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Tradução Mecanismo de Síntese Protéica Linguagem nucleotídica Linguagem peptídica Código Genético É formado por trincas de nucleotídeos (códons), onde cada trinca determina um aminoácido Características do Código Genético • trincas • redundante • 1 códon de início • 3 códons de término • não é sobreposto • não é universal Código Genético não é Sobreposto Mas parece poder ser lido em mais de um quadro de leitura.... Código Genético não é Universal Os códons são lidos pelos Anti-códons do tRNA tRNA = RNA transportador Pareamento Oscilante Permite que 1 tRNA leia mais de um códon O sentido da síntese é 5´- 3 ´no mRNA ~ amino e carboxi terminal no polipeptídeo rRNA e Ribossomos Local da Tradução Estrutura Geral de um Ribossomo Sítio A – aminoacil Sítio P – peptidil – onde se inicia a tradução Sítio E - saída Etapas da Tradução 1. Ativação dos aa 2. Carregamento dos aa no tRNA 3. Formação do complexo de iniciação da tradução - Reconhecimento da sequência Shine-Dalgarno ou do CAP pela subunidade menor do ribossomo; - Entrada do tRNA – aa no sítio P - Entrada da sub-unidade maior do ribossomo 4. Elongação - Entrada do tRNA-aa no sítio A - Ligação peptídica - Translocação 5. Término 6. Processamento Ativação dos aminoácidos Aminoacil - AMP Aminoacil tRNA sintetase Ativação dos aa precede a Tradução tRNA carregando um aa Tradução em Procariotos Simultânea a transcrição Início da Tradução em Procariotos Início da Tradução em Eucariotos O RNAm possui duas características reconhecidas pelos ribossomos A iniciação em eucariotos emprega vários complexos Formação do Complexo de Iniciação em Procariotos 1. Manutenção das sub-unidades separadas por fatores de iniciação da tradução IF1 e IF3; 2. Posicionamento do códon AUG no sítio P; 3. Posicionamento do fMet tRNA no sítio P; 4. liberação dos iFs; 5. Montagem da sub-unidade maior do ribossomo Formação do Complexo de Iniciação em Eucariotos 1. Escaneamento do RNAm pela subunidade menor do ribossomo; 2. Posicionamento do códon AUG no sítio P; 3. liberação dos iFs; 4. Montagem da sub-unidade maior do ribossomo Fatores de Iniciação da Tradução Elongação da Tradução 1. Ocupação do Centro A; 2. Ligação Peptídica; 3. Translocação Término da Tradução • Fatores de liberação (RF) no sítio A quando presente códon de término; • Dissociação do complexo traducional Comparação da Tradução Polissomos RNAm é traduzido várias vezes Inhibitor Specific Effect Acting Only on Procaryotes* Tetracycline blocks binding of aminoacyl-tRNA to A-site of ribosome Streptomycin prevents the transition from initiation complex to chain-elongating ribosome and also causes miscoding Chloramphenicol blocks the peptidyl transferase reaction on ribosomes (step 2 in Figure 6-22) Erythromycin blocks the translocation reaction on ribosomes (step 3 in Figure 6-22) Rifamycin blocks initiation of RNA chains by binding to RNA polymerase (prevents RNA synthesis) Acting on Procaryotes and Eucaryotes Puromycin causes the premature release of nascent polypeptide chains by its addition to growing chain end Actinomycin D binds to DNA and blocks the movement of RNA polymerase (prevents RNA synthesis) Acting Only on Eucaryotes Cycloheximide blocks the translocation reaction on ribosomes (step 3 in Figure 6-22) Anisomycin blocks the peptidyl transferase reaction on ribosomes (step 2 in Figure 6-22) a-Amanitin blocks mRNA synthesis by binding preferentially to RNA polymerase II Inibidores da Síntese Proteica Modificações Pós-Traducionais • Modificações dos grupos amino e carboxi- terminais; • Perda da sequência sinalizadora; • Modificação de aa individuais; • Inserção de cadeias de carboidratos, • Adição de grupos isoprenil; • Proteólise; • Formação de pontes dissulfeto Localização da Síntese Proteica Livre no citoplasma Proteínas citoplasmáticas, nucleares, mitocondriais e do peroxissomo Associada ao RE Proteínas membranares, lissosômicas e de secreção Síntese Protéica no RE Ubiquitinização Marcação protéica para a degradação Estrutura primária – sequência linear de aminoácidos > MutM cana de açúcar MPELPEVEAARRALQAHCVGRRIARCAVADDAKVVVAAAGRAAFERA MVGRTIVAARRRGKNLWLQLDAPPFPSFQFGMAGAIYIKGIPVTKYK RSVVNSEEEWPSKYSKFFAELDDGLEFSFTDKRRFARVRLFDDPETV PPISELGPDALFEPMSVDNFLDSLGRKKIGIKALLLDQSFISGIGNW IADEVLYQSRIHPLQIASNLPRESCEALHRSIQAVVKYAVEVDADMG RFPKEWLFHHRWGKKPGKVNGKKIEFITAGGRTTAYVPQLQKLIGTQ SSKMIAANLERLAENGDTKDSGTEGEDADILIPKKRAATSRAARRQQ NKDTVGASSRKARGNGGGNKKPDADVEPAEPETVVTESNGEQVLDQP NSNASNKSDQVTRRSSRKVKPRK * Estrutura Secundária – organização espacial dos aa -hélice folha pregueada voltas Estrutura Terciária – enovelamento da cadeia peptídica Proteína Ras – guanine nucleotide-binding protein Estrutura Quaternária – disposição das subunidades protéicas Hemoglobina = 22 + Heme Interatoma – biologia de sistemas