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18/08/2019 1 Genética: RNA , DNA e PROTEÍNAS Profª Ma. Maria de Fátima Lino Coelho UNIDADE 2 – SEÇÃO 2 Genoma individual • Cada um de nós é constituído de trilhões de células, e cada uma dessas células contém filamentos muito finos, com alguns centímetros de comprimento, que têm papel importante em determinar quem somos, como seres humanos e como pessoas. • Esses filamentos intracelulares importantíssimos são compostos de DNA. Toda vez que a célula se divide, seu DNA é replicado e distribuído igualmente entre as duas células-filhas. • Assim, o conteúdo de DNA dessas células – que chamamos de genoma – é conservado. Esse genoma é um conjunto essencial de instruções, na verdade uma biblioteca completa de informações, que as células usam para se manter vivas. Estrutura de um nucleotídio. A molécula tem três componentes: um grupo fosfato, um açúcar (nesse caso, desoxirribose), e uma base nitrogenada (nesse caso, adenina). • Uma molécula de DNA bifilamentar costuma ser denominada dúplex. • Watson e Crick descobriram que os dois filamentos de um dúplex de DNA se enrolam um no outro, criando uma configuração em hélice • Essas moléculas helicoidais podem ser extraordinariamente grandes. Algumas contêm centenas de milhões de pares de nucleotídios, e seu comprimento total ultrapassa 10 cm. • Não fossem elas extremamente delgadas (cerca de um centésimo de milionésimo de centímetro) NA, molécula bifilamentar unida por pontes de hidrogênio entre as bases pareadas. A. Representação bidimensional da estrutura de uma molécula de DNA constituída de cadeias de nucleotídios complementares. B. Molécula de DNA apresentada como dupla-hélice. DNA como material genético • REPLICAÇÃO DO DNA | PROPAGAÇÃO DA INFORMAÇÃO GENÉTICA O material genético de um organismo é transmitido da célula-mãe para as células-filhas durante a divisão celular. Também é transmitido dos pais para a prole na reprodução. A transmissão fiel do material genético de uma célula ou um organismo para outro depende da capacidade de replicação das moléculas de DNA bifilamentar. A replicação do DNA é extraordinariamente exata. Moléculas constituídas de centenas de milhões de pares de nucleotídios são duplicadas com poucos erros ou até mesmo sem erros. O processo de replicação do DNA baseia-se na natureza complementar dos filamentos que constituem as moléculas bifilamentares de DNA. Esses filamentos são mantidos unidos por ligações de hidrogênio relativamente fracas entre pares de bases específicos – A com T e G com C. Quando essas ligações se rompem, os filamentos separados servem de molde para a síntese de novos filamentos. Esses novos filamentos são montados pela incorporação gradual de nucleotídios opostos aos nucleotídios dos filamentos usados como molde. A sequência de nucleotídios de um filamento que está sendo sintetizado é ditada pela sequência de nucleotídios do filamento-molde. No fim do processo de replicação, cada filamento-molde faz par com um filamento recém- sintetizado. Assim, de uma molécula dupla de DNA original são criadas duas moléculas duplas idênticas. 18/08/2019 2 EXPRESSÃO GÊNICA | USO DA INFORMAÇÃO GENÉTICA • As moléculas de DNA contêm informações que dirigem as atividades celulares e guiam o desenvolvimento, a atividade e o comportamento dos organismos constituídos por essas células. • As informações são codificadas em sequências de nucleotídios nas moléculas de DNA do genoma. • O genoma humano é composto de 3,2 bilhões de pares de nucleotídios. Nesses e em todos os outros genomas, as informações contidas no DNA são organizadas em unidades que chamamos de genes. • Um espermatozoide humano tem cerca de 20.500 genes. Cada gene é um trecho de pares de nucleotídios ao longo de uma molécula de DNA. • Uma molécula de DNA específica pode conter milhares de genes diferentes. • Em um espermatozoide