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Mecanismos de Agressão e Defesa ⦁Estudo dos microrganismos: ⤷Os microrganismos celulares são estudados através da microscopia, sendo eles: protozoários; fungos (bolores e de leveduras); bactérias; vírus. ⤷São cultivados em meio nutritivo (in vivo), formando aglomerados celulares = colônias bacterianas. ⤷Todas as pessoas possuem microrganismos na superfície e dentro do corpo, que constituem a flora/microbiota normal. A capacidade de uma determinada espécie de micróbio de causar doença e a resistência do organismo hospedeiro serão fatores importantes para determinar se uma pessoa irá contrair ou não uma doença. Obs.: uma doença infecciosa é aquela em que o patógeno invade um hospedeiro suscetível. Já a emergente é aquela em que uma doença nova (ou modificada) que mostra o aumento na incidência de um passado recente ou num potencial para aumento num futuro próximo. ⦁Vírus: São considerados acelulares, mas com uma estrutura de proteção chamada capsídeo. Além disso, por essas características, eles não possuem tratamentos específicos, sendo utilizados antirretrovirais – diminuem um vírus de multiplicação. Existem dois tipos de vírus: ⤷Aqueles com o RNA humano produzem DNA viral (RETROVÍRUS) – Exemplo: HIV E os que com DNA humano produzem o RNA viral – Exemplo: Sars-CoV-2. Os vírus são parasitas obrigatórios. ⦁Fungos: são eucariontes (com núcleo organizado) e contém material genético (DNA) envolto pela membrana celular, com parede celular rígida de quitina (polissacarídeo insolúvel). Apresentam-se de forma unicelular (leveduras) e multicelular (bolores; cogumelos) que não realizam fotossíntese. Além disso, os bolores formam massas visíveis chamadas de micélios (longos filamentos de hifas que se ramificam e entrelaçam entre si). Os fungos podem se reproduzir de maneira sexuada ou assexuada, sempre obtendo alimentação do meio em que vivem. ⦁Bactérias: devem ser estudadas por aspectos: ⤷Morfologia (tamanho, forma e arranjo celular); ⤷Fisiologia; ⤷Patogênicas ou não patogênicas; ⤷Controle bacteriano. Características gerais: ⤷Procariontes (sem núcleo; com ribossomos); ⤷Unicelulares; ⤷Autótrofas ou heterótrofas (podem ou não produzir o próprio alimento); ⤷Parede celular constituída de Mureina ou Peptideoglicano; ⤷Móveis (flageladas) ou imóveis. 1- Ribossomos: são responsáveis pela síntese proteica e podem ser inibidos por certos antibióticos. Além disso, expressam o DNA da bactéria, permitindo a transcrição, tradução e fabricação de proteínas/enzimas; 2- Citoplasma: contém substancias como H2O, nutrientes, DNA; 3- Cromossomo: único/circular e representa o material genético da bactéria, composto por plasmídeos (que são DNA circulante extra cromossômicos, podendo passar de uma bactéria para outra – resistindo a antibióticos); 4- Membrana plasmática (citoplasmática): é formada por uma bicamada lipídica e possui uma permeabilidade seletiva, conduzindo enzimas para reações metabólicas – degradação de nutrientes, produção de energia, fotossíntese – ao mesmo tempo, essa membrana pode ser destruída por álcoois e polimixinas (que possuem ação bactericida). Controla entrada e saída de moléculas Ausência de colesterol (é o que difere os seres humanos das bactérias); 5- Parede celular: de peptideoglicano ou mureina; 6- Capsula (não obrigatória): proteção extra a bactéria, composta por açúcar, tornando-se escorregadia e dificultando a fagocitose.. Morfologicamente as bactérias podem ser divididas pelo tamanho, forma e arranjo celular: ⤷Tamanho: as bactérias tem de 0,2 até 2,0um de diâmetro e de 2 até 8um de comprimento. ⤷Formas: -Cocos:(esféricos) Diplococos Estreptococos Estafilococos -Bacilos(bastão) Diplobacilos Estreptobacilos -Espiral(espirilos) -Vibrioes(‚feijões‛) ⦁Estruturas externas a Parede celular: ⤷Glicocalice (cápsula): é um revestimento de açúcar, gelatinoso e viscoso que contribui para a virulência bacteriana (medida do grau com que um patógeno causa a doença), além de proteger a bactéria contra uma possível fagocitose dos macrófagos, servem também como reserva energética, impedem o ressecamento/desidratação, auxiliam