Síntese de hemoglobina

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Hemoglobina , Técnicas, Eritrograma e 
Alterações Morfológicas dos Eritrócitos 
Alberto Galdino - Biomedicina 
 
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SÍNTESE DE HEMOGLOBINA 
 
Hemoglobina 
 Substância com peso molecular de 64.500 daltons. 
 Sua molécula é um tetrâmero e cada subunidade compõem-se de uma cadeia 
polipeptídica, a globina, e um grupo prostético, o heme, um pigmento contendo ferro 
que se combina com oxigênio e confere a molécula sua capacidade de transportar 
oxigênio. 
 Função: transporte de O2 dos pulmões para os tecidos e parte do CO2 e prótons dos 
tecidos para os pulmões 
 
Diferentes Níveis de Estrutura a Molécula da Hb 
• Estrutura Primária: Sequência de aminoácidos na cadeia de globina, determinados pela 
ordem das bases nitrogenadas (A, C, T, G) no DNA. 
• Estrutura Secundária: A sequência em que estes aminoácidos estão dispostos na cadeia de 
globina determina que ela assuma uma conformação helico -hélice), que 
transforma aquilo que seria uma estrutura linear em uma espiral. 
• Estrutura Terciária: Enovelamento da α-hélice formando uma estrutura globular, 
delimitando a bolsa do heme e deixando os aminoácidos polares na superfície. 
• Estrutura Quaternária: Associação de um par de cadeias α-símiles e um par de cadeias 
β-símiles, formando um tetrâmero e delimitando uma cavidade central onde se aloja o 2,3 
DPG. 
 
Síntese da Hemoglobina 
• Início: Proeritroblastos 
• maior quantidade: eritroblastos basófilos; eritroblastos policromáticos; eritroblastos ortocromáticos 
• reticulócitos: 10 - 20 % 
• hemácia madura - não há síntese 
• heme e globina  sintetizados separadamente 
 
Principais Fatores da Eritropoese 
ERITROPOETINA: atua no estímulo da eritropoese 
VIT. B12 E FOLATOS: atua na síntese de DNA para produção de proeritroblastos e eritroblastos 
basófilos 
FERRO: atua na síntese de Hb e na maturação dos eritrócitos 
 
* Interleucina 3 (IL-3), e os hormônios tireoidianos e andrógenos, pelo seu efeito sobre o metabolismo. 
 
Produção de Eritrócitos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Síntese do Heme 
• (Mitocôndria) - Succinato+Glicina  Ác. Δ aminolevulínico(ΔALA) 
- ΔALA+ΔALA  Anel pirrólico(ALA-desidrase) 
- 4 Anéis pirrólicos  Anel Tetrapirrólico 
- Anel tetrapirrólico+Pontes CH-  Protoporfirina 
- Heme  4 anéis pirrólicos (Protoporfirina IX ) + Fe 
 
Síntese das Globinas 
• A síntese da globina se faz no ribossomo citoplasmático. A síntese de cada uma dessas 
cadeias, é controlada pelos genes α, que estão localizados no cromossomo 16, e pelos genes β, 
γ e δ, localizados no cromossomo 11. 
• Cada monômero α  141 aminoácidos. 
• Cada monômero β, γ e δ 146 aminoácidos. 
• Tetrâmero (4 cadeias Polipeptídicas)  574 aminoácidos. 
• Genes das Globinas 3 éxons e 2 íntrons 
 
Sítios de Síntese do HEME Estrutura do HEME 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Síntese da Hemoglobina 
• Processa-se no citoplasma do eritroblasto, após ter lugar à 
formação do heme e das cadeias de globina; 
• O heme é sintetizado ao nível da mitocôndria, enquanto as 
cadeias de globina se formam em ribossomos específicos do 
citoplasma. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Controle genético da Hb normal 
• As diferenças existentes entre as Hb sintetizadas durante o desenvolvimento do indivíduo 
servem para preencher as diferentes necessidades de oxigênio dessas diversas fases. 
• No início da vida embrionária e durante a vida fetal, há tipos de Hb que desaparecem após o 
nascimento. 
• Na espécie humana, as primeiras moléculas de Hb embrionárias são produzidas no saco 
vitelínico, precedendo o desenvolvimento da circulação sanguínea estabelecendo as trocas 
gasosas que são realizadas através da placenta. 
• Entretanto, na maior parte da vida fetal, o feto obtém oxigênio através da circulação 
materna devido a intima cooperação entre os vasos maternos fetais da placenta. 
 