humano, os genes estão situados em 23 diferentes moléculas de DNA correspondentes aos 23 cromossomos da célula. Replicação do DNA. Os dois filamentos da molécula parental estão orientados em sentidos opostos (ver setas). Esses filamentos separam-se e novos filamentos são sintetizados usando-se como molde o filamento parental. Quando a replicação é concluída, foram produzidas duas moléculas de DNA bifilamentar idênticas. A cópia do material hereditário é possível graças a natureza complementar das fitas do DNA (pareamento de bases) Replicação: Ocorre Durante a Intérfase do Ciclo Celular Replicação do DNA • Começa em uma das extremidades da sua fita. • Imagine que a dupla hélice do DNA seja como um zíper ou forquilha que se abre começando em uma ponta, expondo as bases nitrogenadas em cada filamento. • As duas fitas antigas se desgrudam, enquanto duas novas fitas vão sendo sintetizadas e, por sua vez, se enovelam nas fitas antigas, em que cada base exposta tende a se parear com nucleotídeos livres e necessariamente com sua base complementar, A com T e G com C; formam-se com isso duas novas cadeias duplas de DNA, cada uma contendo uma fita nova e uma fita velha, por isso a replicação é dita como semiconservativa. 18/08/2019 3 • Baseado no pareamento das bases da dupla hélice do DNA. • Estrutura do DNA: contém a informação necessária para perpetuar sua sequência de bases • Para que exista a síntese de novas fitas, é necessária a adição de iniciadores conhecidos como primers (cadeias curtas de nucleotídeos) e, para que esse processo ocorra, utilizam-se dois primers, sendo um na extremidade da fita molde que servirá para conduzir a síntese da fita e outro mais para o interior da forquilha de replicação. • Na replicação do DNA, cada filamento de uma molécula bifilamentar serve de molde para a síntese de um filamento complementar • Na expressão da informação genética, um filamento de um dúplex de DNA do gene é usado como molde para a síntese de um filamento complementar de RNA A replicação do DNA é feita a partir da forquilha, exatamente onde a dupla hélice está se desenrolando e os dois filamentos estão se separando de forma contínua, com isso o DNA é então sintetizado em segmentos curtos. Para iniciar a síntese, a DNA polimerase necessita de um primer • Forquilha de replicação: Região do DNA onde ocorre a transição do DNA parental fita dupla para as novas fitas filhas duplas • Replicação: processo de biossíntese de DNA onde, a partir de uma molécula de DNA pré-existente formam-se duas moléculas filhas contendo uma das fitas da molécula mãe original. PROCESSO SEMICONSERVATIVO • A replicação produz duas moléculas completas e idênticas a partir de uma molécula de DNA original Cada dupla-hélice filha é composta de uma fita velha (conservada) e uma fita nova (recém-sintetizada) 18/08/2019 4 Replicação do DNA 1. Iniciação A dupla-hélice do DNA é muito estável e proteínas auxiliam na separação das duas fitas. 1. DNAa: Ligam-se a segmentos do DNA ricos em A=T e faz com que o DNA se dissolva, as fitas separam-se, formando regiões de DNA de fita simples; 2.Proteína de Ligação do DNA de Fita Simples (SSB): Mantém a separação das fitas e protegem o DNA de nucleases que clivam DNA de fita simples; 3.DNA-Helicase: Liga-se ao DNA de fita simples e a seguir move-se na região vizinha de dupla-fita, forçando as fitas a se Os locais onde o DNA é aberto são chamados de origens de replicação e são marcados por uma sequência particular de nucleotídeos. Replicação do DNA 2. Alongamento da cadeia DNA-Polimerase – Sintetiza a nova fita usando uma das fitas velhas como molde e catalisa a adição de nucleotídeos à fita de DNA em crescimento, verificando se foram corretamente incorporados. • Enzima DNA-Polimerase Necessita de um Primer 1. A DNA- polimerase precisa deum grupo 3'-OH para estender a cadeia de DNA Ribonucleotídeos Replicação do DNA 