Baixe o app para aproveitar ainda mais
Prévia do material em texto
05/05/2020 1 Noções de Biossegurança em Laboratório Prof. Dr.ª janaina vieira Introdução • As atividades devem permitir o aprendizado e o crescimento do estudante na sua área profissional • Os líquidos biológicos e os sólidos, os quais manuseamos nos laboratórios, são, quase sempre, fontes de contaminação • Cuidados que devemos ter para não haver contaminação cruzada dos materiais • Não contaminar o pessoal do laboratório e da limpeza, os equipamentos, o meio ambiente através de aerossóis • Cuidados com o descarte dos materiais fazem parte das Boas Práticas em Laboratório (BPL) 1 2 05/05/2020 2 Conceitos básicos • Aerossóis • Solução coloidal em forma de gotas que se dispersam no ar; • Amostras biológicas • São materiais de origem humana ou animal (como excrementos, secreções, sangue e derivados, tecidos e líquidos orgânicos) com fins experimentais ou diagnóstico; • Antisséptico • Agente químico ou físico utilizado para desinfecção de tecido vivo, capaz de destruir ou inibir o crescimento de microrganismos na área aplicada; • Descontaminação • Destruição ou remoção (total ou parcial) de microrganismos dos artigos e superfícies; Conceitos básicos • Desinfecção • Destruição ou inibição do crescimento de microrganismos patógenos não esporulados ou em estado vegetativo, de superfícies; • EPI • Equipamento de Proteção Individual: luvas, máscaras, jalecos, óculos de proteção, aventais, botas ou outro tipo calçados apropriados, tocas, etc.; • EPC • Equipamentos de Proteção Coletiva: extintores, sinalização adequada (mapas de risco), chuveiros e lava-olhos, chuveiros contra incêndio, capelas, manta ou cobertor, vaso de areia, etc.; • Esterilização • Processo de destruição de todos os microrganismos, incluindo os esporos; 3 4 05/05/2020 3 Conceitos básicos • Limpeza • Processo de remoção de sujidade; • Material Biológico • Todo material que contenha informação genética e seja capaz de auto reprodução ou de ser reproduzido em um sistema biológico. Inclui os organismos cultiváveis e agentes (entre eles bactérias, fungos filamentosos, leveduras e protozoários); as células humanas, animais e vegetais, as partes replicáveis destes organismos e células (bibliotecas genômicas, plasmídeos, vírus e fragmentos de DNA clonado), príons e os organismos ainda não cultivados; Conceitos básicos • Patogenicidade • Capacidade de um agente biológico causar doença em um hospedeiro suscetível; • Sanitização • Processo destinado à redução da maioria das bactérias patogênicas presentes; • Substâncias infectantes • São apresentações que contêm microrganismos viáveis (tais como bactérias, vírus, parasitas, fungos ou microrganismos recombinantes, híbrido ou mutante) sabidamente capazes de provocar doença ao homem ou animais. 5 6 05/05/2020 4 O que é biossegurança? • Conjunto de ações voltadas para a prevenção, minimização ou eliminação de riscos inerentes as atividades de pesquisa, produção, ensino, desenvolvimento tecnológico e prestação de serviços, visando à saúde do homem, dos animais, a preservação do meio ambiente e a qualidade dos resultados. (Teixeira e Valle, 1996) Onde se aplica? Indústrias, hospitais, laboratórios de saúde pública, laboratórios de análises clínicas, hemocentros, etc. O que é contenção? • Termo usado para descrever os métodos de segurança utilizados na manipulação de materiais infecciosos em um laboratório onde estão sendo manejados ou mantidos • Contenção primária • Proteger o operador e o laboratório • Contenção secundária • Proteger ambiente 7 8 05/05/2020 5 Biocontenção • O elemento de contenção mais importante é a adesão rígida às práticas e técnicas microbiológicas padrões. Organização • Fundamental para a segurança do pesquisador/aluno; • Garantia de resultados precisos e de qualidade; • Sua falta pode gerar riscos; • Precisa de planejamento. 