Microscopia Confocal - BioCel

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Microscopia Confocal
Mestrando: Gudrian Ricardo Lopes de Almeida
Universidade Federal de Santa Catarina
Centro de Ciências Biológicas
Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências
Princípio
Preparo da amostra biológica
Formação da Imagem
Vantagem – Cortes Óticos
Possibilidade de criar seções óticas seriadas (0,5 a 1,5 micromêtros – μm) através dos espécimes fluorescentes da amostra.
(FELLERS, 2013).
Vantagem
 Multi-dimensional – rotação 360º
(FELLERS, 2013).
DESVANTAGEM
Desvantagem - Fotodegradação
Transferência de Energia de Ressonância por Fluorescência (FRET)
Uma célula-alvo
 - HeLa Cervical Carcinoma Cells Labeled with Alexa Fluor Dyes and TO-PRO-3
Immunofluorescence with mouse anti-alpha-tubulin was employed to visualize details of the microtubule network in a log phase monolayer culture of HeLa adenocarcinoma cells. The secondary antibody (goat anti-mouse IgG) was conjugated to Alexa Fluor 488 and mixed with Alexa Fluor 546 conjugated to phalloidin to simultaneously image tubulin and the actin cytoskeleton. Nuclei were counterstained with TO-PRO-3, a carbocyanine monomer with long-wavelength red fluorescence. 
Uma célula-alvo
Figure 6 DiI-labeled mossy fibers in a live brain slice prepared from a 3-week-old rat. 
(A) Lowmagnification view showing site of dye injection (*) near the dentate gyrus, which is the location of the granule
cell bodies and the source of the mossy fibers. Note the tight bundle of labeled mossy fibers (arrowhead) that
extend from the dentate gyrus into area CA3. Scale bar, 100 μm.
Parte Prática
Simulador de Microscópio Confocal:
http://www.olympusmicro.com/primer/virtual/confocal/index.html
Referências
Thomas J. Fellers. Introduction to Confocal Microscopy. OLYMPUS, Microscopy Resource Center. Acesso em 05 de julho de 2015. Disponível em: 
http://www.olympusmicro.com/primer/techniques/confocal/confocalintro.html
John M. Murray et, al. Laser Scanning Confocal Microscopy. OLYMPUS, Microscopy Resource Center. Acesso em 06 de julho de 2015. Disponível em:
<http://www.olympusmicro.com/primer/virtual/confocal/index.html>
Thaniele M. Ramos. Potencialidades da microscopia eletrônica (transmissão e varredura) e microscopia confocal como ferramentas para análises de amostras biológicas. UFRGS – Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Porto Alegre, 2013.
Michael E. Dailey. Optical Imaging of Neural Structures and Physiology: Confocal Fluorescence Microscopy in Live Brain Slices. Universidade de Iowa. Iowa, 2002.
OLYMPUS. Cells in Culture: Confocal Microscopy Digital Image Gallery. OLYMPUS, Microscopy Resource Center. Acesso em 06 de julho de 2015. Disponível em: 
< http://www.olympusmicro.com/galleries/confocal/cellsincultureindex.html#>