Ontogenia das Hemoglobinas 
É o Estudo Evolutivo das Hemoglobinas Humanas Relacionado à Fase do Desenvolvimento e à 
Fisiologia de Oxigenação Específica para os Períodos Embrionário, Fetal e Pós-Nascimento. 
 
 
 
 
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RNA Polimerase do Gene Beta 
Os genes RCG contém proteínas específicas (RNA polimerase) para cada 
um dos genes ε, γ, δ, β, e atuam respectivamente nas fases 
embrionárias (até se esgotar a RNA polimerase para ε), fase fetal (até se 
esgotar a RNA polimerase para γ), e pós-nascimento nos genes β e δ, até 
o fim da vida. 
 
 
 
RNA Polimerase do Gene Alfa 
Os genes RCG também são específicos para cada um dos genes alfa: 
Ϛ (embrionário), α1 (fetal e pós-nascimento), α2 (pós-nascimento). 
 
 
Degradação da Hb 
• Esgotamento metabólico e diminuição da oxigenação da Hb; 
• Alterações degenerativas; 
• São removidos pelo sistema monocítico-macrofágico (baço, fígado e MO) 
 
 
 
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Processo Fisiológico Eritrocitário Normal 
• Um mesmo eritrócito contém de 250 a 320 milhões de 
moléculas de Hb. 
• Cada eritrócito se satura com oxigênio em seu nível máximo 
de 96% ao passar pelos pulmões. 
• Ao distribuir o oxigênio para os tecidos ele doa 1/3 desse 
oxigênio. 
 
Eritrócitos na Circulação 
(120 dias de vida, 27 a 32 pg de Hb) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2,3 Difosfoglicerato 
• A reação entre Hemoglobina e o 2,3 DPG pode ser considerada como se segue: 
Hb O2 +2,3-DPG ↔ Hb DPG + O2 
• Um aumento no nível de 2,3 DPG na hemácia aumenta a quantidade de oxigênio liberada 
pela hemoglobina em uma dada pressão parcial de oxigênio, isto é, o 2,3 DPG desvia a curva 
de dissociação do oxigênio para a direita. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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DETERMINAÇÃO DO HEMATÓCRITO 
Hematócrito (Ht ou Hct) é o volume da massa eritrocitária expressa em porcentagem (ou em 
fração decimal). O hematócrito pode ser determinado por tecnologia automática ou manual. 
 
 
 
 
 
 
 
Aparelhos para Determinação do Hematócrito 
Microcentrífuga 
•A determinação manual é baseada no empacotamento das hemácias; 
•O Ht obtido por micro centrifugação: micro hematócrito, (embora aceito) é em geral mais 
elevado (1 a 3 pontos percentuais a mais) em função da retenção plasmática entre a massa 
centrifugada; 
•Ocorre diminuição do Ht quando o anticoagulante EDTA está em excesso, pois este excesso 
desidrata os eritrócitos com consequente diminuição da massa eritrocitária diminuindo 
portanto o Ht. 
 
Determinação do Micro-Hematócrito 
•Amostra: sangue total em tubo contendo EDTA. 
1- Colocar o tubo capilar dentro do tubo contendo a amostra e deixar que o sangue penetre e 
preencha até aproximadamente 80% do tubo 
2- Preencher a parte vazia restante vedando-a com massa de modelar (de preferência de cor 
clara a fim de diferenciar do vermelho do sangue) 
 
 
 
 
 
 
 
 
3 - Colocar o capilar na microcentrifuga e centrifugar por 5-10 min a 10.000 -12.000 rpm. 
 
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4- Realizar leitura através de um escala lendo de baixo para cima o volume correspondente à 
massa eritrocitária e expressar o resultado em porcentagem. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Causas de Erro 
•Excesso de EDTA. 
•Coagulação da amostra ou sangue hemolisado. 
•Microcentrífugas com rotações alteradas. 
•Leitura incorreta dos resultados 
 
Contadores Eletrônicos 
•Nos contadores eletrônicos o Hematócrito é obtido pelo aparelho através da 
multiplicação dos eritrócitos pelo VCM (Volume Corpuscular Médio). 
Ht = no de hemácias (x 106/μl) x VCM (fl) 
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Como o hematócrito foi originado por técnicas tradicionais para permitir o cálculo do VCM; 
nestas circunstâncias (através de contadores eletrônicos), ele é preciso e contextual, porém 
inútil para o tradicional objetivo. 
 