9 10 05/05/2020 6 Considerações para o planejamento das atividades • Condições de trabalho • Instalações • Locais de armazenamento e manipulação • Condições operacionais dos equipamentos • EPI • Procedimentos de descarte de resíduos • Tempo de execução da atividade • Práticas seguras: conhecidas e cumpridas • Registro das atividades: permite rastreabilidade do processo Práticas seguras no Laboratório • Conjunto de procedimentos que visam reduzir a exposição do pesquisador a riscos no ambiente de trabalho 11 12 05/05/2020 7 Princípios das práticas seguras em Laboratório • 1. Limpeza das áreas de laboratório regularmente e ao término de uma atividade • Reduz riscos de contaminação • Descontaminação imediata se houver derramamento de material químico ou biológico Práticas seguras no Laboratório • 2. Manuseio e transporte de vidrarias e outros materiais de forma segura • Considerar ergonomia e segurança • *Ergonomia é o estudo científico, da relação entre o homem, seus meios, métodos e espaços de trabalho. Seu objetivo é elaborar, mediante a contribuição de diversas disciplinas científicas que a compõem, um corpo de conhecimentos que, dentro de uma perspectiva de aplicação, deve resultar em uma melhor adaptação ao homem dos meios tecnológicos e dos ambientes de trabalho e de vida. 13 14 05/05/2020 8 Práticas seguras no Laboratório 3. Equipamentos posicionados corretamente • Fios e cabos não devem atravessar a área de trabalho; • Identificação de fios e cabos quanto a voltagem; • Evitar extensões elétricas (sobrecarga); • Áreas adequadas de circulação em torno dos equipamentos. 15 16 05/05/2020 9 Práticas seguras no Laboratório • 4. Manuseio e armazenamento adequados de Produtos químicos • Frascos com soluções devidamente etiquetados e datados; • “Ficha de segurança química” (informa riscos, manuseio e conduta em emergência) deve estar disponível no laboratório; • Grandes quantidades = almoxarifado; • Uso de EPI para produtos tóxicos, voláteis e inflamáveis (óculos de proteção, avental, luvas, máscara facial); • Resíduos = descarte seguro 5. Materiais biológicos ◦ Manipulados de forma segura, de acordo com a classe de risco; ◦ Transporte adequado para evitar derramamento acidental; ◦ Identificação! ◦ Descontaminação antes do descarte!! Risco biológico Agentes potencialmente patogênicos – vírus, bactérias, fungos, protozoários, organismos geneticamente modificados (OGMs) que podem causar infecções graves. 17 18 05/05/2020 10 Práticas seguras no Laboratório • 6. Atividades administrativas, cálculos e análises • Devem ser realizadas em local separado da área de trabalho • 7. Pessoal de limpeza e apoio • Deve ser treinado/orientado p/ execução das tarefas; • Deve conhecer os riscos e procedimentos de descarte de lixo (comum x laboratório) EPI Equipamento de proteção individual 19 20 05/05/2020 11 Por que usar bata? • A bata/avental faz parte do EPI 21 22 05/05/2020 12 Uso obrigatório Normas universais e não- negociáveis nas áreas de experimentação Avental e EPI • Uso obrigatório em áreas de experimentação • Não dividi-lo com outras pessoas • Sugestão: trocar o avental/bata entre diferentes trabalhos, como animais, células, bancada, radioatividade … • Tirar o avental/bata/EPI ao sair da área de experimentação 23 24 05/05/2020 13 Uso obrigatório • Normas universais e não-negociáveis nas áreas de experimentação • Não aplicar maquiagem, pentear cabelo, manipular lentes de contato; • Não comer, beber, etc. • Pipetagem com a boca é proibida; • Com luvas, não tocar em maçanetas, telefones, olhos, nariz, bolsas, bolsos, CELULAR! etc. Uso obrigatório •Normas universais e não-negociáveis nas áreas de experimentação • Lavar as mãos sempre • Antes de iniciar e após terminar um experimento • Após retirada de luvas • Antes de sair do laboratório • Ouvidos desobstruídos • Sapatos fechados • Deve-se sempre tomar uma enorme precaução emrelação a qualquer objeto cortante, incluindo seringas e agulhas, lâminas, pipetas, tubos capilares, etc. 25 26 05/05/2020 14 27 28 05/05/2020 15 Uso obrigatório • Normas universais e não-negociáveis nas áreas de experimentação • Não jogar material sólido, produto químico ou biológico dentro da pia ou esgoto comum; • Deve-se evitar manter pertences (casaco, bolsa, etc.) na área laboratorial; • O acesso ao laboratório deverá ser limitado