meio de cultura

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MEIOS DE CULTURA
MEIOS DE CULTURA
MEIO DE CULTURA
DEFINIÇÃO: São preparados especiais com
finalidade de cultura e isolamento de
microrganismos.
- Uma grande variedade de processo e de
preparações nutrientes é utilizada para induzir
o crescimento e as reproduções de
microrganismos.
MEIO DE CULTURA
• Não existe um meio de cultura universal para
o crescimento de todos os microrganismos.
Ex: não existe meio de cultura para
microrganismos como Treponema pallidum e
Micobacterium leprae.
OBS: Estes microrganismos só podem ser
cultivados em animais de laboratório.
MEIO DE CULTURA
NATURAIS:
Lagos Oceanos Solo
ARTIFICIAIS OU SINTÉTICOS
• São misturas nutritivas preparadas no
laboratório para o crescimento de
microrganismos.
MEIO DE CULTURA
APRESENTAÇÃO
MEIO DE CULTURA
PREPARAÇÃO
• Técnica de preparação vem especificada no
rótulo dos frascos.
• Pesar e hidratar o meio conforme as
instruções do fabricante.
MEIO DE CULTURA
PREPARAÇÃO
• Autoclavar (calor úmido) 121ºC por 15 a 20
minutos.
OBS: FILTRAGEM
- Produtos termo sensíveis
- Membranas de acetato de celulose (0,22 μm).
RECIPIENTES
PARA OS MEIOS DE CULTURA
- Placas de petri, tubos de ensaio,
garrafas, frascos, etc...
CONSTITUINTES
DO MEIO DE CULTURA
- Água: Principal solvente dos nutrientes.
- Fontes de Carbono: pode ser do CO2 ou
de nutrientes orgânicos (carboidratos, lipídeos e
proteínas).
- Fonte de energia: Carboidratos como
amido, glicogênio, monossacarídeos
CONSTITUINTES
DO MEIO DE CULTURA
- Fonte de Nitrogênio “base amino-proteína”:
peptidase: Aminoácidos, peptídeos, proteínas 
complexas e peptona.
- Fontes de oxigênio, hidrogênio, fósforo 
(fosfatos) e enxofre (sulfatos) 
- Vitaminas: Complexo B ( biotina e ácido
pantotênico).
CONSTITUINTES
DO MEIO DE CULTURA
- Sais tamponantes: Fósforo (fosfatos),
enxofre (sulfato) e citrato.
- Sais minerais: Cálcio, Ferro, Magnésio
- Fatores de crescimento: sangue, soro e
extrato de levedura.
CONSTITUINTES
DO MEIO DE CULTURA
- Agentes seletivos: Químicos, Corantes, e
Antimicrobianos.
- Indicadores de pH: feno vermelho.
- Agentes de gelificação para meios sólidos:
Ágar.
CLASSIFICAÇÃO 
DOS 
MEIOS DE CULTURA
1 – DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
SÓLIDOS
- Usa ágar, um polímero de galactose
como agente solidificante na concentração de
1,35 a 2,0%.
- Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC e
sólido à 37ºC.
- São feitos em frascos, placas de petri e
tubos de ensaio.
1 – DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
SEMI-SÓLIDOS
- Usa ágar, como agente solidificante na
concentração de 0,2 à 0,75%.
- Funde-se à 100ºC, Líquido à 40ºC e
Semi-sólido à 37ºC.
- São feitos em tubos de ensaio
1 – DE ACORDO COM A CONSISTÊNCIA
LÍQUIDOS
- São os meios isentos de ágar.
- São sempre líquidos mesmo até a 37ºC
e em temperaturas inferiores.
- São feitos em tubos de ensaio
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO: o crescimento de
bactérias é visualizado pela formação de
colônias.
MEIO SEMI-SÓLIDO: o crescimento de
bactérias é visualizado pela turvação. Meio
muito utilizado para verificar a motilidade
(movimento) da bactéria.
