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Bases celulares e moleculares dos animais domésticos – MEDICINA VETERINÁRIA Guia de Aulas Práticas PROF. DÉBORA GIDALI Adaptado de Profª Selma Cecília Bourroul O MICROSCÓPIO ÓPTICO (M.O.) O microscópio óptico compõe-se de parte mecânica e parte óptica constituída por um sistema de três lentes: condensador, objetiva e ocular. O condensador converge os raios luminosos da fonte fazendo com que incidam e atravessem as células em estudo e atinjam a objetiva. A objetiva amplia a imagem do objeto em estudo (células) que é novamente aumentada pela lente ocular (fig.1). A ampliação total é dada, então, pelo aumento da objetiva multiplicado pelo aumento da ocular. O aumento total máximo do microscópio óptico utilizado nos laboratórios é de 1000x (= objetiva 100 x ocular 10), além desse aumento mais nenhum detalhe é visualizado. O que determina a profundidade de detalhes da imagem fornecida por um microscópio não é somente o valor do aumento, mas sim seu poder de resolução, que depende essencialmente da objetiva. A ocular apenas aumenta o tamanho da imagem projetada pela objetiva. O limite de resolução indica a menor distância que deve existir entre dois pontos para que eles apareçam individualizados. 2 Para compreender o que é observado no microscópio, deve-se ter noção das dimensões e unidades de medida utilizados. As estruturas de lâminas histológicas que podem ser observadas em microscópios ópticos têm geralmente dimensões menores do que 1 milímetro (mm) e suas medidas são expressas em micrômetro ( m) que equivale à milésima parte do milímetro: 1 mm = 1000 m ou 0,001mm = 1 m O olho humano tem limite de resolução de aproximadamente 0,1mm (100 m). Portanto, dois pontos distanciados de 0,2mm (200 m) aparecerão distintos, mas se os pontos estiverem a uma distância de 0,05mm (50 m) aparecerão a olho nu como um único ponto, independente de quanto o observador se aproxime deles. As estruturas celulares geralmente têm dimensões menores do que o limite de resolução do olho humano e por isso é necessário o microscópio para sua visualização que possui um sistema de lentes cujo limite de resolução é de 0,0002mm (0,2 m). No quadro são apresentados alguns tipos celulares e suas respectivas dimensões: Estrutura Dimensão ( m) Ovócito humano 100 Célula muscular esquelética* 10 a 100 Célula muscular cardíaca* 9 a 20 Linfócito 6 a 10 Eritrócito 7,7 Bactérias 0,1 a 10 Vírus 0,05 a 0,5 Ribossomos 0,015 Membrana plasmática (espessura) 0,010 * secção transversal da célula 3 1. Defina limite de resolução de um sistema óptico. Limite de resolução é a capacidade máxima de um sistema óptico de separar detalhes, produzir imagens separadas de partículas muito próximas, é a menor distância entre dois pontos distintos para que eles apareçam separados na imagem final. 2. Cite exemplo de tipos celulares que podem ser observados a olho nu e quais podem ser observadoao microscópio óptico. As que podem ser vistas a olho nu são (óvulo humano 0,1 mm, ameba gigante de 1,2cm, Células nervosas das lulas 1 mm de diâmetro.)As que podem ser observadas ao microscopio sao (Allium cepa 240 µm, Elodea60 µm, Cortiça 32,5 µm). 3. As estruturas internas membranosas de uma célula viva podem ser observadas com: a. olho nu. b. microscópio óptico. c. microscópio eletrônico de transmissão. d. microscópio eletrônico de varredura. 4. Complete a escala de unidades usadas em microscopia: 0,00001 0,0001 0,001 0,01 0,1 1 mm ............| ............| ............| ............| ............| ............| ............| 0,001 0,01 0,1 1 10 100 1.000 µm ............| ............| ............| ............| ............| ............| ............| 4 1 10 100 1.000 10.000 nm .............| ............| ............| ............| ............| ............| ............| 5. A membrana plasmática das células, pelo fato de ter cerca de 10 nm de espessura, pode ser observada: a) no microscópio óptico. b) no microscópio eletrônico. c) a olho nu. d) com lupa. COMPONENTES DO MICROSCÓPIO ÓPTICO 1. Reconheça os componentes do microscópio e anote suas funções. UTILIZANDO O MICROSCÓPIO ÓPTICO Prof. Allysson Coelho Sampaio O MICROSCÓPIO DEVE SER ENCONTRADO COM: • Luz na intensidade mínima e apagada; • Platina abaixada; • Lente objetiva de menor aumento (4x – aro vermelho) em posição de uso. PARA LEITURA DE LÂMINAS 1. Acenda a luz (botão ON/OFF) e regule a intensidade; 2. Coloque a lâmina na platina com a lamínula voltada para cima; 3. Posicione o material sobre o feixe de luz utilizando o charriot. 