Atividade 2_Exercícos PCR

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Escola Estadual de Educação Profissional em Saúde, no HCPA
Análises Clínicas- Biologia Molecular - PROF.: Lisiane Vaz
Aluno (a): Verônica Hall		Turma: ACT3	 
1. A técnica de PCR (reação em cadeia de polimerase), a mais utilizada para amplificação (clonagem) do DNA in vitro, revolucionou o acesso a informações genéticas. Com relação a essa técnica, assinale a opção correta: 
a) Na PCR, os primers (iniciadores) se hibridam com moléculas de DNA fita dupla. 
b) Com a PCR, a enzima Taq polimerase é capaz de manter sua atividade mesmo nas altas temperaturas necessárias para desnaturar a molécula de DNA. 
c) A PCR também pode ser aplicada na análise de proteínas. 
d) Com a PCR, a clonagem molecular necessita de 48 a 72 horas para ser executada. 
e) A PCR necessita ser acompanhada de um método de purificação para separar o fragmento amplificado do restante do genoma.
2. No artigo científico em que foi descrita a estrutura da molécula de DNA por Watson e Crick em 1953, foi sugerido que essa molécula realizava autorreplicação. Hoje, já se sabe mais a respeito do processo de replicação do DNA. No que se refere a esse assunto, assinale a opção correta:
a) A DNA polimerase é uma enzima de reparo, mas não é capaz de corrigir seus próprios erros de polimerização. 
b) A replicação da molécula de DNA é um processo conservativo, isto é, uma molécula de DNA filha é sintetizada tendo como referência uma molécula de DNA mãe. 
c) Como a orientação da fita de DNA é antiparalela , é necessário que a polimerização de uma das fitas ocorra na direção 5' - 3' e a da outra, na direção 3' - 5'. 
d) O primeiro passo do processo de replicação é a abertura das fitas de DNA como um zíper, isto é, de uma ponta a outra da molécula. 
e) Em determinado gene, a velocidade de replicação dos íntrons é menor do que a dos éxons.
3. Na reação em cadeia pela polimerase (PCR), nenhuma das DNAs polimerase humanas ou de outras espécies multicelulares puderam ser usadas na automação. A DNA polimerase que faz parte da reação é a Taq polimerase, que foi isolada de uma bactéria. Abaixo assinale uma propriedade importante da Taq polimerase: 
a) ela adiciona nucleotídeos em qualquer direção 
b) ela adiciona nucleotídeos a partir dos iniciadores 
c) ela não precisa de magnésio como cofator 
d) ela é termoestável a 40° C
4. Teste de DNA confirma paternidade de bebê perdido no tsunami Um casal do Sri Lanka que alegava ser os pais de um bebê encontrado após o tsunami que atingiu a Ásia, em dezembro, obteve a confirmação do fato através de um exame de DNA. O menino, que ficou conhecido como “Bebê 81” por ser o 81º- sobrevivente a dar entrada no hospital de Kalmunai, era reivindicado por nove casais diferentes. Folhaonline, 14/02/2005 (adaptado).
 Algumas regiões do DNA são sequências curtas de bases nitrogenadas que se repetem no genoma, e o número de repetições dessas regiões varia entre as pessoas. Existem procedimentos que permitem visualizar essa variabilidade, revelando padrões de fragmentos de DNA que são “uma impressão digital molecular”. Não existem duas pessoas com o mesmo padrão de fragmentos com exceção dos gêmeos monozigóticos. Metade dos fragmentos de DNA de uma pessoa é herdada de sua mãe e metade, de seu pai. 
Com base nos padrões de fragmentos de DNA representados abaixo, qual dos casais pode ser considerado como pais biológicos do Bebê 81?
O casal considerado como pais biológicos do bebê são do grupo C)
5. Uma loja de animais mantinha para venda 4 exemplares de arara azul-e-amarela e alegava aos fiscais que os exemplares haviam nascido em cativeiro, a partir de um casal mantido em um criatório autorizado pelo IBAMA. Contudo, os fiscais suspeitaram se esses exemplares teriam nascido em cativeiro ou se teriam sido capturados na natureza. Para esclarecer a questão, colheu-se uma amostra de sangue de cada um dos animais e fez-se um teste para determinação de paternidade pelo método do DNA-Fingerprint. O DNA foi extraído das células por processos químicos, fragmentado com enzimas específicas, colocado sobre um gel e submetido à corrente elétrica. Fragmentos menores migram mais rapidamente em direção a um dos polos da corrente. A migração diferencial dos fragmentos forma bandas de DNA no gel, que podem ser visualizadas por tratamentos específicos. O padrão de bandas é exclusivo de cada indivíduo. A ilustração apresenta o resultado do teste:
Os resultados obtidos indicam que podem ser filhos do casal, mantido pelo criador:
a) os 4 exemplares. 
b) apenas os exemplares machos. 
c) apenas os exemplares fêmeas. 
d) apenas os exemplares 1 e 4. 
e) apenas os exemplares 2 e 3
6. Em relação à técnica de PCR, responda:
a) Qual a finalidade da técnica:
A finalidade da técnica é elevar uma ou algumas cópias de DNA, gerando assim milhões de cópias de DNA 
 
b) Quais as fases do PCR: 
1- Desnaturação
2- Anelamento
3- Extensão/Alongamento
 
c) Para realizar a PCR, quais os componentes da reação?
Os componentes são a Taq polimerase, primers, DNA molde e nucleotídeos
d) Qual temperatura ocorre à desnaturação? Qual a finalidade dessa etapa? 
A temperatura em que ocorre a Desnaturação é a 96°C, essa etapa serve para separar as fitas de DNA gerando um molde de fita para a etapa de Anelamento
e) Qual temperatura ocorre o anelamento? Qual a finalidade dessa etapa? 
A temperatura em que ocorre o Anelamento é de 55°C. Nessa etapa ocorre o resfriamento da reação para que os primers se liguem as sequências do DNA
f) Qual temperatura ocorre à extensão/ Polimerização? Qual a finalidade dessa etapa? 
A extensão ocorre em uma temperatura de 72°C, nessa etapa é formada uma nova fita para que então aconteça novamente a duplicação da fita de DNA
i) Na técnica de PCR como é chamado o processo através das quais duas sequências de nucleotídeos são ligadas através da formação de pontes de hidrogênio com o DNA Alvo, a temperatura de 55°C? 
O processo se chama Anelamento
g) De que forma se processa a leitura do PCR?