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Histotecnologia Noções Básicas Capítulo 1 – Junqueira & Carneiro Histologia Básica (pág.s 1-22) Histologia v Definição v Interdisciplinaridade Tipos de Microscópios v Microscopia de Luz: Convencional, Contraste de Fase, Contraste Interferencial, Campo Escuro, Polarização, Fluorescência, Confocal a Laser. v Microscopia eletrônica: Transmissão, Varredura. v Outros tipos de microscópio: Tunelamento Quântico, Força Atômica, Microespectrofotometria. Preparação de tecidos para análise em microscópico PREPARAÇÃO DO TECIDO: v Fixação (Formaldeído; Glutaraldeído) v Inclusão (Parafinização; Resina) v Micrótomos v Coloração Microscopia de Luz v Resolução v Limite de resolução: 0,2µm • Milímetros (mm): 10-3m • Micrômetros (µm): 10-3mm • Nanômetros (ηm): 10-6mm • Ângstrom (Å): 10-7mm Microscópio Olimpus 1: Ocular 2: Revólver e Objetivas 3: Platina e Presilha 4: “Charriot” 5: Macrométrico 6: Micrométrico 7: Diafragma e Condensador 8: Espelho 9: Braço 10: Base Microscopia de contraste de fase e de contraste diferencial de interferência Ø Permitem a observação de células e cortes não corados Ø Índices de refração diferentes Microscopia de Florescência v Fluorescência: capacidade que certas substâncias possuem de emitir luz com um comprimento de onda maior do que o comprimento de luz recebida. v Exemplos de substâncias fluorescentes: alaranjado de acridina, fluoresceína, rodamina. Microscopia Eletrônica Ø Microscopia eletrônica de transmissão Ø Microscopia de varredura v A microscopia de varredura fornece imagens pseudotridimen- sionais das superfícies das células, tecidos e órgãos. v Fornece apenas uma visão de superfícies. Microscopia Eletrônica Cultura de Células e Tecidos Ø Culturas Primárias e Linhagens Permanentes Ø Pesquisa Clínica Fibroblasto de galinha infectados com Trypanosoma cruzi; coloração de Giemsa. Fracionamento Celular Organelas e outros componentes das células e tecidos podem ser separados e purificados por uma técnica denominada fracionamento celular. O coeficiente de sedimentação de uma partícula depende de seu tamanho, forma, densidade, e viscosidade do meio em que está suspensa. Histoquímica e Citoquímica v Íons (cálcio, ferro, fosfato... formando precipitados) v Ácidos nucléicos (qualitativo e/ou “quantitativo”): Feulgen; corantes básicos. v Proteínas: fosfatases (lisossomos), desidrogenases (ex.: succinodeidro-genase) e peroxidases (H2O2 + 3,3- diaminoazobenzidina). v Lipídeos (Sudan IV e Sudan Black): colesterol e seus derivados ésteres, fosfolipídeos e glicolipídeos. Histoquímica para detectar cálcio em osso Histoquímica e Citoquímica v Polissacarídeos e Oligossaca- rídeos (combinados com proteínas e lipídeos): corante de Schiff (PAS). v Imunocitoquímica: antígenos e anticorpos Problemas na interpretação de cortes histológicos Ø Artefatos e distorções Tecidos Epiteliais Capítulo 4 – Junqueira & Carneiro Histologia Básica (pág.s 66-90) Histologia Quatro tipos básicos de tecidos: v Tecido epitelial v Tecido conjuntivo v Tecido muscular v Tecido nervoso Tecido Epitelial Os epitélios são constituídos por células poliédricas justapostas, entre as quais há pouca substância extracelular. Funções: v Revestimento v Absorção v Secreção v Percepção de estímulos v Contração Características das Células Epiteliais v Lâminas Basais • colágeno, entactina, proteoglicanas e laminina • Seus componentes são secretados pelas células epiteliais, musculares, adiposas e de Schwann. • Lâmina reticular v Membranas Basais • Camada situada abaixo de epitélios visível ao microscópio de luz • Se coram pela técnica do ácido periódico-Schiff (PAS). Corte de rim mostrando as membranas basais de um glomérulo. Junções Intercelulares Podem ser classificadas como: v Junções de adesão-zônulas