5 4. Objetiva de menor aumento (4x – aro vermelho): utilize o parafuso macrométrico para focalizar o material, ou seja, visualizar nitidamente. Utilize o parafuso micrométrico para dar o ajuste fino; 5. Objetiva de médio aumento (10x – aro amarelo): geralmente utiliza-se apenas o parafuso micrométrico para ajustar o foco; 6. Objetiva de maior aumento (40x – aro vermelho): utilizar SOMENTE o parafuso micrométrico para ajustar o foco. ATENÇÃO: Se utilizar o parafuso macrométrico com a objetiva de 40x, fatalmente a lâmina será quebrada! CUIDADOS BÁSICOS Por se tratar de um aparelho óptico de precisão, o microscópio deve ser utilizado sempre com cuidado especial. Cada etapa do procedimento deve ser realizada correta e calmamente, tantas vezes quantas forem necessárias. Evite molhar a platina do microscópio. Se isso ocorrer acidentalmente, enxugue-a com papel absorvente macio. As lentes do microscópio custam quase tanto quanto o resto do aparelho. Caso ocorra algum problema, peça ajuda ao professor ou ao monitor de laboratório. PARA RETIRAR A LÂMINA OBSERVADA NUNCA abaixe a mesa (platina) se a objetiva de maior aumento (40x) estiver em posição de uso. Primeiramente utilize o revólver retornando para a objetiva de menor aumento (4x) em seguida abaixe a mesa. ANTES DE SAIR DA BANCADA: • Regule a luz até o mínimo e desligue o microscópio; • Coloque a objetiva de menor aumento (4x) em posição de uso; • Deixe a platina abaixada; • Retire qualquer material deixado por você (papel, lápis, caneta, lixo, etc.). Mantenha a bancada limpa. OBSERVAÇÕES IMPORTANTES: A objetiva de 100x (aro branco) é utilizada APENAS em aulas específicas, pois para visualizar necessita-se um óleo de imersão. Se tentar utilizar esta objetiva no momento inadequado, quebrará a lâmina. NÃO tente mexer nas partes do microscópio que você não conhece. Em caso de QUALQUER dúvida, PEÇA AJUDA ao professor ou monitor. NUNCA toque em qualquer equipamento sem prévio conhecimento, peça ajuda, aprenda antes de mexer. Assim a vida útil dos equipamentos aumenta e todos saem ganhando. QUESTÕES PARA ESTUDO 1. Das três objetivas secas do MO, indique qual delas tem maior: a) Aumento. X40 b) campo de visão. X4 c) Luminosidade. X10 6 2. Explique os motivos de pingarmos uma gota d'água entre a lâmina e a lamínula quando preparamos um material para observação ao M.O. A gota de água serve para encher o espaços entre as lâminas para que não haja bolhas de ar. 3. Por que devemos começar as observações ao M.O. sempre pelo menor aumento (4x)?Começamos sempre pelo menor aumento para conseguir focar a imagem da lâmina e evitar danos na lâmina. 4. Explique como devemos proceder para mudar o aumento da imagem observada ao microscópio. Com o auxílio do revólver consiguimos mudar as objetivas, para a observação do material em todos os almentos. 5. Explique por que não é possível a observação da membrana plasmática ao microscópio óptico. Não e possivel observar a membrana plasmática, por ser uma estrutura muito fina. 7 ATIVIDADE 01– TECIDO EPITELIAL DE REVESTIMENTO Objetivos da Atividade • Caracterização morfológica e estrutural do tecido epitelial. • Reconhecimento dos principais tipos de tecido epitelial de revestimento. Introdução A função do epitélio de revestimento é recobrir a superfície externa do corpo e interna dos órgãos ou cavidades. Assim, forma a camada mais externa da pele, o revestimento interno do tubo digestivo, do trato respiratório e dos vasos sanguíneos. Os epitélios são constituídos por células poliédricas justapostas. Geralmente essas células prendem-se firmemente umas às outras formando camadas contínuas apoiadas em uma camada de tecido conjuntivo responsável por sua nutrição. No microscópio óptico pode-se observar a membrana basal entre o tecido epitelial e o tecido conjuntivo. Os epitélios de revestimento são classificados quanto ao número de camadas – simples, pseudoestratificado ou estratificado – e de acordo com a forma das células – pavimentoso, cúbico, cilíndrico (prismático) e de transição (células globosas). EPITÉLIO