Valores de Referência 
 
• Ht abaixo dos valores referenciais encontra-se 
nas anemias, hemorragias agudas, gravidez 
• Ht acima dos valores referenciais encontra-se 
nas poliglobulias, queimaduras, desidratação. 
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DOSAGEM DE HEMOGLOBINA 
A determinação da concentração de Hb pelos métodos manual e automatizado baseia-se no 
mesmo princípio: 
- As células são lisadas e todas as formas de Hb são convertidas em cianometahemoglobina, 
que é um componente estável e mensurável pela determinação da absorbância a 540nm. 
- Diferente da medida do Ht, que é calculado na maioria dos equipamentos, a [ ] de Hb é 
feita diretamente, tornando essa medida o parâmentro de escolha para o diagnóstico de 
anemia. 
 
Princípio: determinação colorimétrica pelo método da Cianometahemoglobina 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Método Manual 
Princípio: Utiliza-se uma solução de ferricianeto (líquido de Drabkin), que converte o ferro da 
hemoglobina (ferroso) em férrico, formando metahemoglobina, que se combina com o 
cianeto de potássio para formar cianometahemoglobina, medida em espectrofot: 540 nm. 
 
Obs.: Utiliza-se sempre um padrão cuja concentração de hemoglobina é conhecida 
Drabkin: solução de cianeto de potássio e ferrocianeto de potássio. 
 
Procedimento 
• Colocar 20 μl de amostra de sangue total em 5 ml do líquido de Drabkin em tubo de ensaio 
(utilizar micropipeta e ponteira). 
• Limpar a parte externa da ponteira com papel absorvente: lavar três vezes o interior da 
ponteira, por aspiração e expulsão. 
• Agitar, aguardar pelo menos 5 minutos e determinar a absorbância em 540 nm, zerando o 
aparelho com o próprio líquido de Drabkin (branco). 
 
Cálculos 
Hb (g/dL) = fc x absorbância da amostra 
• Fc = fator de correção 
• Fator de correção: obtido através da leitura da absorbância do padrão de hemoglobina, feito 
em triplicata. 
• Fc = concentração do padrão / média das absorbâncias do padrão 
 
 
 
 
 
 
 
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CONTAGEM DE LEUCÓCITOS E HEMÁCIAS 
 
 
 
 
 
 
 
 
A contagem de leucócitos sem diferenciação é feita por 
contadores automáticos de células sanguíneas (tecnologia automática), 
ou por câmeras de contagem de glóbulos (tecnologia manual). 
Com o advento de automação em hematologia, que já vem 
ocorrendo, cada vez mais a vários anos em grande número de 
laboratórios de análises clínicas, é cada vez mais raro, o número de 
laboratórios que fazem uso da Câmera de Neubauer para contagem de 
leucócitos. 
 
Contagem de Leucócitos pela Câmara de Neubauer 
• Técnica 
1- Pipetar 380μl da solução diluente. 
2- Acrescentar 20μl de sangue. 
3- Colocar sobre a câmara de Neubauer uma lamínula específica para a câmara. 
4- Introduzir a amostra (sangue+solução diluente) entre a lamínula e a câmara 
de Neubauer. 
5- Aguardar 1 min para os leucócitos depositarem. 
6- Realizar a contagem através de microscopia óptica, utilizando objetiva de 10 
ou 40 conforme necessidade. 
7- Contar os leucócitos posicionados nos quadradinhos dos 4 campos do 
retículo de Neubauer. 
8- O resultado da contagem será multiplicado por um fator, calculado de acordo 
com a diluição utilizada, sendo expresso por mm3. 
 
Líquido de Turk 
Líquido de Turk ácido acético glacial.....30ml 
água destilada(q.s.p).......... 1000 ml 
gotas de solução a 1% de azul de metileno 
 
 
Critério Para Contagem das Células 
 
 
Diluições utilizadas para a contagem de leucócitos 
 
 
 
 
 
Técnicas manuais 
-Baixo custo de reagentes e equipamentos 
-Muitas horas de trabalho 
 
Técnicas automatizadas 
- Grande capital 
- Rápida execução de amostras 
- Corpo técnico pequeno 
- Aumento da reprodutibilidade, precisão e exatidão 
- Maior segurança para o operador 
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Cuidados 
Obs: Nas acentuadas leucopenias utilizamos menos solução diluente a fim de concentrar mais 
os leucócitos objetivando maior facilidade na contagem e confiabilidade de resultados. Obs: 
Nas acentuadas leucocitoses fazemos o inverso, ou seja, aumentamos a diluição obtendo 
consequentemente maiores fatores de multiplicação facilitando a contagem com maior 
confiabilidade de resultados. 
 
