Identificação de bactérias Gram positivas - Staphylococcus (Staphylococcus spp, patologias, infecções, testes de identificação, cultura) - Bacteriologia Clínica

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• Formato esférico (1 micrometro de diâmetro) e 
formam grupos com aspecto de cachos de uvas; 
• Anaeróbicos facultativos: vivem em meios 
aeróbios, mas podem, facultativamente, viver 
em meios anaeróbios; 
• De todo modo, seu crescimento é mais rápido 
em meios aeróbios. Não possuem flagelo; 
 
PATOLOGIAS 
As principais patologias causadas por 
Staphylococcus spp.: 
• Foliculites 
• Furunculose 
• Carbúnculose (parece um furúnculo, mas forma 
abcesso) 
• Cistos 
• Abcessos 
• Endocardites 
• Infecções respiratórias 
• Infecções urinárias 
• Sepse 
CLASSIFICAÇÃO 
 A classificação de Staphylococcus spp.: 
A) Baseado na produção de coagulase. 
1. Coagulase positivo: S. aureus 
2. Coagulase negativo: S. epidermidis e S. 
saprophyticus 
B) Baseado na patogenicidade. 
1. Patogênico comum: S. aureus 
2. Patogênicos oportunistas: S. epidermidis e 
S. saprophyticus 
3. Não patogênicos: S. homonis 
A 
EU 
EU 
 Entre as três Staphylococcus citadas 
anteriormente, a Staphylococcus aureus é a mais 
patogênica. Os fatores de virulência são: 
ESTRUTURA DA PAREDE CELULAR 
DOS STAPHYLOCOCCUS 
 
Há alguns isolados de Staphylococcus que são 
capsulados, com propriedades anti-fagocíticas. 
O fator de aglutinação permiti que o 
fibrinogênio plasmático seja convertido em fibrina 
(formações de coágulos), caracterizando uma 
maior virulência. – Teste de coagulase. 
A proteína A está envolvida com a ativação de 
resposta inflamatória, também impede 
reconhecimento do sistema imune. É capaz de 
opsonizar, neutralizando o anticorpo, ligando-se a 
porção constante do anticorpo e desativando-o. 
Assim, a bactéria não será reconhecida por esse 
anticorpo. – Utilizada para diagnóstico: teste 
sorológico. 
 
identificação de bactérias gram positivas 
STAPHYLOCOCCUS. 
 
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PRODUTOS EXTRACELULARES – 
ENTEROTOXINAS, EXOTOXINAS 
E ENZIMAS 
No processo patogênico, a Staphylococcus 
pode liberar substâncias, entre elas: hemolisinas, 
leucocidina, esfoliatina e enterotoxinas. 
As Enterotoxinas é uma toxina bacteriana liberada 
pela bactéria que atua, principalmente, no trato 
intestinal. Essas enterotoxinas causam intoxicação 
alimentar associada a Staphylococcus aureus. 
Também são consideradas superantígenos por 
promoverem uma forte resposta inflamatória. 
 sintomatologia: diarreia, vômito e náuseas. 
As Hemolisinas são exotoxinas, ou seja, são 
toxinas liberadas no meio extracelular. São capazes 
de destruir as hemácias. Enquanto as Leucocidinas 
destroem os leucócitos. 
A esfoliatina é uma enzima produzida pela 
Staphylococcus aureus que promove a síndrome da 
pele escaldada (aparência de pele queimada, 
descamando). Essa toxina age na epiderme, 
promovendo a destruição dos desmossomos. 
 
 Sequência de eventos nas infecções por 
Staphylococcus: 
Geralmente, a infecção por Staphylococcus pode 
ser superficial ou disseminada. Uma infecção em 
um foco superficial pode atingir a corrente 
sanguínea, permitindo que as bactérias invadem a 
corrente sanguínea (bacteremia). Se a bacteremia 
não for resolvida (sistema imune), essas bactérias 
desencadeiam uma resposta inflamatória. Essa 
resposta inflamatória promove a evolução de 
bacteremia para sepse. Mediante a evolução da 
resposta inflamatória, ocorre a liberação de toxinas, 
promovendo vasodilatação. Essa vasodilatação 
permite o extravasamento plasmático, o volume 
sanguíneo diminui e o paciente pode ter um 
Choque séptico. 
 
