Nutrição e Meios de Cultura

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Nutrição e
Meios de Cultura
Prof. Michellangelo Nunes
Microbiologia e Imunologia 
Meios de Cultura
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Nutrição dos Microrganismos
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▪ Os microrganismos necessitam de um ambiente propício com todos os
constituintes físicos e químicos necessários para seu crescimento.
▪ Macronutrientes – compostos químicos muito usado;
▪ Micronutrientes – compostos químicos pouco usado;
▪ Principais elementos são: C, H, O, N, P, S;
▪ + 50 elementos são metabolizados pelas células;
Nutrição dos Microrganismos
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Macronutrientes
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▪ Necessários em grande quantidade;
Micronutrientes
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▪ Requeridos em pequenas quantidade;
▪ Geralmente são componentes de enzimas;
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Fatores de Crescimento
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▪ Compostos orgânicos requeridos em pequenas quantidades e
somente por alguns microrganismos.
▪ Estes compostos entram na composição das células ou de
precursores dos constituintes celulares.
▪ Três grupos principais: aminoácidos; purinas e pirimidinas;
vitaminas.
▪ Ácidos graxos insaturados, colesterol, poliaminas e colinas.
Vitaminas 
requeridas pelos microrganismos e suas funções
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Meios de Cultura
Meios de Cultura
▪ É o material nutriente preparado para o crescimento de microrganismos em
laboratório (in vitro).
▪ Finalidade: isolamento de microrganismos.
▪ Existem vários tipos de meios de cultura para satisfazerem as variadas
exigências nutricionais;
▪ As exigências nutritivas estão relacionadas a uma fonte de carbono, de
nitrogênio e de sais minerais.
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Meios de Cultura
Meio de Cultura
Estado físico
Sólido
Semi-sólido
Líquido
Constituintes
Quimicamente 
definidos
Complexos
Objetivo funcional / 
Finalidade
Tipos de Meios de Cultura
quanto ao estado físico (consistência)
LÍQUIDO – ou Caldo.
Não tem agente solidificante – nutrientes em solução aquosa;
Ex. de uso: para aumentar o numero de microrganismos.
SEMI-SÓLIDO – Ágar-ágar (>0 e <1.5%)
Ex. de uso: estudos de motilidade; testes
bioquímicos;
SÓLIDO – Ágar-ágar (>1.5%).
Superfície endurecida permite a formação e isolamento de
colônias;
Ex. de uso: distinção de morfologia; conservação de cepas;
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MEIO LÍQUIDO: o crescimento de microrganismo é visualizado
pela turvação do meio.
MEIO SEMI-SÓLIDO: visualizado pela turvação; muito utilizado
para verificar a motilidade (movimento) do microrganismo.
MEIO SÓLIDO: o crescimento de microrganismo é visualizado
pela formação de colônias.
Crescimento microbiano
Crescimento microbiano
MEIO SEMI-SÓLIDO E LÍQUIDO: TURVAÇÃO
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MEIO SÓLIDO
COLÔNIAS: são milhares de células derivadas de uma única célula de
um microrganismo semeada na superfície do ágar.
TEMPO PARA VISUALIZAÇÃO DAS COLÔNIAS:
- Maioria dos microrganismos cresce de 8 a 48 horas.
Crescimento microbiano
Ágar-ágar
▪ Extraído de diversos gêneros e 
espécies de algas marinhas 
vermelhas;
▪ É um componente da parede 
celular destas algas.
▪ Quanto mais puro, mais alto o 
valor.
A consistência dos meios é dada pela 
concentração de ágar-ágar
Rodophyta
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Ágar-ágar
▪Formada de dois polissacarídeos: agarose e agaropectina;
▪ Insolúvel em água fria, porém, expande-se absorvendo água;
▪Sólido a 37ºC, permitindo o plaqueamento.
Meios Sólidos
▪ Crescimento microbiano estaciona devido a exaustão de nutrientes;
▪ Condições de ter colônias isoladas;
▪ Semeio por esgotamento;
▪ Permitem o isolamento e/ou contagem das UFC´s.