na fixação dos substratos. ⤷Flagelos: permitem motilidade, locomoção. Rotacionam para empurrar e movimentar a célula. (Gram - =dois pares de anel/ Gram + =um par de anel). Também é um dos fatores de virulência. ⤷Fimbrias: envolvidas na mobilidade celular e na transferência de DNA (plasmidial) de uma célula para outra – recebendo esta uma nova função de resistência a um antibiótico, por exemplo. ⦁Parede Celular: tem como principal função a proteção e a prevenção quanto a rupturas das células bacterianas (pela pressão da água dentro e fora). Ela é importante pois contribui para a capacidade de algumas espécies causarem doenças e também por ser o local de ação de alguns antibióticos. Sua composição química permite sua classificação (Gram+ ou Gram-): ⤷Peptideoglicano (PPG) – conhecido também como Mureina – composto por dissacarídeo e monossacarídeo que se ligam aos açucares formando um esqueleto de carboidratos (porção glicana). Obs: a penicilina interfere com as ligações finais de peptideoglicanos pelas pontes cruzadas peptídicas, resultando em uma Lise da parede celular, causada pela ruptura da membrana plasmática e pela parede de citoplasma. ⦁GRAM+: ⤷Composta por muitas camadas de peptideoglicanos, formando uma estrutura espessa de rígida; ⤷Contém ácido teicoico (álcool) e fosfato que facilitam na coloração da bactéria. ⦁GRAM-: ⤷Composta por poucas camadas de peptideoglicana e uma membrana externa; ⤷Tende a ser mais resistente, pois os antibióticos não podem atravessar a camada de lipopolissacarideo; Protege a célula da fagocitose (pela forte carga negativa), da ação da penicilina, da lisozima e outras substancias químicas; O componente lipossacarideo da membrana externa, consiste em açucares (polissacarídeos O) que atuam como antígenos e de lipídeo A, que é uma endotoxina. ⦁Coloração de Gram: A coloração de microrganismos serve para tornar algumas de suas estruturas mais visíveis e para isso, ocorre o procedimento de: 1- Fixação do microrganismo na lamina do microscópio (que mata e adere estes microrganismos) 2- Esfregaço, sendo a passagem desses microrganismos pela lamina. 3- Adição de corantes. →Passo a passo para coloração de Gram: 1°:um esfregaço fixado pelo calor e recoberto com um corante básico purpura (cristal violeta) 2°:lava-se o corante purpura mas os microrganismos não são retirados (foram fixados devido ao calor) 3°:adiciona-se Iodo que após ser lavado deixa as bactérias com a coloração caramelo. 4°:utiliza-se álcool para limpar a lamina, sendo considerado uma solução descolorante, remove a cor de algumas bactérias e de outras não(transparente). 5°:o álcool é lavado e adiciona-se safranina (corante básico vermelho). Conclusão: ⤷As bactérias Gram+ retém o corante e permanecem com a cor violeta, pois possuem a parede espessa de PPG e não liberam a molécula de ‘purpura’ quando adicionado o álcool). ⤷As bactérias Gram- não retém a coloração violeta, permanecendo incolores até ser adicionado a safranina (vermelho), pois devido a lavagem do álcool rompe-se a camada externa de lipopolissacarideos, liberando as moléculas de ‘purpura’. O que diferencia então as bactérias Gram+ de Gram- é o terceiro passo da coloração e tudo dependerá se a parede celular da bactéria irá(+) ou não(-) desfazer o complexo. ⦁A diferença na coloração se deve ao material presente na parede celular das duas bactérias, que com o complexo corante-iodo presente no interior da célula, com a aplicação do álcool, penetra apenas nas membranas das gram-negativas, dissolvendo o complexo e eliminando, fatoque não ocorre nas gram-positivas. Com a adição da fucsina, as bactérias gram-negativas ficam visíveis da cor vermelha (cor do reagente) enquanto as gram-positivas permanecem arroxeadas (cor do complexo). ⦁Qual é o propósito da fixação do esfregaço pelo calor? Para aderir as bactérias junto a superfície lâmina para poder aplicar os corantes fazendo com que elas não sejam levadas junto com a água de lavagem durante o processo. ⦁Qual a função do primeiro corante usado na coloração de Gram? O primeiro corante utilizado é o cristal violeta, que devido à ligação iônica entre os grupos básicos