CONTEUDO 2

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25/10/2017 UNIP - Universidade Paulista : DisciplinaOnline - Sistemas de conteúdo online para Alunos.
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Princípio de transformação Bacteriana: 
Após o fragmento do DNA ter sido clonado no vetor, ou seja, a construção da
molécula do DNA recombinante, ele deve, então, ser introduxido na célula
hospedeira, A célula hospedeira ideal é a bactéria, pois ela se divide
rapidamente. Algumas bactérias dividem a cada 20 minutos. alguns vetores se
dividem junto com o cromossomo da bactéria, porém, muitos vetores são
multicópias, ou seja, se multiplicam independente da divisão do cromossomo da
bactéria.
Algumas bactérias são capazes de captar fragmentos de DNA do meio externo, e
tal captação constitui outro modo pelo qual as bactérias podem trocar os seus
genes. O DNA captado for geneticamente diferente da célula que recebeu o
DNA, ou seja, se o DNA inserido na bactéria não for originalmente pertecente à
ela, concluímos que esta bactéria foi transformada. O processo pelo qual
inserimos um gene de interesse na bactéria chama-se Transformação. As
bactérias conseguem captar fragmentos de DNA doo meio ambiente. Dentro da
célula, esses fragmentos conseguem integra-se ao cromossomo.
Após o desenvolvimento da técnica de clonagem do gene, ou de um fragmento
de DNA de interesse, muitos pesquisadores desejam analisar suas
características através da reintrodução desse gene em diferentes tipos
celulares. Existem inúmeras razões para isso:
1- Os elementos genéticos, responsáveis pela regulação da expressão do gene,
podem ser determinados através de mutações nesse gene e pela análise
subseqüente de sua atividade sob condições fisiológicas variadas
2- Os efeitos que um gene pode ter sobre o crescimento celular podem ser
investigados através da produção de linhagens celulares que, ao expressarem o
gene, definem o seu fenótipo;
3- linhagens celulares podem ser produzidas para superexpressar o gene,
permitindo a purificação de seu produto para a caracterização bioquímica, ou
para a produção em larga escala para ser utilizado industrialmente.
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A partir do conhecimento da capacidade da bactéria de ser transformada, a
biotecnologia é capaz de realizar a introdução de uma molécula de DNA
recombinante em uma célula, seja ela bactériana, de levedura, vegetal,
animal. A molécula de DNA recombinante transporta o DNA de interesse até a
célula hospedeira. 
Para a transformação de bactéria com DNA plasmidial e DNA cromossômico de E.
coli, as bactérias tem que ser submetida ao tratamento que induz a um estado
de "competência" transitório, durante o qual elas se tornam capazes de aceitar
DNAs derivados de uma grande variedade de fontes.
• Para a transformação de uma linhagem bacteriana com um DNA plasmidial,
pode ser obtido através do tratamento com cloreto de cálcio que permite a
introdução de DNA em células bacterianas com uma eficiência de 107 colônias
transformadas/mg de DNA plasmidial, com um custo relativamente baixo.
• Células bacterianas podem, alternativamente, ser transformadas por
eletroporação. Esse método, tem resultado em um aumento na eficiência de
transformação de 109-1010 transformantes//mg de DNA.
 O método baseia-se na introdução de DNA em bactérias competentes que são
submetidas a um campo elétrico de alta voltagem, que, ao abrir pequenos poros
na membrana celular, propicia a entrada do DNA na célula, através dessas
aberturas.
 
 
 
 
 
 
 
Exercício 1:
 
Após a clonagem de um gene em qualquer vetor, a molécula de DNA
recombinante (inserto e vetor unidos) pode ser introduzida dentro de uma célula
hospedeira apropriada. Qual a importância desse procedimento.
I – É somente um procedimento que se faz para estocar o DNA recombinante
recém sintetizado
II – Podem ser produzidos linhagem celulares para a superexpressão do gene,
permitindo assim a purificação do seu produto (proteína)
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III – O DNA de interesse será replicado dentro da célula hospedeira
 
Podemos afirmar que:
 
 
A)
 
A – As alternativas I e II estão incorretas
 
B)
 
B – As alternativas I e III estão incorretas
 
C)
 
C - todas as alternativas estão incorretas
 
D)
 
D – Somente a Alternativa I está incorreta
 
E)
 
E - Somente a Alternativa II está incorreta
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(D)
Comentários:
B) Após o fragmento do DNA ter sido clonado no vetor, ou seja, a construção da
molécula do DNA recombinante, ele deve, então, ser introduxido na célula
hospedeira, A célula hospedeira ideal é a bactéria, pois ela se divide
rapidamente. Algumas bactérias dividem a cada 20 minutos. alguns vetores se
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dividem junto com o cromossomo da bactéria, porém, muitos vetores são
multicópias, ou seja, se multiplicam independente da divisão do cromossomo da
bactéria. 
A) Após o fragmento do DNA ter sido clonado no vetor, ou seja, a construção da
molécula do DNA recombinante, ele deve, então, ser introduxido na célula
hospedeira, A célula hospedeira ideal é a bactéria, pois ela se divide
rapidamente. Algumas bactérias dividem a cada 20 minutos. alguns vetores se
dividem junto com o cromossomo da bactéria, porém, muitos vetores são
multicópias, ou seja, se multiplicam independente da divisão do cromossomo da
bactéria. 
D) Após o fragmento do DNA ter sido clonado no vetor, ou seja, a construção da
molécula do DNA recombinante, ele deve, então, ser introduxido na célula
hospedeira, A célula hospedeira ideal é a bactéria, pois ela se divide
rapidamente. Algumas bactérias dividem a cada 20 minutos. alguns vetores se
dividem junto com o cromossomo da bactéria, porém, muitos vetores são
multicópias, ou seja, se multiplicam independente da divisão do cromossomo da
bactéria. 
Exercício 2:
 
