APS BIOTECNOLOGIA PCR

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Atividade Prática Supervisionada de 
Biotecnologia de Produtos Farmacêuticos
ATIVIDADE 1:
Leia os textos disponíveis nos links:
Reação em cadeia da polimerase: <https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr- electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr>
Eletroforese em gel: <https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr- electrophoresis/a/gel-electrophoresis>
Sequenciamento de DNA: <https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcr- electrophoresis/a/dna-sequencing>
Atividade 2:
O aluno deverá responder as questões:
1- Qual seria o fluxo em um laboratório de biologia molecular para se obter o resultado de um paciente que está realizando uma pesquisa de bactéria por PCR?
Primeiramente deve ser feita a Extração do DNA a partir da amostra coletada do paciente, esse processo passa por 4 etapas: lise das membranas lipídicas, purificação, precipitação e reidratação do DNA. Em seguida o DNA já está pronto para que seja realizada a PCR, e após término da amplificação da região específica do DNA desejada, é feita a eletroforese em gel com intuito de separar e classificar as moléculas amplificadas por meio do peso molecular ou quantidade de pares de bases.
2- A reação da PCR consiste em amplificar um fragmento (região específica) de DNA milhões de vezes, para que isso ocorra precisamos preparar a reação previamente. Que reagentes são necessários para a montagem de uma reação de PCR?
Os reagentes necessários são DNA molde, primers específicos, solução tampão, enzima taq polimerase, 4 tipos de nucleotídeos (adenina, timina, citosina, guanina), em alguns casos é adicionado o cloreto de magnésio (MgCl2).
3- Quais as etapas que constituem a reação em cadeia da polimerase (PCR)?
O processo de reação em cadeia da polimerase é realizado por meio de variações de temperatura. Após preparação do tubo com os reagentes necessários, a amostra é colocada em um termociclador onde ocorrem as 3 etapas da PCR. 
Na primeira fase, chamada de desnaturação, a amostra é aquecida até 96°C com intuito de desnaturar as fitas de DNA, formando o molde de fita simples. Em seguida é iniciada a fase de anelamento, onde a amostra é resfriada à uma temperatura entre 55° e 65°C para que os primers se liguem à sequência de bases para que foram desenhados, dando sequência a fase de extensão. Nesta fase ocorre aumento de temperatura até 72°C para enzima Taq polimerase localize o primer, e a partir disso sintetize uma nova fita de DNA adicionando os nucleotídeos correspondentes a cada códon. Dessa forma o ciclo se repete de 25 a 35 vezes, e a cada novo ciclo o número de moléculas de DNA se duplica.