Fórmula para Fator de Multiplicação 
FM = PC x PD 
 CC 
PC = Profundidade da câmara (que passa ser uma constante igual a 10); 
PD = Proporção da diluição (este parâmetro varia com a diluição utilizada que em geralmente é 
de 1:20 ou 1:40 por satisfazer as contagens leucocitárias rotineiramente obtidas); 
CC = Campos contados (aqui também temos uma constante igual a 4, referente aos 4 campos 
laterais da câmara de Neubauer, contendo cada um 16 quadradinhos) 
 
Valores Referenciais na Contagem de Leucócitos 
 
Diminuição abaixo dos valores de referência para as faixas 
etárias chama-se LEUCOPENIA. Aumento acima dos valores de 
referência para as faixas etárias chama-se LEUCOCITOSE. 
 
 
 
 
Contagem Manual de Eritrócitos 
• Determinação do número de eritrócitos por mm3 (ou ml) de sangue, 
em um hemocitômetro (câmara de contagem específica), após 
diluição de amostra de sangue total com líquido diluidor apropriado. 
• A contagem é feita em 1/5 do quadrante central da câmara de 
Neubauer (H1 + H2+ H3 + H4 + H5), através de cálculos que incluem o 
fator de diluição utilizado e a área contada. 
 
Procedimento 
1) 4 ml de líquido diluidor (líquido de Hayem) 
2) 20 μL de amostra (limpar cuidadosamente a parte externa da ponteira com papel absorvente) 
3) Transferir a amostra para o tubo com o líquido diluidor lavando a ponteira no líquido por 
sucessivas aspiração e expulsão da amostra. (diluição 1:200). 
4) Homogeneizar a amostra do tubo por inversão (cuidadosamente para não romper as 
hemácias). 
5) Encher a câmara de contagem e realizar a contagem; 
Área de contagem : 1/5 do quadrado 
Central Aumento : 400x 
 
Cálculo da Contagem 
Nº de eritrócitos/ mm3 = N / Vol x D 
N = número total de glóbulos vermelhos contados (H1 + H2+ H3 + H4 + H5) 
Volume = área x profundidade da câmara (0,2 mm2 x 0,1mm) = 0,02 mm3 
D = diluição (1:200) 
 
Diluentes 
Líquido de Dacie : citrato trissódico 
Líquido de Gower : sulfato de sódio 
Líquido de Hayen : bicloreto de mercúrio 
Fator de diluição: 1:200 
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Obs: Método que não deve mais ser utilizado, devido sua 
imprecisão. 
 
 
 
 
Método Automatizado 
Impedância Elétrica 
• Método baseado na determinação de mudançasna resistência 
elétrica que produzem pulsos elétricos mensuráveis. 
• O número de pulsos gerado é indicativo do número de partículas. 
• A amplitude de cada pulso é eletricamente proporcional ao 
volume da partícula. 
 
 
 
Contagem de Hemácias 
• A contagem de hemácias é comumente determinada pelos métodos de impedância ou de 
dispersão de luz; 
• Na contagem por impedância, descrita por Wallace Coulter em 1956, a amostra de sangue 
diluída em solução eletrolítica atravessa um pequeno orifício onde a corrente elétrica é 
mantida entre dois eletrodos; 
• Como a hemácia é má condutora de eletricidade, a sua passagem pela abertura aumenta a 
resistência elétrica e gera um pulso, que será maior ou menor dependendo do tamanho da 
célula. 
• O número de pulsos gerados determinará o número de hemácias na amostra, e a análise da 
amplitude dos pulsos fornecerá informações relativas ao tamanho da célula. 
• Pela técnica de dispersão de luz, a suspensão de células atravessa uma abertura em frente a 
uma fonte de luz; 
• Um fotomultiplicador converterá o sinal luminosos em impulso elétrico que será acumulado 
e contado; 
• As medidas da intensidade e do ângulo de dispersão da luz determinarão o tamanho da 
célula; 
• Ambas as tecnologias permitem que um grande numero de células seja rapidamente 
quantificadas, aumentando, assim, o nível de precisão da contagem. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Fentolitros 
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HEMOGRAMA: ERITROGRAMA 
 
 
 
 
A análise do sangue periférico pretende responder a duas questões principais: 
 A MO está produzindo um número suficiente de células maduras de diferentes 
linhagens? 
 Os processos de proliferação, diferenciação e aquisição de funções de cada tipo 
celular estão se desenvolvendo de maneira adequada em todas as linhagens 
celulares? 
Alterações nesses dois quesitos básicos estão relacionados com numerosas condições 
patológicas, e o hemograma tem como finalidade fornecer respostas a essas questões. 
A diversidade de informações, embora em geral bastante inespecíficas, que o hemograma 
pode fornecer, torna esse exame subsidiário um dos mais solicitados nas práticas clínica e 
cirúrgica. 
 