ou restrito quando estiverem sendo realizados experimentos ou trabalhos com culturas e amostras. Limpeza e apoio - funcionários • Deve ser treinado/orientado para execução das tarefas; • Deve conhecer os riscos e procedimentos de descarte de lixo (comum x laboratório) 29 30 05/05/2020 16 Limpeza e apoio - funcionários • Material contaminado X material não contaminado • Autoclavado X Não autoclavado Medidas de proteção coletiva • Todo o grupo fica protegido. • Substituição de matérias-primas e insumos por produtos menos prejudiciais à saúde; • Isolamento de fonte de risco (isolamento acústico de equipamentos geradores de ruído); • Instalação de sistemas de ventilação e exaustão que evitam dispersão de contaminantes no ambiente, diluem as concentrações de poluentes e oferecem conforto térmico; • Uso de EPC (capelas de segurança química, cabines de biossegurança biológica, chuveiros de emergência, lava olhos) 31 32 05/05/2020 17 Risco dos Agentes Biológicos • “Classificação de Risco dos Agentes Biológicos”- Ministério da Saúde – 2006. • Os agentes biológicos que afetam o homem, os animais e as plantas são distribuídos em classes de risco assim definidas: • Classe de risco 1, 2, 3 e 4 • Obs.: A classificação de parasitas e as respectivas medidas de contenção se aplicam somente para os estágios de seu ciclo durante os quais sejam infecciosos para o homem ou animais. Identificação dos riscos biológicos • Fontes de exposição e reservatórios • Incluem pessoas, animais, objetos ou substâncias que abrigam agentes biológicos, a partir dos quais se torna possível a transmissão a um hospedeiro ou a um reservatório. • Vias de transmissão e de entrada • É o percurso feito pelo agente biológico a partir da fonte de exposição até o hospedeiro. • Direta: transmissão do agente biológico sem a intermediação de veículos ou vetores • Ex.: transmissão aérea por bioaerossóis, transmissão por gotículas e contato com a mucosa dos olhos; • Indireta: transmissão do agente biológico por meio de veículos ou vetores • Ex.: transmissão por meio de mãos, luvas, roupas, instrumentos, vetores, água, alimentos e superfícies. 33 34 05/05/2020 18 Identificação dos riscos biológicos • Transmissibilidade, patogenicidade e virulência do agente • É a capacidade de transmissão de um agente a um hospedeiro; • A patogenicidade dos agentes biológicos é a sua capacidade de causar doença em um hospedeiro suscetível • Virulência é o grau de agressividade de um agente biológico • Persistência do agente biológico no ambiente • É a capacidade de o agente permanecer no ambiente, mantendo a possibilidade de causar doença Classes de risco biológico • Diretrizes Gerais para o Trabalho em Contenção com Material Biológico - Comissão de Biossegurança em Saúde - CBS do Ministério da Saúde (elaborado em 2004) • CLASSE I • Baixo risco individual e para a coletividade • Inclui os agentes biológicos conhecidos por não causarem doenças em pessoas ou animais adultos sadios. • Exemplo: Lactobacillus sp. 35 36 05/05/2020 19 • CLASSE II • Moderado risco individual e limitado risco para a comunidade • Inclui os agentes biológicos que provocam infecções no homem ou nos outros animais, cujo potencial de propagação na comunidade e de disseminação no meio ambiente é limitado, e para os quais existem medidas terapêuticas e profiláticas eficazes. • Exemplo: Schistosoma mansoni (Esquistossomíase mansônica ou intestinal, xistose, barriga d’água ou mal do caramujo) Classes de riscos biológicos • CLASSE II Agente bacteriano Staphylococcus aureus Ascaris lumbricoides Agente parasita Classes de riscos biológicos 37 38 05/05/2020 20 • CLASSE II Classes de riscos biológicos Agente fungos Candida albicans Herpes simplex Agente virus • CLASSE III • Alto risco individual e moderado risco para a comunidade • Inclui os agentes biológicos que possuem capacidade de transmissão por via respiratória e que causam patologias humanas ou animais, potencialmente letais, para as quais existem usualmente medidas de tratamento e/ou de prevenção • Representam risco se disseminados na comunidade e no meio ambiente, podendo