ESTRATIFICADO PAVIMENTOSO NÃO QUERATINIZADO Mucosa bucal Esse tipo de epitélio é formado por várias camadas de células achatada. Nas camadas mais profundas, perto da membrana basal, as células tendem a ser cúbicas, mas aquelas da superfície são tipicamente pavimentosas (achatadas). Continuamente descamadas essas células são substituídas por outras mais novas vindas das camadas profundas. Graças à capacidade de reposição celular, o tecido estratificado forma uma camada protetora no interior dos órgãos sujeitos ao atrito, como a boca e o esôfago. EPITÉLIO ESTRATIFICADO PAVIMENTOSO QUERATINIZADO Pele A epiderme, porção mais externa da pele, é formada por tecido epitelial estratificado pavimentoso sendo que a camada córnea é a mais superficial. Formada por vários planos de células achatada, mortas e intimamente ligadas, possui grande quantidade de queratina (proteína fibrosa) que além de proteger a pele contra a invasão de agentes do meio externo, também atua contra a dessecação. Essas células descamam continuamente e, assim, como no caso anterior são substituídas por outras vindas das camadas mais profundas. EPITÉLIO SIMPLES CILÍNDRICO Intestino delgado O epitélio de revestimento apresenta células altas (cilíndricas) dispostas em uma única fileira. A irregularidade observada na mucosa, denominada vilosidade, aumenta sua superfície de absorção. Abaixo do epitélio encontra -se o tecido conjuntivo, delimitado pela membrana basal. Observação de lâminas permanentes de tecido epitelial Material Procedimento A. Prepare o microscópio para o uso. Ao iniciar com uma lâmina, focalize inicialmente com o menor aumento (40x) e pesquise o material até encontrar um bom campo de observação. B. Passe então para os aumentos seguintes (100x e 400x) e faça o desenho no aumento indicado. C. Utilize as descrições como ponto de partida para o reconhecimento do material e mostre no seu desenho as estruturas indicadas na legenda. 8 QUESTÕES PARA ESTUDO 1. Complete a tabela: N.º de Camadas de Células Forma das Células Exemplo Função SIMPLES (1 camada) Cúbico Rim Revestimento Cilíndrico (ou Prismático) Intestino Delgado Proteção, lubrificação, digestão e absorção. PSEUDO- ESTRATIFICADO (1 camada com núcleos em várias alturas) Prismático Traquéia Revestimento ESTRATIFICADO (mais de 1 camada) Pavimentoso não queratinizado Mucosa oral Reposição celular Pavimento queratinizado Pele Produção e resvetimento Transição Bexiga Empermeabilização 2. Defina membrana basal. A membrana basal é um dos elementos da matriz extracelular com grande relevância para as células epiteliais. Ela se dispõe como um tapete molecular entre o pólo basal do estrato germinativo (células basais dos epitélios) e os elementos do tecido conjuntivo. 3. Os epitélios não possuem vasos sanguíneos. Como ocorre sua nutrição? Por ser avascular , o tecido epetelial tem a nutrição de suas células feita a partir do tecido conjuntivo adjacente, por difusão. 4. O que são vilosidades? Qual sua função? As vilosidades estão presentes em partes de diversos órgãos, mas sua principal função está no sistema digestivo, em promover a absorção intestinal de nutrientes. As vilosidades do intestino são projeções microscópicas da superfície que permitem aumento da área de contato com alimento facilitando a absorção de água e nutrientes 5. Por que o epitélio estratificado pavimentoso protege o órgão do atrito? 9 Porque os órgãos são expostos a agressões físicas e infecções e os epitélios reveste as superfícies faz absorção de moléculas, secreção, percepção de estímulos, contração. 6. Quais as características da camada córnea que reveste a pele? Quais são as suas funções? ATIVIDADE 02 – TECIDO EPITELIAL DE REVESTIMENTO 21 EPITÉLIO ESTRATIFICADO PAVIMENTOSO QUERATINIZADO Pele grossa EPITÉLIO SIMPLES CILÍNDRICO INTESTINO DELGADO http://www.histologyguide.com/slideview/MH-091-thick-skin/02-slide-1.html?x=0&y=0&z=- 1&page=1 10 Aumento: 40 x Aumento: 400 x http://www.histologyguide.com/slideview/MHS-219-jejunum/02-slide- 1.html?x=0&y=0&z=-1&page=1 Aumento: 40 x LEGENDA: 1. luz do intestino 2. vilosidades 3. túnica muscular circula Aumento: 400 x LEGENDA: Coloque no campo uma vilosidade e indique: 1. enterócito 2. célula caliciforme 3. tecido conjuntivo (lâmina própria)
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