do corante e os grupos ácidos dos constituintes da membrana celular das bactérias, tanto gram-positivas quanto as gram-negativas absorvem o corante. ⦁Qual a importância do lugol (iodo) na coloração de Gram? O iodo do lugol penetra nos dos tipos de célula e acaba formando um precipitado com o cristal violeta (retirando-o da proteína ou combinando-se com ele in situ). ⦁Qual a função do álcool na coloração de Gram? O álcool tem por função a dissolução e eliminação do complexo corante-iodo, fato que ocorre apenas em bactérias gram-negativas, pois passa facilmente pela membrana destas deixando-as incolores. Nas gram- positivas o álcool penetra com dificuldade e o complexo permanece nas células, retendo assim a sua coloração. ⦁Reprodução bacteriana: as bactérias reproduzem-se principalmente de forma assexuada, por divisão binária (cissiparidade) gerando indivíduos idênticos (clones), sendo assim, sem variabilidade genética. Isso pode ocorrer diversas vezes. Então, a cada descendente é passado o mesmo gene, mantendo a perpetuação bacteriana. Ocasionalmente, as bactérias podem sofrer recombinação genética (bactéria de uma espécie conjuga com a outra de espécie diferente, ganhando/passando informação genética), podendo ser por: Transformação; Transdução; Conjugação. (passam a adquirir novas características genéticas e transferi-las para as células-filhas). ⤷Transformação → ocorre por captação de DNA livre no meio após citólise de uma célula (doadora); *Citólise é a destruição de uma célula viva por dissolução dos seus elementos devido ao excesso de água provocado por um desequilíbrio osmótico*. Na superfície da célula receptora, há sítios de ligação ao DNA livre; A incorporação desses trechos de DNA poderá ocorrer se houver homologia entre o DNA livre e o DNA da receptora, caso contrário o DNA será degradado por nucleases. ⤷Transdução → ocorre através da infecção das bactérias por bacteriógrafos temperados; Vírus inocula na bactéria um DNA (que pode ser bacteriano ou viral): bacteriógrafos; Ciclo lisogênico: não provoca a morte da célula hospedeira, transfere para a bactéria DNA viral. ⤷Conjugação → ocorre através da transferência de plasmídeos (pequena parte do material genético) de uma célula doadora para uma célula receptora; Essa transferência ocorre através da fímbria sexual (Fímbria F); Bactéria doadora é atraída por ‚ferormônios‛; Requer o contato direto com a célula; Bactérias diferentes geneticamente. ⦁Crescimento bacteriano: corresponde ao aumento do número de indivíduos e não ao tamanho celular. Fatores necessários para que ocorra o crescimento bacteriano são: Físicos e Químicos. ⤷FÍSICOS: 1-Temperatura: cada bactéria independente do grupo possui uma temperatura mínima de crescimento, ótima de crescimento e máxima de crescimento, sendo a temperatura máxima em que a bactéria consegue crescer. Existem três grupos principais: a)Psicrofilas (baixa temperatura) → 0 a 15°C - geralmente em oceanos -Psicotroficas: refrigeração. b)Mesóficas (temperatura corpórea) → 37°C c)Termófilas (altas temperaturas) → 50 a 60°C -Termófilas extremas → nível de vulcão *Em determinada temperatura consigo controlar o crescimento bacteriano (Ex.: Carne). 2-pH (potencial de hidrogênio): sendo a acidez ou a alcalinidade de uma solução; A maioria dos microrganismos crescem em pH neutro (6,5-7,5); Poucas bactérias conseguem viver em pH ácido (4,0) e são chamadas de acidófilas (Thiobacillus) *fungos, por exemplo, consegue viver em pH=1* Existem bactérias que vivem em meio alcalino e são chamadas de alcalifilas (Bacillus e Archea) – pH= 10 – 11. 3-Pressão osmótica: movimento da molécula de água por meio de membrana plasmática. Transporte passivo; -Isotônica (‚igual‛) = entra e sai na mesma proporção (Soluto = Solvente); -Hipertônica = ‚murcha‛ (aumento) = concentração maior de solvente; -Hipotônica = ‚incha‛ (diminuição) = concentração maior de soluto. *Utilização do sal para matar as bactérias* ⤷QUÍMICOS: 1-Água: essencial e universal 2-Carbono: essencial e estrutural para a formação da bactéria; síntese de todos os compostos orgânicos necessários para manter a célula viva. -Quimio heterotróficas: Fonte de vitamina C = compostos orgânicos → lipídeos, proteínas, carboidratos. -Autotróficas: Fonte de vitamina C = C2 = dióxido de oxigênio → organismo produz seu próprio alimento através da fixação de CO2 pela fotossíntese. 