se propagar de pessoa a pessoa • Exemplo: Bacillus anthracis Classes de riscos biológicos Bacillus anthracis Mycobacterium tuberculosis 39 40 05/05/2020 21 • CLASSE IV • Alto risco individual e para a comunidade • Inclui os agentes biológicos com grande poder de transmissibilidade por via respiratória ou de transmissão desconhecida. Até o momento não há nenhuma medida profilática ou terapêutica eficaz contra infecções ocasionadas por estes. • Causam doenças humanas e animais de alta gravidade, com alta capacidade de disseminação na comunidade e no meio ambiente. Esta classe inclui principalmente os vírus. • Exemplo: Vírus Ebola Classes de riscos biológicos • CLASSE DE RISCO ESPECIAL • Alto risco de causar doença animal grave e de disseminação no meio ambiente • Inclui agentes biológicos de doença animal não existentes no país e eu embora não sejam obrigatoriamente patógenos de importância para o homem, podem gerar graves perdas econômicas e/ou na produção de alimentos Classes de riscos biológicos 41 42 05/05/2020 22 Nível de Biossegurança • NB é o nível de contenção que permita o trabalho em laboratório com materiais infecciosos de forma segura e com risco mínimo • Existem quatro níveis de biossegurança: NB-1, NB- 2, NB-3 e NB-4, crescentes no maior grau de contenção e complexidade do nível de proteção • O NB será determinado segundo o organismo de maior classe de risco envolvido no experimento NB - 1 • Risco individual e para a comunidade ausente ou muito baixo • Micro-organismos que provavelmente não causam doenças nos homens ou animais • Recomenda-se as boas práticas operacionais • Uso de luvas é recomendado 43 44 05/05/2020 23 NB - 2 • Risco individual moderado, baixo risco para a comunidade • Microrganismos patogênicos capazes de provocar doenças em seres humanos ou animais, mas que geralmente não apresentam um perigo sério para os funcionários, comunidade, animais domésticos ou ambiente • Exposição ocupacional é capaz de provocar infecção grave, mas existem tratamento e medidas profiláticas eficazes • Adoção de luvas cirúrgicas e proteção respiratória para possíveis aerossóis NB - 3 • Nível 3 – alto risco individual e baixo risco para a comunidade • Micro-organismos patogênicos que geralmente provocam doença grave no homem ou nos animais, mas que geralmente não se propagam de um indivíduo infectado para o outro • Existem medidas profiláticas e tratamento eficaz • Recomenda-se meios de proteção primária para todas as atividades • O projeto da instalação e os procedimentos operacionais do NB-3 devem ser documentados 45 46 05/05/2020 24 NB - 4 • Nível 4 – elevado risco individual e para a comunidade • Micro-organismos patogênicos que geralmente provocam doença grave no ser humano ou nos animais, podendo ser facilmente transmitidos de um indivíduo para o outro, de forma direta ou indireta • Geralmente não existem medidas eficazes de tratamento e prevenção • Recomenda-se meios de contenção máxima para todas as atividades Cultivo de microrganismos Cuidados especiais • Abrir, cuidadosamente, tubos e frascos evitando agitá-los; • Identificar claramente todos os tubos e frascos; • NUNCA usar vidraria trincada ou quebrada; • Manipular os tubos,frascos, pipetas ou seringas com as extremidades em direção oposta ao operador; • Desprezar sobrenadantes ou conteúdo de pipetas sobre material absorvente embebido em desinfetante contido em um frasco de boca larga (p.ex. Becker) no sentido de evitar a formação de aerossóis; • Colocar um tampão de algodão hidrófobo na extremidade das pipetas, que entra em contato com a pera ou o pipetador automático; • Limpar toda a área com solução desinfetante após o término do trabalho 47 48 05/05/2020 25 Vidrarias e Equipamentos Introdução • Todas as vidrarias, materiais e equipamentos de laboratório devem ser utilizados com atenção e zelo. • O conserto e a manutenção de vidrarias, materiais e equipamentos de laboratório são de custo alto 49 50 05/05/2020 26 Vidro • A vidraria de laboratório pode ser usada para armazenar material sólido ou líquido, preparar soluções, fazer reações, medir líquidos, etc. Tubos de cultura São utilizados no cultivo de microrganismos em pequeno volume de meio de cultura, trazendo a vantagem de economizar meio e espaço físico. Placas de Petri São recipientes redondos, de vidro ou plástico, com tampa rasa. Servem para conter meio de cultura sólido. Sua superfície extensa facilita o isolamento de espécies microbianas distintas. 