MEIO LÍQUIDO: o crescimento de
bactérias é visualizado pela turvação do meio.
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO
COLÔNIAS: são milhares de células
bacterianas derivadas de uma única célula
bacteriana semeada na superfície do ágar.
TEMPO PARA VISUALIZAÇÃO DAS
COLÔNIAS:
- Maioria dos microrganismos cresce de 12 à
48 horas.
- Outros exigem semanas e até mêses.
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO: COLÔNIAS
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SEMI-SÓLIDO E LÍQUIDO: TURVAÇÃO
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO
Exemplos: Ágar Sangue, Ágar
chocolate, Ágar MacConkey, Ágar SS
(Salmonela, Shigella), Ágar VB (Verde-
Brilhante), Ágar CLED (Cisteína Lactose
Eletrólitos Deficientes), Ágar Base, Ágar
Citrato de Simmons, Ágar Nutriente, Ágar
TSI (Triplice Açúcar e Ferro), Ágar Müller
Hinton), etc....
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO
Ágar Sangue Ágar chocolate
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SEMI-SÓLIDO
Exemplos: Ágar SIM (Motilidade Indol
Sulfeto) etc....
MEIO LÍQUIDO:
Exemplos: BHI (Infusão de cérebro e
coração), Tetrationato, Selenito, Uréia, etc...
CRESCIMENTO MICROBIANO
MEIO SÓLIDO X MEIO LÍQUIDO
- Meio líquido é impossível afirmar a
existência de mais de uma espécie de
bactérias ou até mesmo quantificar.
- Meio sólido pode-se afirmar a
presença de várias espécies bacterianas.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS ou FUNÇÃO
MEIOS COMPLEXOS
- São meios quimicamente indefinidos,
mas tem como função similar ao ambiente
natural da bactéria.
Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SINTÉTICOS
- São meios de composição química
conhecida. São utilizados para estudo de
necessidades nutricionais de determinadas
bactérias.
Ex: Meio para micobactérias.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DIFERENCIAIS
- São meios que permitem a distinção
(diferenciação) entre dois ou mais tipos de bactérias
pelas simples observação das características
apresentadas pelas suas colônias que neles se
desenvolvem.
- Os meios diferenciais permitem o
crescimento de várias espécies ao mesmo tempo,
que facilita a discriminação entre os diferentes
microrganismos.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Mac Conkey
- Permite a distinção entre bactérias
fermentadoras da lactose (lactose positiva –
apresenta colônias rosa) e bactérias não
fermentadora da lactose (lactose negativa –
apresenta colônias incolores).
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DIFERENCIAIS
Ex: Mac Conkey
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SELETIVOS
- São meios cuja composição promovem
e/ou inibem o crescimento de um determinado
microrganismo ou grupo de microrganismos.
- Os meios seletivos proporcionam o
meio pelo qual podemos isolar uma
determinada espécie ou categoria de
bactérias.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS SELETIVOS
- São usadas substâncias seletivas
como os corantes tais como cristal violeta,
azul de metileno, eosina e verde brilhante.
Ex. Mac Conkey além de seus
nutrientes contém cristal violeta e sais biliares
que inibe o crescimento de bactérias Gram-
positivas e permitindo o crescimento de
Gram-negativas.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
OSERVAÇÃO
- ALGUNS MEIOS SÃO TANTO
DIFERENCIAIS COMO SELETIVOS.
Ex: Ágar Mac Conkey
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO
- São meios utilizados para isolar um
microrganismo de um meio em que está presente
em pequena quantidade.
- São meios enriquecidos com sangue, soro
ou outros nutrientes.
Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE ENRIQUECIMENTO
Ex: Tetrationato e Selenito
- São meios usados para amostras fecais
(coprocultura) inibindo o crescimento da microbiota
(bactérias normais das fezes) e permitindo o
crescimento de Salmonella e Shigella que são
patogênicas.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE TRANSPORTE
- São meios utilizados para o transporte e
manutenção de amostras biológicas como fezes e
secreções.