Finalidade: avaliar quantitativamente e qualitativamente os diferentes componentes celulares 
do sangue. 
• Eritrograma 
• Leucograma Análises Quantitativas 
• Plaquetas 
• Exame microscópico do esfregaço sanguíneo: Análise Qualitativa 
 
Variações Fisiológicas 
 Idade 
 Sexo 
 Raça 
 Gravidez 
 Exercícios Físicos 
Exame complementar para Diagnóstico e Tratamento 
 Doenças hematológicas 
 Processos Infecciosos e Inflamatórios 
 Emergências médicas e cirúrgicas 
 Quimioterapia e Radioterapia 
 Doenças crônicas em geral 
 
Resultados auxiliam na identificação e no acompanhamento da evolução de uma variedade de 
doenças e no monitoramento da utilização de 
medicamentos. 
 
• Avaliação eritrocitária: processos anêmicos, 
policitêmicos e alterações de forma e tamanho das 
hemácias. 
• Avaliação leucocitária: processos inflamatórios, 
infecciosos, alérgicos, parasitários e leucêmicos. 
• Avaliação plaquetária: problemas na hemostasia 
(hemorragias, trombose). 
 
 
 
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Eritrograma 
Consiste dos métodos laboratoriais que determinam os parâmetros hematológicos da série 
vermelha no sangue periférico: contagem de eritrócitos, dosagem de hemoglobina, 
determinação do hematócrito, cálculo dos índices hematimétricos e análise da morfologia 
eritrocitária. 
O eritrograma é o conjunto das análises que incluem 
 contagem de eritrócitos, 
 dosagem da hemoglobina, 
 determinação do hematócrito (ou micro-hematócrito). 
Dessas análises obtêm-se os índices hematimétricos que são importantes na classificação 
laboratorial das anemias. 
Os índices hematimétricos são três: 
  (Volume Corpuscular Médio) VCM 
  (Hemoglobina Corpuscular Média) HCM 
  (Concentração da Hemoglobina Corpuscular Média). CHCM 
 
Volume Corpuscular Médio (VCM) 
Valor hematimétrico que corresponde ao volume corpuscular médio dos eritrócitos medido 
em fentolitros (fL). É um resultado da divisão do hematócrito pela contagem de eritrócitos. 
VCM: Ht(%) x 10 
 RBC (milhões/μL) 
Os contadores automáticos, contam e medem, simultaneamente, os eritrócitos; os volumes 
corpusculares individuais são integrados, gerando um VCM, notavelmente reprodutível. 
Este índice classifica morfologicamente as anemias quanto ao volume em: 
 Microcítica 
 Normocítica 
 Macrocítica 
 
Hemoglobina Corpuscular Média (HCM) 
É um valor hematimétrico que corresponde a hemogobina média, sendo então, o total de 
hemoglobina no eritrócito) em média. Sua unidade é o pigograma (g x 10-12) e seu resultado é 
proveniente da divisão da hemoglobina pela contagem de eritrócitos. 
HCM: Hb (g/dL) x 10 
 RBC (milhões/μL) 
 
Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média (CHCM) 
É um valor hematimetríco que corresponde a concentração de hemogobina média, ou seja, a 
média da concentração da hemoglobina nos eritrócitos obtida pela divisão do valor da 
hemoglobina pelo hematócrito. A unidade do CHCM é em percentagem. 
CHCM: Hb (g/dL) x 100 
 Ht(%) 
 
Este índice classifica morfologicamente as anemias com relação ao conteúdo hemoglobínico: 
 Normocrômica 
 Hipocrômica 
 Hipercrômica 
 
Valores normais: 80 – 96 fL 
Valores normais: 27-32 pg 
 
Valores normais: 31-35 % 
 
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RDW (Índice de Anisocitose) 
• Com o emprego de contadores automáticos avançados, surgiram outros índices, dos quais o 
RDW (amplitude dos eritrócitos) tem sido útil para indicar alterações morfológicas dos 
eritrócitos, relacionados a variação no tamanho. 
• Na maioria desses aparelhos, o RDW representa o desvio padrão das medidas do tamanho 
do eritrócito, e em outros é obtido pelo coeficiente de variação (CV) do tamanho dessas 
células. 
Valores normais: 11,6 - 14,0% 
 
As fórmulas para obter esses índices são: 
VCM: Ht(%) x 10 
 RBC (milhões/μL) 
 