51 52 05/05/2020 27 Alça de Drigalsky Serve para espalhar suspensões de microrganismos na Placa de Petri contendo meio de cultura sólido. Deve ser flambada á chama antes e após o uso. Balão de fundo plano e Erlenmeyer São utilizados para armazenar quantidades maiores de meio de cultura. O Erlenmeyer é uma vidraria muito utilizada também na multiplicação celular de microrganismos em meio de cultura líquida com agitação ou aeração. 53 54 05/05/2020 28 Béquer São usados na maioria das vezes para fazer reações entre soluções, usados para dissolver diversas substâncias sólidas, efetuar reações de precipitação e preparar soluções simples. Frascos de Cultivo Microbiano De vidro borossilicato e tampa rosqueada de polipropileno, autoclavável. São vidrarias utilizadas para análises de água e alimentos. Tubos de Durham São tubos de vidro pequenos e cilíndricos. Servem para captar o gás formado em uma fermentação. Funil de vidro Auxiliar nas operações envolvendo líquidos, no enchimento de frascos e como suporte para papel de filtro. 55 56 05/05/2020 29 Pipetas São utilizadas para diluições, inoculações, distribuições de meio, ou pequenas transferências de líquido. Lâminas de vidro São de vidro claro e transparente, com formato retangular. São utilizadas para exame dos microrganismos em microscópio óptico. Lamínulas São pequenas lâminas de vidro transparente, quadradas, finas, destinadas a cobrir as preparações contidas nas lâminas, nos ensaios a fresco. Também são usadas para o preparo de lâminas fixadas para uso por longos períodos. 57 58 05/05/2020 30 Lâminas escavadas É uma lâmina específica, que serve ao chamado “ensaio em gota pendente”, ou seja, o material é observado suspenso em uma gota de líquido. Muito utilizada na observação da mobilidade dos microrganismos. Câmara de Neubauer É uma lâmina grossa de uso microscópico, com formato retangular e normalmente de vidro, com uma depressão no centro, utilizada para fazer contagem de células por unidade de volume de uma suspensão. 59 60 05/05/2020 31 Termômetros São utilizados em estufas microbiológicas, de secagem e esterilização, banhos de água (banhos- maria), etc. Outros... 61 62 05/05/2020 32 Acessórios • Alguns utensílios que são utilizados nas principais atividades do laboratório de microbiologia. Bico de Bunsen É um aquecedor a gás com chama, cuja temperatura varia de acordo com a regulagem. É suprido com gás liquefeito de petróleo (GLP) e proporciona uma chama que permite a realização da manipulação das análises microbianas. Alça de Platina e agulhas É um fio de platina ou outra liga metálica, medindo aproximadamente cinco centímetros, recurvado em uma de suas extremidades. É adaptado ao cabo de Kolle. Este material é utilizado para transferir inóculos sólidos ou em suspensão. A agulha é um fio de platina ou de outra liga, que fixado ao cabo de Kolle, é utilizada para semear meio sólido em profundidade. 63 64 05/05/2020 33 Espátulas e pinças Estes utensílios são normalmente produzidos em aço inoxidável. A espátula é utilizada para pesagem de pequenas massas, enquanto a pinça para manipulação de lâminas, lamínulas, etc. Soluções • As soluções desinfetantes são utilizadas para antissepsia das mãos (álcool 70%), ou desinfecção das bancadas (hipoclorito de sódio 2,5%), ou ainda para descarte de resíduos líquidos e de pipetas contaminadas. • As soluções podem ser armazenadas em pissetas plásticas. 65 66 05/05/2020 34 • Soluções Corantes • As soluções corantes são utilizadas para preparação de microrganismos para a observação microscópica. Equipamentos Agitador do tipo rotatório (Shaker orbital) É munido de uma plataforma onde os recipientes contendo o meio líquido são fixados. O mesmo gira de modo circular, agitando o meio continuamente durante a incubação e também expondo maior superfície do meio à fase gasosa. 