Coloração de Gram

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Universidade Federal do Amazonas - UFAM 
Instituto de Ciências Exatas e Tecnologia - ICET 
Disciplina: Microbiologia Básica 
Ketlen Bastos 
Esfregaço da cultura bacteriana líquida: 
 
1. Flambe uma alça, deixe esfriar, mantendo-a próximo a chama. 
2. Retire uma amostra da cultura com a alça e deposite no centro da lâmina. 
3. Espalhe o material com a alça em movimento circular, obtendo um esfregaço 
de forma oval, uniforme e fino. 
4. Fixe o esfregaço, passando a lâmina na chama do bico de Bunsen, como se 
cortando para que o material fique bem aderido. 
 
Esfregaço de cultura bacteriana sólida: 
 
1. Flambe uma alça, deixa esfriar, mantendo-a próximo a chama. 
2. Retire uma gota da água estéril e deposite sobre a lâmina. 
3. Flambe novamente a alça, espere esfriar, e retire uma amostra da cultura sólida. 
4. Leve a amostra até a gota de água depositada sobre a lâmina, e homogeneíze 
com movimentos circulares, para obter um esfregaço de forma oval, uniforme e 
fino. 
5. Fixe o esfregaço, passando a lâmina na chama do bico de Bunsen, para que o 
material fique bem aderido. 
 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
1. Coloque a lâmina com o esfregaço sobre um suporte. 
2. Cubra a lâmina com violeta genciana (Gram I) e deixe agir por 1 minuto. 
3. Lave a lâmina em jato fraco de água corrente, do lado contrário ao esfregaço. 
4. Cubra a lâmina com lugol (Gram II), deixe agir por 1 minuto e depois lave 
novamente a lâmina. 
5. Cubra a lâmina com a solução de descorante/álcool-acetona (Gram III), 
verifique a descoloração que deve ocorrer em cerca de 15 segundos, enxaguar a 
lâmina com água 
6. Cubra a lâmina com fucsina (Gram IV), deixe agir por 30 segundos, e, 
novamente lave a lâmina com água. 
7. Seque inicialmente o lado da lâmina oposto ao esfregaço com papel toalha. 
8. Leve a lâmina ao microscópio e observe em objetiva de imersão. (Não esqueça 
de colocar uma gota de óleo para imersão sobre o esfregaço). 
 
 
 
 
 
 
 
RESPONDA: 
 
1. Desenhe o observado e coloque legendas. 
 
 
MEIO SÓLIDO MEIO LÍQUIDO 
 
 
 
2. Complete o quadro a seguir, descrevendo o que ocorre na coloração de Gram. 
 
 
 
 
3. Como você explica o comportamento das bactérias G + e G - na coloração de Gram?