Espectrofotometria: Método Óptico de Análise

Prévia do material em texto

ESPECTROFOTOMETRIA
A espectrofotometria é o método de
análises óptico mais usado nas
investigações biológicas e fisico-
químicas.
O espectrofotômetro é um instrumento
que permite comparar a radiação
absorvida ou transmitida por uma
solução que contém uma quantidade
desconhecida de soluto (amostra), e uma
quantidade conhecida da mesma
substância (padrão).
O instrumento usado na espectroscopia
UV/VIS é chamado de espectrofotômetro.
Para se obter informação sobre a absorção
de uma amostra, ela é inserida no caminho
óptico do aparelho. Então, luz UV e/ou
visível em um certo comprimento de onda
(ou uma faixa de comprimentos de ondas) é
passada pela amostra. O
espectrofotômetro mede o quanto de luz
foi absorvida pela amostra.
A intensidade da luz antes de passar pela
amostra é simbolizada por I0, e a
intensidade da luz depois de passar pela
amostra é simbolizada por I
Lei de Lambert Beer
Princípios
Só é valida para luz monocromática:
1. Quanto maior a concentração da
amostra maior a absorção da luz
2. Quanto maior o caminho percorrido
pelo feixe de luz, maior a absorção da
luz
3. Quanto maior a intensidade de cor,
maior a absorção da luz.
A região do espectro do ultravioleta visível é
entre 400 e 800 nm.
Na prática, o fundamento deste método consiste
em comparar a absorvância produzida pela
solução da amostra com a absorvância produzida
por uma solução padrão de referência em um
determinado comprimento de onda:
Ca = Aa x Cp
Ap
Ca = concentração da amostra (μg/ml)
Cp = concentração do padrão (μg/ml)
Aa = absorvância da amostra
Ap = absorvância do padrão