HCM: Hb (g/dL) x 10 
 RBC (milhões/μL) 
 
CHCM: Hb (g/dL) x 100 
 Ht(%) 
 
 
Contagem de Eritrócitos 
Eritrócitos 4,2 – 6,3 milhões/mm3 Homens 
 3,8 – 5,5 milhões/mm3 Mulheres 
 
• Poliglobulia ou Policitemia: aumento dos eritrócitos circulantes acima do número normal. 
 Relativa: hemoconcentração 
 Absoluta: produção aumentada 
•Hipoglobulia ou Oligocitemia: diminuição dos eritrócitos circulantes. 
 Perda de sangue: anemia pós-hemorrágicas 
 Destruição exagerada de eritrócitos: anemias hemolíticas 
 Produção deficiente de eritrócitos: anemia por hipofunção ou insuficiência da MO. 
 
Dosagem de Hemoglobina 
Considera-se portador de anemia o indivíduo cuja 
dosagem de hemoglobina é inferior a: 
• 13 g/dl no homem adulto 
• 12 g/dl na mulher adulta 
• 11 g/dl na mulher grávida 
• 11 g/dl em crianças entre 6 meses e 6 anos 
• 12 g/dl em crianças entre 6 anos e 14 anos 
 
Policitemia 
Aumento no volume corporal de eritrócitos circulantes 
Eritrocitose 
Aumento da concentração de eritrócitos determinada pela 
contagem do número de células, do hematócrito ou da 
hemoglobina. 
• Hemácias (milhões/uL) 
• Hemoglobina (g/dL) 
• Hematócrito (%) 
• Indices Hematimétricos: 
 Volume corpuscular médio –VCM (fL) Hemoglobina corpuscular média – HCM (pg) 
 Concentração de hemoglobina corpuscular média – CHCM (%) 
 RDW (%) 
• Morfologia Eritrocitária 
-Tamanho 
-Coloração 
-Forma 
-Inclusões 
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Contagem de Reticulócitos 
Os reticulócitos são eritrócitos jovens, recém-liberados pela MO e que ainda contêm RNA 
ribossômico. 
Pela exposição das células não fixadas a certos corantes, como a azul de cresil brilhante ou o 
novo azul de metileno, os ribossomos são precipitados e corados, aparecendo como um 
retículo. Como as células ainda estavam vivas quando foram expostas ao corante, essa 
coloração é chamada de supravital. 
 
A contagem de reticulócitos é uma técnica relativamente simples 
servindo para averiguar a velocidade de produção dos eritrócitos 
em resposta a anemias, sendo um parâmetro importante, servindo 
os valores relativos (expressos em percentagem) também de base 
para conversão em valores absolutos (expressos por milímetro 
cúbico) o qual reflete com mais fidedignidade a atividade 
eritropoética, em função de que nas anemias de um modo geral, a 
contagem em percentagem não é um parâmetro inteiramente 
confiável para averiguar a adequada resposta da MO. 
 
Técnica da contagem de reticulócitos manual 
1) Coletar 5 ml de sangue em tubo com o anticoagulante EDTA 
2) Colocar 6 gotas de sangue em um tubo de hemólise 
3) Acrescentar 3 a 4 gotas de corante azul de cresil brilhante 
4) Colocar em banho-maria à 37ºC por 20 minuto 
5) Deixar esfriar e fazer uma lâmina de esfregaço 
6) Deixar os estiraços secar à temperatura ambiente e logo após realizar leitura 
microscópica com a objetiva de imersão 
7) Dividir o campo em quatro partes facilitando assim a contagem de eritrócitos. 
 
Em campos com distribuição eritrocitária uniforme, contar de preferência um quadrante dos 
quatro e multiplicar por quatro, para ter um campo de eritrócitos. 
Proceder assim até contar 1.000 (mil) eritrócitos, o que em geral ocorre do quinto ao sétimo 
campo, contando simultaneamente em todos os campos os reticulócitos; - Realizar os cálculos 
através de uma regra de três simples, expressando o resultado em percentagem. 
 