67 68 05/05/2020 35 Agitador magnético É munido de uma plataforma metálica onde o recipiente contendo o meio líquido e uma barra magnética revestida de material inerte é colocado. O mesmo gira a barra magnética de modo circular, agitando o meio continuamente durante a incubação e também expondo maior superfície do meio à fase gasosa Contador de colônias É utilizado para contagem de colônias em Placa de Petri. É constituído de um suporte onde é colocada a placa e acima desta, em distância definida, situa-se uma lente (lupa) que possibilita o aumento de 1,5 vezes. Pode acompanhar uma caneta para contagem. Quando o equipamento está funcionando, a placa é iluminada, permitindo assim maior nitidez e realce das linhas que subdividem o suporte. 69 70 05/05/2020 36 Estufa incubadora (Microbiológica) É um tipo específico de estufa que apresenta além da porta metálica, uma porta de vidro. O sistema de aquecimento é controlado por resistência elétrica, através de um termostato e a temperatura acompanhada com termômetro analógico ou digital. Esse equipamento é utilizado como auxiliar no crescimento e reprodução dos microrganismos, uma vez que fornece a temperatura adequada a cada espécie microbiana. Estufa Incubadora BOD Estufa de esterilização É um tipo específico de estufa que apresenta um sistema de aquecimento controlado por resistência elétrica, é munida de termostato e termômetro para o controle de temperatura. Em geral este equipamento é utilizado para esterilizar vidrarias . 71 72 05/05/2020 37 Incubadora banho-maria É um equipamento indispensável para realizações dos ensaios de coliformes termotolerantes (44,5ºC ± 0,2ºC). O mesmo é dotado de um termômetro, termostato e tampa para o controle de temperatura do banho. Autoclave É um equipamento destinado à esterilização pelo calor úmido (vapor d´água sob pressão). Normalmente, são utilizados para esterilizar águas de diluições, meios de cultura que suportem temperaturas elevadas (115- 120ºC), materiais contaminados que vão ser descartados e outros. O autoclave de laboratório pode ser do tipo horizontal ou vertical, contendo: ◦ Caldeira cilíndrica hermeticamente fechada por uma tampa de bronze ou cobre ◦ Manômetro ◦ Válvula de escape de ar e de segurança. Em seu interior existe uma cesta metálica (móvel) onde são colocados todos os materiais a serem esterilizados. 73 74 05/05/2020 38 Potenciômetro ou pHmetro É um equipamento muito utilizado no laboratório de Microbiologia para se determinar o pH dos diferentes tipos de meios de culturas e soluções tampão 75 76 05/05/2020 39Balanças São destinadas a pesagens das diferentes substâncias usadas no preparo dos vários tipos de meios de cultura, soluções e corantes. Podem ser analógicas ou digitais. As balanças devem ser mantidas sobre uma base sólida protegidas de vibrações, e também de umidade e mudanças bruscas de temperatura. Geladeiras e freezers São utilizadas para a conservação de meios de cultura estéreis, soluções e amostras de contra prova. Se contiver material com risco biológico deverá ser identificada com o pictograma adequado. Culturas vivas não devem ser congeladas. 77 78 05/05/2020 40 Fluxo laminar Projetado para criar áreas de trabalho estéreis para a manipulação de materiais biológicos ou estéreis que não possam sofrer contaminação do meio ambiente, garantindo a segurança da manipulação. Técnicas em Microbiologia 79 80 05/05/2020 41 Técnicas básicas Esterilização Eliminação ou remoção de toda e qualquer forma de vida existente em um determinado material ou ambiente • Autoclave • Forno esterilizante Assepsia Conjunto de medidas que impede a entrada de microrganismos onde estes não são desejados • Trabalhar em áreas submetidas a limpeza e desinfecção • Trabalhar dentro da “zona de segurança” do bico de bunsen • Flambar alça de inoculação antes e após cada uso Técnicas básicas • Preparação de meios de cultura • Isolamento de culturas puras • Manutenção de células viáveis no laboratório • Microscopia 81 82 05/05/2020 42 83
Compartilhar