- São meios inertes, pois, permitem a
viabilidade da maioria dos patógenos sem alterar a
sua concentração.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE TRANSPORTE
Ex: Meio de Stuart ou Amies usado para
o transporte com swabs.
Ex: Meio Cary-Blair e salina glicerinada
tamponada útil no transporte de fezes para o
isolamento de shigella e Salmonella.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS DE TRANSPORTE
• Até aqui na aula do dia 12/03/19
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE MANUTENÇÃO
- São meios utilizados para a preservação das
bactérias para a realização de exames
complementares para estudos futuros como
pesquisa clínica, epidemiológica ou educacional.
Ex: Caldo TSB, caldo nutriente, água
destilada.
MEIOS DE MANUTENÇÃO
Métodos de preservação:Curto período de tempo: temperaturas de 2 a
8 ºC ou de 4 à 10ºC (refrigerador): duração por
semanas. Fazer subculturas em caldo TSB ou caldo
nutriente.
Longo período de tempo: temperaturas de
-70 à -196ºC. Duração por anos (1 até 10 anos). 
- Nitrogênio líquido: (-196ºC)
- Freezers: (-70 à -120ºC) temperatura ultra 
baixa.
- Liofilização: congelamento à seco.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
2 – TIPOS
MEIOS DE IDENTIFICAÇÃO
- São meios utilizados na identificação das
bactérias Gram-positivas e Gram-negativas.
Ex: EPM e MILI para identificação de
Enterobactérias (Gram-negativas)
- Ágar Bile esculina: Identificação de bactérias
Gram-positivas.
CLASSIFICAÇÃO DO MEIO DE CULTURA
MEIOS PARA IDENTIFICAÇÃO: RUGAI
A inoculação é feita com um
fio de platina, com o qual se
coleta a amostra e inocula-se
com uma picada até o fim do
tubo e realiza-se estrias na
superfície inclinada.
EQUIPAMENTOS PARA MICROBIOLOGIA
Capela de fluxo 
laminar, autoclave, 
estufa de cultura, 
contador de colônias.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
FATORES INTERFERENTES
- TEMPERATURA
- Ph
- ATMOSFERA
- PRESSÃO OSMÓTICA
- PRESSÃO HIDROSTÁTICA
- LUZ
- Psicrófilos: 0 à 20ºC.
- Mesófilos: 20 à 45°C.
- Termófilos: 45 à 90°C.
Obs: A maioria são mesófilos. Temperatura ótima: 36,5 a 37°C.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
TEMPERATURA
- Acidófilas: pH 0,1 à 5,4
- Neutrófilas: pH 5,4 à 8,5
- Alcalófilas: ph 7,0 à 11,5
Obs: A maioria na faixa de 4,0 a 9,0. Próximo do neutro (7,0) para a
maioria das bactérias.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
pH
CRESCIMENTOS DAS BACTÉRIAS
ATMOSFERA
- Aeróbios: 21% de O2.
- Microaeróbios: 1 a 15% de O2
- Anaeróbios: ausência de O2
Jarras de anaerobiose e
microaerobiose.
- Meios hipertônicos: as bactérias perdem água
e sofrem plasmólise ou enrugamento da célula.
- Meios isotônicos: concentrações iguais, é o
mais recomendado.
- Meios hipotônicos: as células ganham água e
sofrem lise.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
Pressão Osmótica
- Água dos oceanos e lagos exercem pressão
hidrostática.
- Bactérias barófilas: vivem em alta pressão,
“profundidade”.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
Pressão Hidrostática
- Fotossintetizantes, precisam da luz.
- Fotofóbicas, inibidas pela luz.
- Indiferentes.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
Luz
Progressão geométrica:
1→21→22→23→24….→2n
n = número de gerações
2n = número total de células em uma cultura.
