Aula 4 - Espectrofluorimetria MIA NP1

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MÉTODOS INSTRUMENTAIS DE ANÁLISE 
Espectrofluorimetria
Prof. Diego Oliveira
Belo Horizonte
2018
Faculdade de Ensino de 
Minas Gerais
Luminescência Molecular
 Emissão de luz (visível ou não) sem emissão de calor.
 Fluorescência: Emissão energética em exposição a radiação.
 Fosforescência: Emissão energética contínua após a exposição a radiação.
 Quimioluminescência: Emissão energética de uma espécie excitada 
formada após uma reação química.
Luminescência Molecular
 Emissão de luz (visível ou não) sem emissão de calor.
 Fluorescência e fosforescência: Fotoluminescência.
 Excitação: produto de absorção energética primária.
Luminescência Molecular
 Fatores que influenciam a fotoluminescência:
 Eficiência quântica F : N° moléculas luminescentes X N° moléculas excitadas; 
 Estrutura molecular: Conjugação e rigidez estrutural.
 Emissão: Transições p*  p (maior eficiência quântica) e p*  n.
Luminescência Molecular
Luminescência Molecular
 Efeito da rigidez molecular:
Luminescência Molecular
 Efeito da temperatura e viscosidade:
 Aumento de temperatura e diminuição de viscosidade aumentam colisão 
molecular: aumento de conversões externas e diminui eficiência quântica;
 Átomos pesados: diminuem fluorescência;
 Supressões dinâmicas, estáticas e de longo alcance;
 Oxigênio dissolvido: Oxidação da amostra e aumento de fosforescência.
 Efeitos de pH:
Apresenta 
fluorescência
Não apresenta 
fluorescência
Luminescência Molecular
 Relação entre fluorescência e concentração:
 A concentração entre a espécie fluorescente e a fluorescência é diretamente 
proporcional, portanto:
 F = Kc
 Onde F é a emissão de fluorescência; K é a constante dependente da eficiência 
quântica e c é a concentração.
 Necessário baixas concentrações.
 Desvios na linearidade:
 Alta concentração;
 Auto supressão: elevada colisão
 Absorção secundária: Reabsorção: lemissão coincide com algum labsorção.
Luminescência Molecular
 Instrumentação: Semelhante ao UV/Vis.
 Fonte de radiação mais intensa: Arcos de Hg ou Xe-Hg e lasers;
 Equipamentos de duplo feixe: Menor flutuação de resultados.
A medição da luminescência em um ângulo de 
90º em relação ao feixe incidente é mais 
conveniente.
Luminescência Molecular
 Fontes de radiação:
Xe: λ: 250 a 600 nm.
λmax: 470 nm.
 Fontes de radiação:
Hg: Alta pressão λ: 250 a 734 
nm.
Baixa pressão: λmax: 254 nm.
Luminescência Molecular
 Aplicações:
 Quantificação de íons metálicos;
 Moléculas orgânicas: Ácidos nucleicos, aminoácidos, fármacos, metabólitos, 
etc.
 Hifenização: técnicas cromatográficas e eletroforéticas.
 Quimioluminescência:
 Sistemas biológicos: Bioluminescência.
 Instrumentação: Sistema fechado e tubo fotomultiplicador:
 LD: Ppb e ppt: Ausência de filtros e atenuantes de radiação.
Luminescência Molecular
 Análise química:
Aplicações
• Reagentes fluorimétricos
Luminescência Molecular
luminol íon 3-aminoftalato
Quimioluminescência
Quimioluminescência – HIV
Imunofluorescência
Espectroscopia de absorção X emissão
 Emissão:
 Mais sensível, seletiva e detecta metais não detectáveis no UV/Vis;
 Menor exatidão, maior custo e limitado a espécies luminescentes.