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PREPARAÇÃO
- De acordo com o fabricante;
- Técnica de preparação vem especificada no rótulo dos frascos.
PROCEDIMENTOS BÁSICOS 
para preparo dos meios de cultura sintéticos
Proveta graduada Frasco Erlenmeyer Balança de precisão
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Misturar todos os 
componentes (pó)
Aquecer para dissolver 
todos os elementos
Esterilizar
Autoclave (calor úmido)
PROCEDIMENTOS BÁSICOS 
para preparo dos meios de cultura sintéticos
Distribuir em placas de Petri
PROCEDIMENTOS BÁSICOS 
para preparo dos meios de cultura sintéticos
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Meios de Cultura: aplicações
▪ Para se conseguir um elevado número de microrganismos;
▪ Estudar as características dos microrganismos:
▪ Capacidade de crescer em diferentes meios de cultura;
▪ Aspecto das colônias
▪ Produção de enzimas
▪ Utilização de açúcares
Meios de Cultura: aplicações
▪ Realizar a identificação de microrganismos, explorando as
características bioquímicas/fisiológicas microbianas;
▪ Para identificar corretamente é imprescindível que se esteja diante de
colônias bem isoladas puras (semeio por esgotamento).
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Tipos de Meios de Cultura
• Meios quimicamente definido: tem sua composição exata conhecida;
• Meios complexos: não se pode mensurar a quantidade exata dos componentes.
• Meios de enriquecimento: geralmente líquidos, facilitam a multiplicação celular e
recuperação de microrganismos;
• Meios enriquecidos ou ricos: adicionados de substâncias nutritivas (microrganismos
exigentes);
• Meios seletivos e diferenciais: favorece ou seleciona um tipo de microrganismo e
impede o crescimento de outros (adição de corantes, antibióticos e outras substâncias);
• Meios indicadores ou bioquímicos: indicam uma propriedade importante na
identificação (fermentação, produção de enzimas);
• Meios de transporte: Mantém viável as amostras para análise.
Tipos de Meios de Cultura
▪Meios de enriquecimento: Brain Heart Infusion - BHI;
▪Meios enriquecidos/ricos: Ágar-Sangue; Ágar-Chocolate;
▪Meios seletivos/diferenciais: Ágar Salmonella-Shigella, Ágar-
Manitol Sal, Ágar Eosin Methilene Blue (EMB), Ágar-MacConkey;
Ágar-Sabouraud; Ágar-Sangue;
▪Meios indicadores ou bioquímicos: Urease, Ágar Citrato de
Simmons;
▪Meios de transporte: Cary-Blair; Stuart;
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Ágar-sangue Ágar-chocolate
Ágar Sabouraud EMB BHI
Tipos de Meios de Cultura
Ágar-MacConkey
Stuart
Técnicas de Esterilização 
em Microbiologia
Prof. Michellangelo Nunes
Microbiologia e Imunologia 
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▪ A esterilização é muito importante quando falamos em produtos
para laboratório (diagnóstico e pesquisa);
▪ Para alguns protocolos, é necessária a utilização de produtos
“estéreis”, garantindo qualidade sem a interferência de
microrganismos.
▪ Existem vários métodos de esterilização, porém o objetivo principal
consiste na eliminação das formas de vida microbiana (bactérias,
fungos, vírus e esporos).
Esterilização em Microbiologia
▪ Anti-sepsia: Inativação ou redução do número de microrganismos presentes em um
tecido vivo, com substâncias anti-sépticas.
▪ Desinfecção: Inativação ou redução do número de microrganismos presentes em
um material inanimado, não implicando na eliminação de todos os microrganismos
viáveis. Porém elimina a potencialidade infecciosa do objeto ou superfície de trabalho
(eliminação de microrganismos patogênicos).
▪ Assepsia: Impede a entrada de microrganismos em áreas de trabalho (manobras
assépticas).
▪ Esterilização: eliminação de toda e qualquer forma de vida presente em um
determinado material ou ambiente.
