CONTAGEM GLOBAL DE LEUCÓCITOS NA CÂMARA DE NEUBAUER

Prévia do material em texto

INSTITUTO FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO
CAMPUS VILA VELHA
]
Prática 04: 03/04/2019
CONTAGEM GLOBAL DE LEUCÓCITOS NA CÂMARA DE NEUBAUER
VILA VELHA
2019
1. INTRODUÇÃO
O hemograma é um exame para avaliar a quantidade de células presentes no sangue, possibilitando a contagem de hemácias, leucócitos e plaquetas do paciente. O leucograma, um dos parâmetros possíveis de obter através de um hemograma, é um exame específico para verificar o número de glóbulos brancos - também chamados de leucócitos - presentes no sangue e avaliar as características dessas células.
 
É possível chegar a um número de leucócitos por meio da contagem global e da contagem diferencial de leucócitos, que podem ser realizadas de forma manual ou automatizada. A contagem manual é realizada por meio de um esfregaço de sangue o qual é corado e analisado por meio de microscópio. Porém, na contagem automatizada, são determinados diretamente os valores absolutos de cada forma leucocitária pelo método de análise de leucócitos (sistema VCS-volume, condutividade e scatter-laser). 
Os valores de referência dos leucócitos ficam na faixa de 4.500 aos 10.000 glóbulos brancos/mm3. Realizando uma contagem diferencial, obtém-se valores para linfócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos e monócitos, os quais fornecem resultados que podem ser interpretados de maneira individual, de acordo com cada tipo de leucócito.
A Câmara de Neubauer é um dos dispositivos que possibilita a contagem global de leucócitos e consiste em uma lâmina grossa de uso microscópico com uma profundidade específica para depósito da amostra. Seu centro é formado por duas câmaras nas quais são gravadas linhas divididas em quadrantes de dimensões conhecidas, chamadas de malhas de leitura.
Como há a padronização destes quadrantes é possível visualizar a amostra ao microscópio e assim realizar a contagem determinando o número de células presentes naquela área determinada.
2. OBJETIVOS
Conhecer a técnica de contagem global utilizando a Câmara de Neubauer para determinar o número de leucócitos no sangue. Familiarizar os alunos com o número normal de leucócitos no sangue.
3. MATERIAIS E REAGENTES
· Amostra de sangue
· Câmara de Neubauer
· Micropipetas de 100 e 100 µL
· Eppendorfs
· Microscópio
· Líquido de Turk
4. PROCEDIMENTOS
· Foi pipetado 380 μL do líquido de Turk e transferido para o eppendorf. Em seguida foi pipetado 20 μL de sangue e transferiu-se para o eppendorf contendo o líquido de Turk. Agitou-se por dois minutos.
· O retículo da câmara foi completado com 10 µL do líquido, evitando excesso de líquido e bolhas de ar sob a lamínula. 
· Foi deixado em repouso por dois minutos para sedimentação dos glóbulos.
· Mediu-se o pH final do líquido no eppendorf.
· Foi localizado no microscópio o retículo e observou-se a distribuição uniforme dos leucócitos. 
· Foi realizada a contagem dos leucócitos encontrados nos quadros da Câmara de Neubauer.
5. RESULTADOS E DISCUSSÃO
A câmara de Neubauer foi levada ao microscópio, permitindo a visualização da malha e dos quadrantes. As marcações dos quadrantes têm dimensões distintas, permitindo que sejam realizadas contagens de células de tamanhos diferentes, grandes ou pequenas.
A contagem de células grandes foi realizada pela soma dos quadrantes 1, 2, 3 e 4. Cada um dos compartimentos é subdividido em 16 compartimentos médios, totalizando 64 compartimentos. Ao realizar a contagem na malha, a fórmula a seguir foi aplicada para obtenção do número real de células.
Área de cada quadrado maior: 1 mm2
Profundidade: 1/10 mm
Fator de correção da câmara: 10
Fator de diluição: 20
Valor de referência: 4000 – 10000/mm3
 
· Qual foi o número de leucócitos? O indivíduo pode ser considerado sadio?
Tabela 1: Contagem de leucócitos do aluno Felipe nos quadrantes da Câmara de Neubauer.
	Quadrante
	Número de Células
	1
	27
	2
	20
	3
	23
	4
	19
	Total
	89
Tabela 2: Contagem de leucócitos da aluna Katiellen nos quadrantes da Câmara de Neubauer.
	Quadrante
	Número de Células
	1
	29
	2
	18
	3
	37
	4
	26
	Total
	110
Leucócitos são também conhecidos por glóbulos brancos, são células produzidas pela medula óssea que têm a função de defender o organismo contra doenças, infecções e alergias. Há cinco tipos principais de leucócitos: linfócitos, neutrófilos, eosinófilos, basófilos e monócitos.
Os linfócitos representam cerca de 25% do total de células brancas no sangue. Já os monócitos destroem bactérias e outras partículas estranhas e representam entre 2% e 8% do total de leucócitos.
O número normal de leucócitos no sangue depende da idade e sexo da pessoa, entretanto, eles costumam ficar na faixa dos 4.000 a 10.000 glóbulos brancos/mm3. Logo, os alunos Felipe e Katiellen podem ser considerados sadios.
O aumento geral do número de leucócitos é chamado de leucocitose e pode estar relacionado a uma infecção bacteriana, inflamação, leucemia, traumatismo, exercícios intensos ou estresse. Já um número de leucócitos menor que o normal é conhecido como leucopenia, que pode estar relacionada à quimioterapia ou radioterapia e doenças imunológicas.
· Informe o pH encontrado
	ALUNOS
	pH
	Felipe
	4 - 5
	Katiellen
	4
· Explique as possíveis causas da lise das hemácias quando em contato com o líquido de Turk.
Ao expor a hemácia a uma solução Hipotônica sua membrana não suporta a pressão osmótica e se rompe, sobrando apenas os Leucócitos, que possuem maior resistência a diferença de pressão causada pelo líquido de turk.
6. CONCLUSÃO
O experimento foi bem sucedido. A contagem dos leucócitos nos alunos cobaia mostraram que ambos estão com o número de leucócitos normal no corpo (entre 4000 e 10000 Glóbulos brancos/mm3).
O uso da Câmara de Neubauer possibilita uma contagem mais eficaz dos leucócitos devido seus quadrantes facilitarem a sequência de contagem das células, aumentando sua fidelidade quantitativa.
A aplicação dos cálculos junto aos dados coletados possibilitou a todos do grupo o entendimento da prática realizada em sala e sua importância para área da saúde na identificação de pacientes doentes ou com anomalias.
7. REFERÊNCIAS
PANEGASSI, Jéssie, Leucócitos altos ou baixos: o que pode ser?
Disponível em: <https://www.minhavida.com.br/saude/tudo-sobre/20638-leucocitos> Redação Minha Vida - Acesso em: 07/04/2019
FREITAS, Rosana da Saúde de Farias e, ALBUQUERQUE, Emilio Sousa, MELO, Olindina Ferreira, Contagem diferencial de leucócitos em um laboratório particular na cidade de acaraú, ceará: estudo comparativo entre a metodologia automatizada e microscopia óptica. Disponível em: <http://www.hemoce.ce.gov.br/images/PDF/contagem%20diferencial%20de%20leuccitos%20em%20um%20laboratrio%20particular%20na%20cidade%20de%20acara%20cear.pdf> Acesso em: 09/04/2019