão sendo examinado no microscópio. Após atravessar a célula, esse feixe luminoso, em forma de cone, penetra na objetiva. A objetiva projeta uma imagem aumentada no plano focal da ocular, que novamente a amplia. Por fim a imagem fornecida pela ocular pode ser percebida pela retina, como uma imagem situada a 25cm da lente ocular, ou então pode ser projetada sobre a tela ou uma chapa fotográfica. A ampliação total dada por um microscópio é igual ao aumento da objetiva multiplicado pelo aumento da ocular. 
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Estruturas analisadas no MO são delgadas, por isso as amostras são coradas melhorando a visualização. 
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