▪ Sanitização: é o tratamento que leva à diminuição da vida microbiana nos utensílios
e equipamentos de manipulação de alimentos até os níveis seguros de saúde
pública.
Técnicas em Microbiologia
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▪ Estufa (160ºC; 45 minutos; vidraria)
▪ Flambagem (processo de chamuscar o material á chama
do bico de Bunsen)
Oxidação das moléculas
Calor seco
◼ Autoclavagem: 121ºC; 15 a 20 minutos;
◼ Tindalização: esterilização fraccionada; 100ºC; 60 minutos; 1x por 3
dias;
Desnaturação das proteínas e rompimento das membranas lipídicas
Calor úmido
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Filtração
◼ Utilizada para esterilização de meios e soluções termo sensíveis
◼ Retenção mecânica: membranas de acetato de celulose (0,22 μm).
Radiações
◼ Radiação UV (não-ionizante): cabines microbiológicas; capelas de
fluxo laminar;◼ Radiações gama e X (ionizantes): materiais plásticos para
laboratório;
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A escolha da técnica para o cultivo de microrganismos varia de acordo
com o tipo de meio de cultura e a finalidade do cultivo, porém
algumas regras devem ser seguidas nas inoculações:
1)A agulha e alça microbiológica devem ser esterilizadas por flambagem antes
e após qualquer cultivo. Deve-se tomar cuidado para esfriá-las antes da coleta.
2)Os recipientes devem sempre ser abertos próximos à chama do bico de
Bunsen.
3)Deve-se evitar ao máximo que as tampas dos tubos e placas fiquem abertos
sob a bancada durante o cultivo.
Técnicas de semeadura
Técnica I – Meio líquido
- Primeiro, mergulha-se a alça de platina esterilizada na cultura microbiológica.
- Em seguida, a alça carregada de microrganismos deve ser mergulhada no
tubo com o meio de cultivo e agita-se a alça.
Objetivo: repique genérico para crescimento de microrganismos em meio líquido.
Técnicas de semeadura
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Técnica II – Meio semissólido
- Mergulha-se a agulha de níquel-cromo esterilizada na cultura microbiológica.
- É feita uma “injeção” com a agulha carregada de microrganismos no meio de
cultivo semissólido
Objetivo: para verificar fermentação e motilidade em algumas técnicas.
Técnicas de semeadura
Técnica III – Meio sólido (ágar inclinado)
- Mergulha-se a alça de platina esterilizada na cultura microbiológica;
- Encosta-se levemente a alça no tubo com o meio de cultura na parte mais
baixa do plano inclinado e eleva-se, fazendo estrias na superfície do ágar.
Objetivo: obtenção de intensa massa de microrganismos.
Técnicas de semeadura
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Técnica IV – Meio sólido (placa de Petri – técnica do esgotamento)
- Divide-se a placa de Petri em três partes;
- Mergulha-se a alça de platina esterilizada na cultura microbiológica.
- Devem ser feitas estrias em cada divisão, respeitando as linhas e utilizando da
melhor forma possível toda a superfície da placa.
Objetivo: obtenção de colônias isoladas; culturas puras de amostras mistas;
Técnicas de semeadura
Técnica IV – Meio sólido (placa de Petri – técnica do esgotamento)
Técnicas de semeadura
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Técnica V – Meio sólido (placa de Petri – técnica de Pour-Plate)
- Transferir 1 ml da cultura para placa de Petri vazia;
- Colocar 10-20 ml do meio fundido (e resfriado a cerca de 45-50°C) sobre a
cultura e homogeneizar suavemente com movimentos circulares, com a
finalidade de misturar o inóculo com o ágar.
- Esperar solidificar o meio.
Objetivo: é obter colônias isoladas (qualitativo) ou realizar contagem de colônias
em placas (quantitativo). Nessa técnica, deve-se tomar cuidado para não
adicionar o meio em temperatura elevada sobre o inóculo, pois isso poderá matar
as bactérias
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Técnicas de semeadura
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