Exemplo: 
1000eritrócitos...............................................30 reticulócitos 
100 eritrócitos.................................................X reticulócitos 
 
Obs: Para expressar o resultado por milímetro cúbico (valor absoluto), realizar a contagem 
global eritrocitária e aplicar a fórmula: 
Ret. / mm3 = % de reticulócitos x eritrócitos/mm3 
 100 
 
A Contagem de Reticulócitos: 
 Reflete o estado de atividade 
eritropoetico da MO; 
 Determinação das anemias 
hemolíticas e carenciais; 
 Avaliação da resposta ao tratamento. 
VN: 0,5 a 2,0% ou 25.000-75.000 mm3 
Hemoglobina , Técnicas, Eritrograma e 
Alterações Morfológicas dos Eritrócitos 
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Níveis de Reticulócitos e Anemia 
a) n° de reticulócitos aumentado 
 hemólise 
 perda sanguínea aguda 
 resposta de uma medula “desnutrida” a uma terapêutica específica de reposição 
b) n° de reticulócitos diminuído 
 D 
 Depressão temporária da eritropoese (agente infeccioso, drogas, toxinas). 
 
 
Classificação CINÉTICA das Anemias 
ÍNDICE DE PRODUÇÃO DE RETICULÓCITOS 
 Contagem relativa: 0,5 a 2,0% 
 Contagem absoluta: 25.000-75.000/μL 
 
 
IPR = Reticulócitos (%) x Hematócrito (%) 
 tempo de maturação 45 (%) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Leucograma 
• Leucócitos circulantes no sangue periférico: 
 Neutrófilos, eosinófilos, basófilos, 
monócitos e linfócitos 
• Leucocitose: número total de leucócitos acima do 
limite superior normal (> 11.000 mm3) 
• Leucopenia: número total de leucócitos abaixo do 
limite inferior normal (< 4.000 mm3) 
• Neutrofilia, neutropenia, eosinofilia, eosinopenia, 
basofilia, basopenia, monocitose, monocitopenia, 
linfocitose e linfocitopenia. 
Contagem de Plaquetas 
• Plaquetas: 150.000 – 450.000 mm3 
• Trombofilia (trombocitose ou plaquetose): número de plaquetas 
aumentado. 
 Aumento da produção: após hemorragias ou doença 
mieloproliferativa crônica (trombocitemia essencial; LMC) 
 Diminuição da destruição: após a esplenectomia 
• Trombocitopenia: diminuição das plaquetas circulantes 
 Menor produção: Hipofunção ou insuficiência da MO 
 Maior destruição: Púrpura trombocitopênica imunológica 
 Maior utilização: Púrpura trombocitopênica trombótica 
Eritrograma 
• Eritrograma – consiste dos métodos laboratoriais 
que determinam os parâmetros hematológicos da 
série vermelha no sangue periférico: contagem de 
eritrócitos, dosagem de hemoglobina, determinação 
do hematócrito, cálculo dos índices hematimétricos 
e análise da morfologia eritrocitária. 
• A Hgb é o dado básico do eritrograma, pois anemia 
é a sua deficiência abaixo dos limites de referência 
para a população 
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Alterações Morfológicas dos Eritrócitos 
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MORFOLOGIA ERITROCITÁRIA 
Tamanho e Coloração 
 
 
 
 
 
Estudo do Esfregaço de Sangue Periférico 
Avaliar as Alterações morfológicas dos eritrócitos. 
 
• Alterações no tamanho (ANISOCITOSE) 
 Hemácia normocítica: φ ~= 7,5 μm 
 Hemácia microcítica μm 
 Hemácia macrocítica μm 
RDW (Red Cell Distribution Width): amplitude de distribuição dos eritrócitos. 
 ↑RDW: indicativo de anisocitose
 
ANISOCITOSE 
É o aumento da variabilidade do tamanho eritrocitário que excede a observada em um 
individuo normal e sadio. Ela é uma anormalidade inespecífica, comumente 
encontrada nas desordens hematológicas. Nas contagens fornecidas por instrumentos 
automatizados, um aumento do RDW é indicativo de anisocitose. 
 
Histograma e RDW 
• São subprodutos da medida eletrônica do volume dos eritrócitos. Como os 
eritrócitos são medidos um a um, o computador do aparelho gera uma curva de 
frequência, com o volume em fentolitros na abscissa, e a frequência respectiva, na 
ordenada. 
•A curva, denominada histograma (do volume eritróide), é elucidativa das 
características da população examinada, nos sangues normais, é aproximadamente 
gaussiana e de abertura estreita. 
• Quando na abcissa a curva situa-se mais à esquerda há uma MICROCITOSE, 
e à direita uma MACROCITOSE. 
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Anisocitose Normocitose Macrocitose Microcitose 
 
 
 
 
• Alterações na cor (ANISOCROMIA) 
 Hemácia normocrômica 
 Hemácia hipocrômica 
 Hemácia hipercrômica Policromasia: presença de reticulócitos imaturos (coloração policromática) 
 
ANISOCROMIA 
Descreve uma variabilidade excessiva no grau de coloração ou hemoglobinização do eritrócito. 
Na prática significa um espectro que se estende desde a hipocromia até a normocromia. 
A anisocromia indica, comumente, uma situação de mudança, como a progressão de uma 
anemia ferropênica, ou sua resposta ao tratamento, ou, ainda, o desenvolvimento ou a 
regressão da anemia de doença crônica. 
A anisocromasia reflete-se no aumento do HDW medido por instrumentos automáticos. 
 