3-Nitrogênio: utilizado para sintetizar os grupos de aminos presentes nos aminoácidos (das proteínas) → síntese de proteínas DNA, RNA e ATP. Nitrato – NO3 Nitrito – NO2. 4-Enxofre: realiza síntese de proteínas.. 5-Fóforo: utilizado para sintetizar ácido nucleicos DNA e RNA. 6-Potássio, magnésio e cálcio: essenciais para os microrganismos, utilizados como fatores para a realização de reações enzimáticas. 7-Elementos Tracos: são elementos que as bactérias requerem porções muito pequenas, sendo a maioria essencial para funções de certas enzimas. 8-Oxigênio: -Aeróbias = utilizam o O2 para o seu crescimento; -Anaeróbias obrigatórias = não utilizam (e nem crescem) na presença de O2; -Anaeróbias facultativas = crescem na presença ou não de O2; -Microaerófila = crescem em pequena quantidade de O2; -Aerotolerantes = toleram a presença de O2, mas não utiliza para o crescimento. ⦁Crescimento de culturas bacterianas: a divisão bacteriana é um método de reprodução (fissão binária), na qual uma única célula se divide dando origem a duas células idênticas, sendo um modo assexuado de reprodução. EXEMPLO: Sabendo-se de o tempo de geração de E. coli é de 20 minutos, partindo-se de uma única célula, quantas células bacteriana serão obtidas após 1h de cultivo? Em 1h = 3 gerações (n=3) X = 2n → X=23 → X=8 Em 2h = 6 gerações (n=6) X=2n → X= 2 a 6a → X=64 ⤷Crescimento em laboratório: -Dentro de um tubo de ensaio contendo meio de cultura (nutrientes) onde após a introdução delas, nenhum outro nutriente será adicionado ao sistema e nenhum produto de excreção (toxina) será removido. -Dessa maneira, podemos acompanhar o crescimento bacteriano nesse sistema e observar algumas etapas muito características. O QUE OCORRE? Assim que são adicionadas ao sistema e após se adaptarem, as células se dividem (divisão binária), aumentando a população em escala exponencial, até que os nutrientes sejam o fator limitante para a continuidade do crescimento. Deste momento em diante as bactérias começam a morrer. Assim, em sistema fechado pode-se notar várias fases do crescimento bacteriano e elaborar uma curva característica que é subdividida em 4 fases: →Fase LAG = adaptação das bactérias ao meio, com pouca variação no número de células pois elas não se reproduzem imediatamente. Mas, está ocorrendo uma intensa atividade metabólica – envolvendo principalmente a síntese de enzimas. Ou seja, a fase lag é inicial, quase não há crescimento, é um reconhecimento dos fatores necessários para o crescimento. →Fase LOG (crescimento exponencial) = momento em que as células se dividem intensivamente, ocorrendo uma alta atividade metabólica. Ou seja, na fase log já houve o reconhecimento,tem o maior teor metabólico e formação de colônias. →Fase estacionária = momento em que as mortes microbianas são equilibradas pela produção de novas células. A causa de início de morte não é sempre clara, pode ser por: mudanças no pH, acúmulo de resíduos, esgotamento de nutrientes. Ou seja, na fase estacionária há um equilíbrio entre a população viva e a morta. →Fase de declínio (morte celular) = momento que em o número de células mortas ultrapassa o número de células novas formadas. ⦁Metabolismo bacteriano: vias metabólicas que geram energia e que são utilizadas pelas bactérias ⤷Características gerais: -Capacidade de hidrolisar os mais diversos materiais (catabolismo); -Diversidade metabólica: variedade de enzimas produzidas para captação de nutrientes. Produção de toxinas: hemolisinas, coagulantes, etc. Classificar as bactérias de acordo com a fonte de carbono e o tipo de energia que utilizam: FONTE DE CARBONO: 1-Autotróficos (alimentação própria): utilizam CO2; 2-Heterotróficos (alimentação depende de terceiros): utilizam compostos orgânicos (glicose). FONTE DE ENERGIA: 1-Fototróficos: usam a energia luminosa como sua fonte primária de energia. 