Centrifugação de amostras biológicas

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UC6 - Preparar amostras biológicas
Senac - Catalão
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 * A centrifugação é um processo de separação em que a força centrífuga gerada pela rotação da amostra é usada para sedimentar sólidos em líquidos, ou líquidos imiscíveis de diferentes densidades, separando-os
* É usada em diferentes aplicações laboratoriais, industriais e domésticas
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Quando misturamos um soluto num solvente, existem três tipos de dispersões que podem ser formadas: as soluções, os coloides e suspensões.
As soluções verdadeiras são homogêneas, isto é, conseguimos observar (a olho nu ou com um microscópio) uma única fase.
Apresenta um fase
O oposto total são as suspensões, que são heterogêneas. Observamos duas fases ou mais.
óleo
água
areia
A olho nu vemos apenas uma fase branca
Já os coloides são suspensões que se situam entre esses dois tipos de dispersões. A olho nu, achamos que o coloide é uma solução verdadeira, mas, com a ajuda de um microscópio, notamos que na verdade se trata de uma mistura heterogênea.
sob o olhar do microscópio, percebemos que existem gorduras dispersas na água.
O sangue é outro exemplo de coloide. 
A olho nu parece homogênea
sob o olhar do microscópio, vemos os seus componentes.
Depois de ser centrifugado, suas partículas dispersas sedimentam-se.
 No laboratório é empregada para obter plasma e soro livre das hemácias, sedimento de líquidos biológicos, dentre outros. A etapa de centrifugação das amostras é muito importante na fase pré-analítica e deve ser perfeitamente conduzida para reduzir o risco de falhas. 
Para obtenção de soro, o sangue é colhido em tubo sem anticoagulante e deixado coagular por um período de 30 a 60 minutos, à temperatura ambiente.
Quando o tubo contiver gel separador, com ativador da coagulação, a espera pode ser de 30 a 45 minutos. Após este tempo, o tubo é centrifugado e a parte líquida, correspondente ao soro, é separada. O plasma é obtido pela centrifugação do sangue total anticoagulado. Quando for necessário o uso de sangue total ou plasma, utilizar anticoagulantes específicos, dependendo do exame a ser realizado.
Para alguns exames, além do anticoagulante, pode ser necessária a adição de um conservante. Cada uma destas frações do sangue se constitui na matriz ideal para a realização de exames específicos. 
Quando utilizar um tubo primário (com gel separador), a centrifugação e a separação do soro devem ser realizadas dentro de, no mínimo, 30 minutos e, no máximo, 2 horas após a coleta.
 São equipamentos que aplicam a força centrífuga relativa para separar as partículas de uma solução
 * Células
 * Vírus
 * Organelas
 * DNA, RNA e proteínas ...
Bancada
Clínica
4.600g
0,2 – 75 mL
17.000g
2 – 180 mL
Microcentrífuga
16.000g
0,2 – 2 mL
Alta velocidade
15.000g
30 – 500 mL
Ultracentrífuga
800.000g
10 – 60 mL
1- Escolha da centrífuga e dos tubos
 - Volume
 - Composição do tubo: plástico, vidro ...
 - Composição da amostra:
 Aquosa (plástico, vidro)
 Orgânica (vidros e certos plásticos)
2- Equilibre os tubos ***
 - Os tubos colocados frente a frente devem ter o “mesmo peso”
 - Microcentrífuga: ajuste pelo volume e não pelo peso
 - Equilibrar juntamente com tampas e suportes (partes removíveis)
 - Preencha os tubos até 1 a 2 cm da borda
3- Confira o peso ***
4- Coloque os tubos sempre na mesma orientação
 *Aba do Eppendorf 
5- Sempre colocar a cobertura do rotor
 - As centrífugas geram aerossóis
 - Quebra do tubo
 
6- Ajustar os parâmetros de centrifugação
 - Velocidade (RPM x FCR)
 - Temperatura
 - Tempo
7- Sempre espere a centrífuga alcançar a velocidade 
 máxima antes de se afastar
8- Após a centrifugação: “gentileza” para remover tubos
9- Limpe suportes e rotor
10- Secar o interior da centrífuga 
11- Folha de registros e de reserva
 - Vida útil do rotor “segurança”
 - Manutenção
12- Feche a tampa das centrífugas refrigeradas no 
 intervalo de uso para evitar condensação