de adesão, hemidesmossomos e desmossomos. v Junções impermeáveis- zônulas de oclusão. v Junções de comunicação- junções comunicantes ou junções gap. Complexo Unitivo: zônula de oclusão + zônula de adesão + desmossomos. Microscopia eletrônica Junções comunicantes • 1500Da Especializações da superfície livre das células epiteliais Microvilos § Cada microvilo mede aproximadamente 1 micrômetro de altura e 0,08 micrômetros de espessura. § Borda em escova ou borda estriada. § Intestino Delgado § Tubos Proximais dos rins Estereocílios São prolongamentos longos e imóveis de células do epidídimo e do ducto deferente. Cílios e Flagelos Cílios: dois microtúbulos centrais cercados por nove pares de microtúbulos periféricos. Flagelos: espermatozóides. Inserção: corpúsculos basais Tipos de Epitélios Os epitélios podem ser divididos de acordo com a estrutura e função. v Epitélios de revestimento v Epitélios Glandulares Epitélios de Revestimento Podem ser classificados de acordo com as características morfológicas nas camadas superficiais e com o número de camadas Simples- pavimentoso, cúbico ou prismático (colunar ou cilíndrico) Estratificado- pavimentoso, cúbico, prismático e transição queratinizado e não queratinizado Tipos de Epitélios Epitélios de Revestimento Epitélios de Revestimento Epitélio simples cúbico Epitélio simples colunar que reveste o intestino delgado Epitélios de Revestimento Epitélios de Revestimento Epitélios de Revestimento Epitélios de Revestimento Epitélio Pseudo-Estratificado Cilíndrico Ciliado • Parecem estratificados, mas todas as células se ligam a membrana basal. • Tal efeito é causado pelo formato irregular das células. • Presentes no sistema respiratório e reprodutor. Epitélios glandulares S ã o c o n s t i t u í d o s p o r c é l u l a s especializadas na atividade de secreção. As moléculas a serem secretadas são armazenadas em grânulos de secreção. E x e m p l o s : g l â n d u l a m a m á r i a , sudoríparas, salivares, sebáceas, adrenal, etc. Tipos de Epitélios Tipos de Epitélios Glandulares Classificação quanto à quantidade de células v Glândulas unicelulares e multicelulares Classificação quanto à via de secreção v Glândulas exócrinas: mantém sua conexão com o epitélio do qual se originaram. Podem ser simples ou compostas. v Glândulas endócrinas: não possuem ductos e suas secreções são lançadas na circulação sanguínea. Formação de Glândulas a partir de Epitélios de Revestimento Podem ser ainda classificadas de acordo com o modo pelo qual o produto de secreção deixa a célula sendo: Ø Merócrinas: Ex: Pâncreas Ø Apócrinas: Ex: glândulas mamárias Ø Holócrinas: Ex: glândulas sebáceas Principais tipos de Glândulas Exócrinas Ex: Intestino grosso Ex: G. sudoríparas Ex: estômago Ex: G. sebácea Ex: pâncreas Ex: G. salivar submandibular Ex: G. Brünner Biologia dos Tecidos Epiteliais v Polaridade: pólo apical e basal v Inervação v Renovação das células epiteliais v Controle da atividade glandular v Células que transportam íons: Transporte ativo, bombas de sódio, transporte trans- celular. Células que Transportam Íons v Células que transportam por pinocitose v Células serosas- grânulos de secreção (grânulos de zimogêneo). Exocitose. v Células secretoras de muco- Grânulos preenchema região apical e o núcleo fica na região basal. Células Serosas Célula Acinosa do Pâncreas Células Secretoras de Muco Células Secretoras Esquema mostrando célula secretora de esteróides v Células mioepiteliais v Células secretoras de esteróides v O Sistema Neuroendócrino Difuso: APUD (amine precursor uptake and decarboxilation). Pelo fato de serem visualizadas pelos sais de prata são chamadas de células argentafins ou argirófilas. Morfologia Geral Morfologia Geral Morfologia Geral
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