3. Terminação • Síntese de uma fita contínua a partir de fragmentos... O primer de RNA é alongado pela DNA- polimerase III até que outro RNA seja encontrado O primer de RNA é removido pela DNA- polimerase I (atividade 5`3` exonuclease) e a lacuna é preenchida com desoxirribonucleotídeos pela própria enzima (atividade 5`3` polimerase) A quebra restante é ligada pela DNA-ligase catalisa a ligação fosfodiéster final entre os grupos 5’-fosfato da cadeia de DNA sintetizada pela DNA- polimerase III e o grupo 3’-OH da cadeia feita pela DNA-polimerase I. Portanto.... Envolve proteínas e enzimas, sintetiza o novo DNA A DNA-polimerase: enzima responsável pela polimerização do novo DNA A sequência de nucleotídeos de uma nova fita do DNA é ditada pela fita molde As fitas novas são sintetizadas em direções opostas (contínua e descontínua) Polimerização sempre ocorre na direção 5` 3` Fragmentos são unidos e duas fitas contínuas são formadas Um primer de RNA é utilizado na síntese da nova fita (e posteriormente removido) 18/08/2019 5 Vamos resolver • A replicação do DNA ocorre onde a dupla hélice está se desenrolando e os dois filamentos estão se separando, e sempre no sentido da forquilha, ou seja, no início do zíper de replicação. • Diante do contexto, qual é o nome da enzima que demanda um primer, ou seja, uma cadeia curta de nucleotídeos posicionado para começar a síntese de DNA? A. Primase B. Helicases. C. Topoisomerases. D. Ligases. E. DNA polimerase. Transcrição e processamento do RNA • As moléculas de RNA que existem nas células são sintetizadas a partir da transcrição de trechos do DNA. • Na síntese da nova fita de RNA também é feito o pareamento das bases nitrogenadas, porém a adenina da fita de DNA pareia com a uracila da fita de RNA. Replicação Transcrição Tradução Proteína - Processo para síntese de todos os RNAs da célula - Reflete o estado fisiológico da célula - O conjunto de genes expressos em uma dada situação é variável - Processo catalisado pelas RNAs polimerases Transcrição Reversa Replicação de RNA DNA fita codificadora DNA fita molde RNA transcrito Transcrição Síntese de RNA: formação da ligação fosfodiester envolve o ataque nucleofílico do 3’ OH da cadeia crescente no fosfato do carbono 5´do ribonucleosídeo trifosfatado que será incorporado A RNA polimerase não requer um iniciador (primer) para iniciar a síntese do RNA 18/08/2019 6 Tradução do RNA • Tem início com a ligação de uma sequência específica do mRNA com o ribossomo. A formação dessa sequência desliza pelo mRNA até que apareça o código AUG para identificar o início da síntese de proteínas. • Entre o primeiro e o segundo aminoácido ocorre uma reação química conhecida como ligação peptídica, em que o primeiro tRNA ocupa a cavidade P do ribossomo, que se desloca e deixa o tRNA vazio. A partir desse processo, é posicionado o segundo tRNA, com os dois aminoácidos aderidos na cavidade P, que então libera a cavidade A para receber um novo tRNA carregado. • Todo esse processo irá se repetir até encontrar um sinal de término, ou seja, o ribossomo espera uma proteína que se liga no sítio A ao códon de terminação, mRNA (UAA, UAG ou UGA), desestabilizando o ribossomo e interrompendo o processo. Síntese Protéica 1. Ativacao do aminoacido: formacao do aminoacil-tRN A 2. Iniciacao: ligacao da subunidade pequena e do metionina-aciltRNA no sitio AUG 3. Elongacao: o polipeptideo nascente e elongado pela ligacao de novos aminoacidos 4. Terminacao: a parada na sintese se da pelo encontro de um stop codon e o polipeptideo se desliga 5. Enovelamento e processamento pos- transcricional do polipeptideo A síntese de proteínas : 1. Transcrição (núcleo) DNA RNA 2. Tradução (Citoplasma) Fromação do Polipeptídio A síntese de Proteínas consistem um unir aminácidos de acordo com a sequencia de códons presente sno RNAm
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