Questão 4

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Questão 4. Acerca dos métodos cromatográficos, responda as questões abaixo.
 a) (1,5) Explique o princípio da separação de misturas de compostos orgânicos por “cromatografia líquida” e por “cromatografia em fase gasosa”.
 b) (1,5) Como se pode perceber no cromatograma abaixo, os picos em 9 e 10, bem como em 26 e 27 não apresentaram boa separação. Você como um especialista em cromatografia, o que poderia ser feito para melhorar esta separação? Justifique.
a) O principio da cromatografia é realizar a separação de constituintes de uma mistura de substâncias, por interação dos seus componentes em duas fases. Os componentes são separados pela diferença de afinidade pelas duas fases. É utilizada para identificação, quantificação ou purificação de misturas complexas. Realizada através de técnicas gasosas, líquidas, iônicas, entre outras. 
O mecanismo de separação na cromatografia gasosa é baseado na separação dos componentes entre a fase móvel, que é um gás contendo os analitos, e a fase estacionária que é um líquido não volátil ou um sólido. Qualquer substância orgânica ou inorgânica, que tem pressão de vapor de até 60torr (0,079 atm) pode ser analisada por cromatografia gasosa. A amostra deve ser volátil na temperatura de operação da coluna (fase estacionária) e será arrastada pela fase móvel, nisto, deve se dissolver pelo menos parcialmente pelo gás, deve ser volátil, e precisa ter ponto de ebulição até 300 ºC e ser termicamente estável. Os gases de arraste mais comuns são hélio, nitrogênio e hidrogênio. A finalidade é arrastar as moléculas na coluna cromatográfica e no detector, sem interagir com a amostra nem com a fase estacionária. As separações podem ser obtidas por cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa de alta resolução (CGAR). A diferença entre os dois métodos está na coluna. 
A cromatografia gasosa possui alto poder de resolução.
Na cromatografia líquida a fase móvel é um líquido, podendo ser um líquido específico ou uma mistura de líquidos, que é arrastado na coluna. Utilizada para separar e quantificar componentes em uma mistura líquida. As separações podem ser obtidas por cromatografia líquida clássica (CLC) ou por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE, ou do inglês HPLC). Na CLAE a fase móvel, que é líquida, movimenta-se através da coluna contendo a fase estacionaria (sólido ou líquido). O soluto interage com as fases estacionária e móvel por adsorção (separação sólido-líquido), partição (separação líquido-líquido) ou ambos. 
b) Se estiver utilizando uma coluna empacotada deve-se trocar por uma capilar, que apresenta maior poder de resolução. Pois, para haver uma melhor separação é necessário se ter melhor resolução. 
A temperatura influência na resolução da análise. Então, o aumento da resolução pode ser obtido ao aumentar a temperatura da corrida. Uma maior temperatura pode melhorar a resolução (equilíbrio alcançado mais rapidamente), permitindo uma separação mais rápida, sem a perda de resolução.
Outro fator que pode ser utilizado é a mudança da fase estacionaria, para assim, se obtiver uma melhor separação dos picos. A eficiência de uma separação está relacionada, dentre diversos fatores, à qualidade da coluna cromatográfica.
O aumento da coluna pode alongar os picos, mas também aumenta o numero de pratos teóricos e, consequentemente, o poder de separação. Quanto mais afastado os picos, melhor é a separação.
Também é necessário a escolha da composição de solvente adequado, que permita uma boa separação.