Identificação de cocos gram positivas

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01/05/2015
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Disciplina: Bacteriologia clínica
Profª Drª Ana Paula Rocha 
profanapaularocha@outlook.com
Abril/2015
Identificação de cocos Gram positivos
Cocos Gram positivos - Famílias
Micrococcaceae – Catalase positiva
Streptococcaceae – Catalase negativa
Aspecto morfotintorial – Coloração de Gram
StreptococcusS taphylococcus
Famílias e Gêneros
Micrococcaceae
§ Micrococcus e Planococcus (Aeróbios estritos) 
§ Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus Staphylococcus e Stomatococcus (Anaeróbios Facultativos)
Streptococcaceae
§ StreptococcusStreptococcusStreptococcusStreptococcus
§ EnterococcusEnterococcusEnterococcusEnterococcus
(Anaeróbios Facultativos)
(Anaeróbios estritos)§ Peptococcus
§ Peptosptreptococcus
Staphylococcus
Principais espécies
§ Staphylococcus aureus
§ Staphylococcus epidermidis
§ Staphylococcus saprophyticus
§ Staphylococcus capitis
§ Staphylococcus haemolyticus
Staphylococcus
Características
§ 0,5 à 1,5 µm de diâmetro
§ Crescem bem em meios comuns, pH 7,4 a 37ºC
§ Colônias opacas, amarelas, cremes ou esbranquiçadas
§ Algumas cepas podem produzir β hemólise em ágar
sangue à Característica não é critério de classificação
da espécie.
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Staphylococcus
Componentes estruturais
§ Cápsula
§ Parede celular (peptidoglicano)
§ Ácido teicoico
§ Proteína A
§ Membrana citoplasmática
Staphylococcus
Enzimas
§ Catalase
§ Coagulase
§ Hialuronidase
§ Fibrinolisina (estafiloquinase)
§ Lipases
§ Nucleases
§ Penicilinase
Staphylococcus
Toxinas
§ Hemolisinas α,β,δ,γ e leucocidina panton-valentine (p-v)
§ Esfoliatinas A e B (estável e label)
§ Enterotoxinas (A à E) e (G à I)
§ Toxina TSST-1 (síndrome do choque tóxico)
Staphylococcus aureus
Patógeno humano mais importante entre os
estafilococos.
Embora faça parte da microbiota normal, pode
produzir infecções oportunistas.
Staphylococcus aureus - Manifestações clínicas
Foliculite
Furuncúlo
Terçol
Impetigo
Ferida cirúrgica
Pé diabético
Bacteremia e sepse
Endocardite
Pneumonia
Osteomielite
Artrite
Síndrome da pele escaldada
Síndrome do choque tóxico
Intoxicação alimentar
Staphylococcus aureus - Manifestações clínicas
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Staphylococcus– Identificação Laboratorial
Material biológico
Exame direto
Cultura
Identificação bioquímica
Antibiograma
Staphylococcus– Identificação Laboratorial
Prova da catalase
Coagulase ligada e livre
Teste da DNAse
Prova da novobiocina
Biologia Molecular
Staphylococcus– Identificação Laboratorial
Prova da catalase
2 H2O2 2 H2O + O2
catalase
Staphylococcus– Identificação Laboratorial
Prova da coagulase – Coagulase em lâmina
Verificar se o microrganismo
possui a coagulase (ou fator
aglutinante) ligada na superfície da
parede celular, que reagindo com o
fibrinogênio do plasma, causa a
coagulação do mesmo.
Resultado negativo deve ser
confirmado pelo teste de a
coagulase em tubo.
Staphylococcus– Identificação Laboratorial
Prova da coagulase – Coagulase em tubo
Verificar se o microrganismo possui a coagulase (ou fator aglutinante)
livre e ligada, que, reagindo com um fator plasmático, forma um
complexo que atua no fibrinogênio do plasma formando a fibrina.
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Staphylococcus– Identificação Laboratorial
Crescimento em ágar manitol
Positivo à Torna o meio AMARELO
Negativo à Não altera a cor (rosa)
Staphylococcus– Identificação Laboratorial
Prova DNase
Verificar se o microrganismo possui a
enzima desoxiribonuclease (Dnase) que
degrada o ácido nucleico (DNA).
Staphylococcus– Identificação Laboratorial
Prova da novobiocina
S . epidermidisS . saprophyticus
Esquema de diferenciação das espécies de
Staphylococcus sp mais frequentemente
encontrados em infecções em seres humanos
EspéciesEspéciesEspéciesEspécies CatalaseCatalaseCatalaseCatalase CoagulaseCoagulaseCoagulaseCoagulase ManitolManitolManitolManitol NovobiocinaNovobiocinaNovobiocinaNovobiocina
S . aureus + + + Sensível
S . epidermidis + - - Sensível
S . saprophyticus + - - Resistente
Streptococcaceae
Estreptococos
Enterococos
Aerococos
Streptococcus – Características
Cocos Gram positivos aos pares e cadeias
Hemolíticos ou não
Anaeróbios facultativos
Catalase negativo
Carboidrato grupo-específico
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Streptococcus – Classificação
Padrão de hemólise à α, β, γ
Grupos sorológicos (Rebeca Lancefield) à A, B, C, D,
F,G
(1984 à Enterococcus)
Propriedades bioquímicas
Streptococcus – Classificação
Grupo A à Streptococcus pyogenes
GRUPO B à S . agalactiae
GRUPO C à S . dysgalactiae, S . equis
GRUPO D à Enterococcus spp.