 
 Os métodos cotidianos para a identificação 
de microrganismos baseiam em: 
 Morfologia e coloração a colônia; 
 Suas características fenotípicas; 
 Propriedades bioquímicas ou metabólicas; 
 Resistência ou sensibilidade a antibióticos; 
CULTURA 
 Para bactérias Staphylococcus pode utilizar 
meios não seletivos, como Agar Sangue e Agar 
Mueller Hinton (mais utilizado para testes de 
antibiogramas). 
 
 Há também o meio seletivo e indicador, 
como Agar Manitol Salgado, este sendo específico 
para o gênero Staphylococcus spp. 
 
O Staphylococcus aureus é a única do gênero 
Staphylococcus que vai conseguir fermentar o 
manitol nessa concentração de sal. 
A mudança no pH, permite que esse meio mude de 
cor. Se crescer bactérias e permanecer a mesma cor, 
 
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esse rosa, significa dizer que: não é Staphylococcus 
aureus e sim outra bactéria do gênero (S. epiderme 
ou S. saprophyticus). 
PROVA DA CATALASE 
 É realizado depois que as bactérias 
cresceram no meio de cultura, sendo utilizada para 
diferenciação entre cocos gram-positivos: gêneros 
Staphylococcus e Streptococcus. 
O teste da catalase é feito com uma amostra de 
colônia que cresceu no meio de cultura. Coloca o 
material na lâmina (podendo utilizar uma gota de 
soro fisiológico para ajudar na diluição) e 
acrescenta uma gota de água oxigenada. A 
formação de bolhas é indicativa para a presença da 
enzima catalase, esta responsável por quebrar a 
molécula de água oxigenada, formando e liberando 
oxigênio. 
 se formar bolhas, é Staphylococcus spp. 
 se não formar bolhas, é Streptococcus spp. 
 
PROVA DA COAGULASE 
 Quando é catalase positiva, pode-se utilizar 
a prova da coagulase para verificar se a bactéria 
tem o fator de aglutinação (apenas quem tem é a S. 
aureus). Utiliza-se um tubo contendo o plasma e a 
bactéria. Se coagular, significa que o fator de 
aglutinação da bactéria Staphylococcus aureus 
interagiu com o fibrinogênio do plasma, 
convertendo-o em fibrina (formando o coágulo). Se 
não formou coágulo, pode ser indicativo para 
outras espécies de Staphylococcus spp. 
Há também aglutinação em látex ou em hemácias 
de carneiro (sorologia). Estes testes geralmente 
detectam a coagulase livre e alguns apresenta, 
também uma imunoglobulina antiproteína A 
presente na parede da Staphylococcus aureus. 
 
TESTE DA DNAse 
 Verifica-se o microrganismo possui a 
enzima desoxiribonuclease, a qual degrada o ácido 
nucléico (DNA). 
PROCEDIMENTO: 
• Fazer um inóculo denso de forma circular em 
uma pequena parte do meio; 
• Incubar a 35+/- 2ºC por 18-24 horas. A placa 
pode ser inoculada com várias cepas; 
• Decorrido o período de incubação, no momento 
da leitura colocar o HCL 1N de maneira que 
cubra as colônias, aguardar 30 segundos. 
• Formação de halo transparente, identifica 
Staphylococcus aureus. 
• O ácido clorídrico ativa a enzima DNAse, 
degradando o DNA do meio de cultura. 
 
TESTE DA NOVOBIOCINA 
 A cepa é semeada de maneira semelhante ao 
antibiograma em placa de Muller Hinton acrescida 
de um disco teste de novobiocina contendo 5µ. As 
amostrar resistentes mostram zonas de inibição de 
 
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6 a 12 mm, enquanto as susceptíveis apresentam 
halos de 16mm ou mais. 
 as cepas de Staphylococcus saprophyticus 
são resistentes. 
 as cepas de Staphylococcus epidermidis 
são sensíveis. 
 
RESUMO DA IDENTIFICAÇÃO DA ESPÉCIE 
 
 COAGULASE MANITOL DNAse NOVOBIOCINA 
S. aureus + + + Sensível 
S. epidermidis - - - Sensível 
S. saprophyticus - - - Resistente 
 
Todas são Catalase +