Normocromia Hipocromia Hipercromia 
 
 
 
 
 
Policromatofilia ou Policromasia 
Descreve os eritrócitos que têm coloração róseo-azulada, em conseqüência da captação 
simultânea da eosina (pela Hb) e dos corantes básicos (pelo RNA ribossômico). Umavez que os 
reticulócitos são células cujo RNA ribossômico absorve corantes supravitais, formando retículo 
visível, há um relacionamento entre os reticulócitos e as células policromáticas. 
 
 
 
 
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• Alteração na Forma (Poiquilocitose / Pecilocitose) 
 A célula que tem forma anormal é um poiquilócito ou pecilócito. Fala-se em 
pecilocitose, quando há um número exagerado de células de forma anormal. 
 A altitude produz certo grau de pecilocitose em indivíduos hematologicamente 
normais. 
 A pecilocitose é também uma anormalidade comum, frequentemente inespecífica, 
encontrada em várias desordens hematológicas; pode resultar da produção de células 
anormais pela MO, ou dano às células normais após serem liberadas na corrente 
sanguínea. 
 
Eritrócito Normal 
• A forma e a flexibilidade normais do eritrócito dependem da integridade do citoesqueleto 
ao qual está ligada a membrana lipídica. O aparecimento de uma forma anômala pode 
resultar de um defeito primário do citoesqueleto, ou da membrana, ou ser secundário à 
fragmentação, ou à polimerização, cristalização ou precipitação da hemoglobina. 
• A membrana do eritrócito é constituída de dupla camada lipídica, atravessada por várias 
proteínas transmembrana. 
 
 
Normócitos 
• A maioria dos eritrócitos normais tem a forma de disco bicôncavo. Na distensão corada 
apresentam um contorno aproximadamente circular, mostrando apenas pequenas 
variações quanto à forma e ao tamanho. 
• O diâmetro médio é de 7,5μm. Na área da distensão onde as células formam uma 
camada única, uma área central mais pálida ocupa aproximadamente um terço da célula. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Esferócitos Dacriócitos Equinócitos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Queratócitos Estomatócitos Eliptócitos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Esquizócitos Codócitos (Hemácias em Alvo) Queratócitos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Alterações Morfológicas dos Eritrócitos 
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• Inclusões nos eritrócitos 
Inclusões coradas podem ser vistas no interior dos glóbulos vermelhos em situações de 
eritropoese acelerada ou malformada. 
Algumas são vistas com a coloração de rotina, outras somente com colorações especiais. 
As principais são: 
 Corpos de Howell-Jolly 
 Pontilhado Basófilo 
 Corpos de Heinz 
 Inclusões de HbH 
 Siderossomos (corpúsculo de Pappenheimer) 
 Anéis de Cabot 
 Inclusões Parasitárias 
 Eritroblastos 
 Cristal de HbC 
 
Corpos de Howell-Jolly Pontilhado Basófilo Corpos de Heinz 
 
Inclusões de HbH Siderossomos (corpúsculo de Pappenheimer) Anéis de Cabot 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Inclusões Parasitárias Eritroblastos Cristal de HbC 
 
 
 
 
 
 
 
 
Grânulos azuis corados pelo violeta de metila em eritrócitos 
contendo Hb precipitada por desnaturação oxidativa. 
Grânulos de precipitado de HbH (β4) desnaturada. Grânulos de ferritina. Aparecem como minuscúlos 
grânulos escuros em forma de cacho de uva. 
Grumos de material de RNA endoplasmático, 
formam-se durante a secagem do 
esfregaço, coram-se como minúsculos e numerosos 
grânulos dispersos pelo citoplasma. 
Anel de cor púrpura, resultante de resto do fuso celular 
Resto de cromatina nuclear 
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 Rouleaux ou Empilhamento Aglutinação de Eritrócitos 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Agregados irregulares de eritrócitos aglutinados no 
sangue resfriado à TA, 
indicam presença crioaglutininas a frio. 
Ocorre em processos inflamatórios devido ao aumento das 
imunoglobulinas e do fibrinogênio. 
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