TEMPO DE GERAÇÃO DAS BACTÉRIAS: Aproximadamente 30
minutos.
PERÍODO DE INCUBAÇÃO: 24 a 48 horas em estufa bacterilógica.
CONDIÇÕES PARA CRESCIMENTO MICROBIANO
Tempo
MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar sangue de carneiro a 5,0%
- Meio não seletivo e diferencial que permite o
crescimento de bactérias Gram-positivas e Gram-
negativas, além de permitir a visualização de
hemólise.
MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar MacConkey
- Meio seletivo e diferencial que permite o
crescimento de bactérias (bacilos) Gram-negativas,
diferenciando as bactérias em lactose positiva e
lactose negativa. Inibe o crescimento de bactérias
Gram-positivas.
- Amostras utilizadas: fezes, urina, água de
esgoto, alimentos , etc...
MEIO DE CULTURA Mac Conkey
Lactose positiva Lactose negativa
MEIOS DE CULTURA MAIS UTILIZADOS.
Ágar MacConkey
- Bactérias não fermentadoras de
lactose não produzem enzimas portanto não
produzem ácidos, aumenta o pH do meio,
produzindo colônias incolores, transparentes
ou ambar chamadas de colônias lactose
negativa.
Ex: Salmonella typhi, Shigella
dysenteriae.
IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
CARACTERÍSTICAS DAS COLÔNIAS
TAMANHO (mm)
- Grande: maior que 1 mm de tamanho
- Média: 1 mm de diâmetro
- Pequena: menor que 1 mm de diâmetro.
IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
COR
- Amarela, Branca, Branca- acinzentada,
Cinza, Rosa, Esverdeada, Preta, Alaranjada,
Creme, Incolor, etc...
ODOR
- Uva, Água sanitária, Fermento de pão,
Vinagre, Queijo, Terra molhada, Peixe,
Caramelo, etc...
IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
DENSIDADE
- Opaca, Translúcida, Transparente
CONSISTÊNCIA
- Brilhante, Cremosa, Seca, Mucóide
PIGMENTO
- Amarelo, Vermelho, Mostarda
IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
BORDA OU FORMA
- Circular (redonda), irregular, puntiforme,
ondulada
ELEVAÇÃO
- Convexa, Achatada, Elevada, Umbilicada,
centro elevado
IDENTIFICAÇÃO DAS COLÔNIAS
HEMÓLISE: é a lise (quebra, rompimento) da
hemácia.
Total (beta-hemólise): zona clara ao redor das
colônias.
Parcial (alfa-hemólise): há formação de um
halo esverdeado em volta da colônia, indicando
hemólise parcial das hemácias.
Ausência de hemólise (gama-hemólise): o
meio permanece íntegro em volta das colônias.
Ágar sangue de carneiro a 5,0%
Hemólise
MEIOS DE CULTURA
CONTROLE DE QUALIADE
- Cepas padrão
MEIOS DE CULTURA
Inoculação dos meios de cultura.
- INÓCULO: é a amostra de microrganismos que
são colocados em um meio de cultura para iniciar o
crescimento.
Inocular primeiramente os meios menos seletivos
para evitar que substâncias inibidoras sejam transferidas
de um meio para o outro.
Ex: Inocular primeiro no ágar sangue ou ágar
chocolate em seguida no Mac Conkey.
- CULTURA: é quando os microrganismos
crescem e se multiplicam no meio de cultura.
1 - Semeadura quantitativa com alça calibrada.
MEIOS DE CULTURA
TÉCNICAS DE INOCULAÇÃO OU SEMEADURA
2 - Semeadura por esgotamento.
MEIOS DE CULTURA
TÉCNICAS DE INOCULAÇÃO OU SEMEADURA
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM. Microbiologia. 4. ed. São Paulo: Atheneu, 2005.