2-Quimiotróficos: dependem de reações de oxidaçãoredução de compostos orgânicos e inorgânicos para obter energia. Fonte de carbono + Fonte de energia = Fotoautotroficos; Foto-heretotroficos; Quimioartotroficos; Quimio-heterotroficos. ⦁Meio de Cultura: O meio de cultura bacteriana é um material preparado para o crescimento do microrganismo, em que cada amostra deve conter especificidades como: nível de pH, oxigênio, nitrogênio, água. Além disso, deve estar estéril, ou seja, inicialmente sem microrganismos. As bactérias introduzidas a este meio são denominadas inoculas. Existem meios de cultivo com diferentes consistências: líquido, sólido, semi-sólido. Para dar consistência a um meio de cultura adiciona- se AGAR (polissacarídeo derivado de algas marinhas que se liquefaz por volta de 100graus, formando uma solução transparente – permanece em estado líquido até 40graus (em temperatura ambiente solidifica) – não serve como nutriente!) ⤷Tipos de meio de cultura: -Meio mineral (mínimo) → sais minerais e fonte de carbono (açúcar); -Meio completo: 1-Sintético: toda a composição química é conhecida (Caldo nutriente; Agar-nutriente), com extrato de leveduras e outros fatores orgânicos solúveis, apresentando-se em forma líquida. 2-Complexo: feito com nutrientes como extrato de leveduras, de carnes ou de plantas, sendo que as necessidades energéticas são oferecidas pelas proteínas e vitaminas. -Meio seletivo: permite o crescimento de uma determinada bactéria de interesse, impedindo o crescimento de outras, como por exemplo: 1-Meio de Mac Conkey que contém cristal violeta e sais bilares, impedindo o crescimento de Gram+, favorecendo o crescimento de Gram-. 2-Meio de Sabourand é seletivo para fungos que dominam a maioria das bactérias neste pH (5,5). -Meio diferencial: facilitam a diferenciação das colônias de um microrganismo desejada em relação a outras colônias crescendo na mesma placa, permitindo assim uma distinção visual pela simples observação das características das colônias no meio de cultura, como por exemplo: 1-Meio de Mac Conkey 2-Meio de Agar-sangue (que contém hemácias) identificando espécies bacterianas que destroem essas hemácias gerando uma hemólise e um circulo amarelado ao redor de suas colônias. ⦁Meio sólido = Agar (agente solificante) ⦁Meio líquido = ausência de Agar ⦁Meio semi-sólido = menor concentração de Agar ⦁Houve crescimento? Cultura + ⦁Não houve crescimento? Cultura - ⦁Houve turvação em meio líquido? Cultura + ⦁Meio Mac Conkey cresce APENAS em Gram- ⦁Controle do crescimento microbiano: POR QUE controlar? -Prevenção da transmissão de doenças infecciosas; -Evitar a decomposição de alimentos; -Evitar a contaminação da água e do ambiente. COMO controlar o crescimento? -Remoção; -Inibição; -Morte por agentes físicos ou químicos. A terminologia do controle microbiano: ESTERILIZAÇÃO → destruição ou remoção de todas as formas de vida microbiana, incluindo endósporos (formas mais resistentes) → Normalmente realizada com vapor sob pressão ou com um gás esterilizante. Líquidos ou gases podem ser esterilizados pela filtração. DESINFECÇÃO → destruição de patógenos na forma vegetativa, promovendo inibição, morte ou remoção, mas sem eliminar todas as formas de vida → Pode fazer o uso de métodos físicos ou químicos como: radiação UV, água fervente, vapor d’água ANTISSEPSIA → destruição de patógenos na forma vegetativa em tecidos vivos → O tratamento é quase sempre por antimicrobianos químicos (antisséptico). DEGERMAÇÃO → remoção mecânica dos microrganismos em vez de morte, em uma área limitada → Remoção mecânica feita com algodão embebido em álcool. SANITIZAÇÃO → tratamento destinado a reduzir as contagens microbianas nos utensílios alimentares a níveis seguros da saúde pública → Lavagens em altas temperaturas ou imersão em um desinfectante químico, reduzindo as chances de transmissão da doença de um usuário para o outro. Sufixos: CIDA = nome de tratamentos que causam a morte direta dos micróbios (germicida); STATICO/STASE = refere-se a inibição do crescimento e da multiplicação de microrganismos (bacteriostático); SEPSE = indica a contaminação (asséptico).
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