GRUPO F à S . milleri
Streptococcus pyogenes
Manifestações clínicas
Faringite, otite, sinusite
Erisipela, impetigo, piodermite
Febre puerperal
Fascite necrotizante
Streptococcus pyogenes
Manifestações clínicas
Streptococcus pyogenes
Doenças toxigênicas
Febre escarlatina
Síndrome do choque tóxico
Febre reumática
Glomerulonefrite aguda
Streptococcus pyogenes
Determinantes antigênicos
Carboidrato grupo específico (Antígeno de grupo A)
Proteína T, M, R
Patogenicidade
Toxinas A, B, C
Hemolisinas (Estreptolisinas) O e S
Enzimas: hialuronidase, estreptoquinase
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Streptococcus pyogenes
Diagnóstico laboratorial
Bacterioscopia
Detecção antigênica
Cultivo
Provas de identificação
Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA)
Provas de identificação de Streptococcus pyogenes
(Grupo A)
Hemólise
Catalase
Bacitracina 0,04u
PYR (L-pirrolidonil-ß-naftilamida)
Provas de PYR 
O teste de PYR determina a atividade da
enzima pirrolidonil arilamidase.
S . pyogenes e Colônias β-hemolíticas de
enterococos hidrolisam enzimaticamente o L-
pirrolidonil-ß-naftilamida (PYR)
Revelador à Pirrolidonilarilamidase
Prova de sensibilidade à bacitracina
O teste tem a finalidade de diferenciar S . pyogenes de
outras cepas do grupo A ou de outras espécies com colônias β-
hemolíticas PYR positivas à S . pyogenes é sensível a
bacitracina.
Streptococcus agalactiae (Grupo B)
Microbiota (TGI e genital)
Sepse e pneumonia do neonato
Meningite
Endometrite e Infecção do Trato Urinário (ITU)
Mastite em bovinos
Streptococcus agalactiae (Grupo B)
Antígenos polissacarídicos capsulares
Sorotipos Ia, Ib, II, III, IV
Sorotipo III (infecções)
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Hemólise
Bacterioscopia
Detecção do antígeno
Cultivo
Provas de identificação
Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA)
Provas de identificação de Streptococcus agalactiae
(Grupo B)
Provas de identificação de Streptococcus agalactiae
(Grupo B)
CAMP-TEST
TESTE DO HIPURATO
Christie
Atkinson
Munch
Peterson
CAMP-TEST
O teste visa a identificação de cepas de S .
agalactiae (grupo B). Estas cepas produzem o fator CAMP
que atua sinergicamente com a β-hemolisina produzida
por Staphylococcus aureus em ágar sangue.
Prova do Hipurato de Sódio
Verificar a hidrólise do
hipurato:
Detecção do benzoato de
sódio à cloreto férrico
Detecção da glicina à
ninhidrina
Hipurato de sódio Glicina + Ácido BenzóicoHipuricase
Streptococcus pneumoniae
Pneumonia
Bacteriemia e sepse
Meningite, sinusite e otite
Empiema
Pericardite e endocardite
Peritonite primária
Streptococcus pneumoniae
Determinantes patogênicos
Antígeno da cápsula (polissacarídeo)
Ácido teicóico (polissacarídeo)
Proteína A de superfície
Protease IGA2
Neuraminidase
Pneumolisina
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Provas de identificação de
Streptococcus pneumoniae
Bacterioscopia
Hemólise
Prova da optoquina (disco de 6 mm contendo 5 µg da
droga)
Bile solubilidade
Streptococcus pneumoniae
Colônias alfa hemolíticasem ágar sangue
Sensibilidade a optoquina
Presença de halo ≥ 14 mm indica que a cultura é
sensível à optoquina à Streptococcus pneumoniae
Bile solubilidade
Detergentes fracos, como os sais
biliares desoxicolato de sódio ou
taurocolato de sódio têm a
capacidade de lisar seletivamente
o S . pneumoniae em fase logarítmica
do crescimento.
Esquema de diferenciação das principais categorias 
ou espécies de estreptococos encontrados em 
espécimes clínicos de origem humana
EspéciesEspéciesEspéciesEspécies CatalaseCatalaseCatalaseCatalase HemóliseHemóliseHemóliseHemólise BacitracinaBacitracinaBacitracinaBacitracina Optoquina Optoquina Optoquina Optoquina CAMPCAMPCAMPCAMP
S . pyogenes - b Sensível Resistente -
S . agalactiae - b Resistente Resistente +
S . pneumoniae - a Resistente Sensível -
Enterococos
Enterococcus faecalis
Enterococcus faecium
Enterococcus durans
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Enterococcus
Infecção do trato urinário
Bacteriemia e sepse
Ferimentos
Endocardite
Infecções de sítio cirúrgico e intra-abdominais
Hemólise
Bacterioscopia
Cultivo
Provas de identificação
Sorologia
Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA)
Provas de identificação de Enterococcus
Enterococcus
Colônias em ágar sangue
Enterococcus
Provas presentes na maioria das espécies do
gênero Enterococcus
Presença de cocos Gram-positivos dispostos aos
pares ou em cadeias
Catalase negativa com prova de PYR positiva
Crescimento em caldo de NaCl a 6,5%
Hidrólise da esculina
Enterococcus
Crescimento em caldo de NaCl a 6,5%
Enterococcus
Hidrólise da esculina
Escurecimento 
do meio de 
cultura
Esculetina + Bile Glicose + Esculetina
Esculetina + Ferro (Meio de cultura)