As bactérias para sofrer o processo de transformação necessita de um
tratamento que induz o estado de competência transitório nas bactérias que
irão receber o plasmídeo. O princípio deste método se basea?
I – Tratar a célula bacteriana com soluções de cloreto de cálcio gelada
II _ marcar a célula com uma marca de seleção que confira a célula uma
resistência a antibiótico.
III – Romper a parede da célula antes da transformação bacteriana.
Podemos afirmar que:
 
 
A)
 
A – As alternativas I e II estão incorretas
 
B)
 
B – Somente a Alternativa II está incorreta
 
C)
 
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C - Somente a Alternativa I está incorreta
 
D)
 
D – As alternativas II e III estão incorretas
 
E)
 
E - Todas as alternativas estão incorretas
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(D)
Comentários:
B) Para a transformação de bactéria com DNA plasmidial e DNA cromossômico
de E. coli, as bactérias tem que ser submetida ao tratamento que induz a um
estado de "competência" transitório, durante o qual elas se tornam capazes de
aceitar DNAs derivados de uma grande variedade de fontes. • Para a
transformação de uma linhagem bacteriana com um DNA plasmidial, pode ser
obtido através do tratamento com cloreto de cálcio que permite a introdução de
DNA em células bacterianas com uma eficiência de 107 colônias
transformadas/mg de DNA plasmidial, com um custo relativamente baixo. •
Células bacterianas podem, alternativamente, ser transformadas por
eletroporação. Esse método, tem resultado em um aumento na eficiência de
transformação de 109-1010 transformantes//mg de DNA. 
D) Para a transformação de bactéria com DNA plasmidial e DNA cromossômico
de E. coli, as bactériastem que ser submetida ao tratamento que induz a um
estado de "competência" transitório, durante o qual elas se tornam capazes de
aceitar DNAs derivados de uma grande variedade de fontes. • Para a
transformação de uma linhagem bacteriana com um DNA plasmidial, pode ser
obtido através do tratamento com cloreto de cálcio que permite a introdução de
DNA em células bacterianas com uma eficiência de 107 colônias
transformadas/mg de DNA plasmidial, com um custo relativamente baixo. •
Células bacterianas podem, alternativamente, ser transformadas por
eletroporação. Esse método, tem resultado em um aumento na eficiência de
transformação de 109-1010 transformantes//mg de DNA. 
Exercício 3:
 
Nas bactérias, os genes que confere resistência aos antibióticos encontra-se
geralmente nos plasmídeos transferidos de um organismo para o outro durante
o processo de conjugação. A partir desta observação, aplicou-se esse conceito
no processo de transformação bacteriana. O processo de transformação é a
absorção de um DNA estranho por células bacterianas. Em 1970, foi
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desenvolvido um processo de aumentar a capacidade das células de E. coli de
serem transformadas. Quando se trabalha com DNA recombinante, normalmente
utilizam-se plasmídeos que carregam genes de seleção. Analise as questões a
seguir a respeito desses genes.
I - Uma marca de seleção pode ser um gene que confira à célula transformada
uma nova característica, ausente na célula não transformada.
II - Uma marca de seleção pode conferir a resistência ao antibiótico específico,
como, por exemplo, a resistência a ampicilina (ampR).
III – Após a transformação bacteriana, as células que foram transformadas,
serão sensíveis ao antibiótico e portanto não produzirão colônias no meio
contendo antibiótico.
IV – Os células que possuem o gene de resistência ao antibiótico, quando
expostas à presença do antibiótico, sintetizam as enzimas que conferem
resistência a ele, sobrevivendo à ação seletiva.
 
Considerando V (verdadeira) e F (falsa), pode-se afirmar que as afimrações são
respectivamente:
 
A)
 
 V, V, V, F
 
B)
 
 F, V, V, F
 
C)
 
 F, F, V, V
 
D)
 
V, V, F, V
 
E)
 
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 F, V, V, V
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(D)
Comentários:
A) Conferem com suas afirmações. 
B) Conferem com suas afirmações. 
C) Conferem com suas afirmações. 
D) Conferem com suas afirmações. 
Exercício 4:
 
As técnicas de manipulação genética permitem que os genes eucarióticos sejam
introduzidos em células procarióticas e que estas sejam capazes de produzir a
proteínas de interesse. Porém nem todas as proteínas eucarióticas são
sintetizadas eficientemente em bactérias em função das suas limitações. Para
solucionar este esta limitação da bactéria, iniciou-se o processo de tranfecção.
A respeito do processo de transfecção.
 
I - É a introdução de DNA em células eucarióticas. A transfecção pode ser
dividida em transiente ou temporária (o DNA não se integra ao cromossomo) e
transfecção estável ou permanente (o DNA se integra ao cromossomo).
II - A transfecção utiliza vetores virais, porque apresenta uma forma eficiente
de atravessar as barreiras existentes para chegar ao interior da célula-alvo.
III – Para a introdução do DNA em células eucarióticas, há somente um método
disponível atualmente, este método basea-se exclusivamente na transfecção
mediada por fosfato de cálcio.
Podemos afirmar que:
 
 
A)
 
 As alternativas I e II estão incorretas
 
B)
 
 Somente a Alternativa II está incorreta
C)
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 Somente a Alternativa III está incorreta
 
D)
 
 As alternativas II e III estão incorretas
 
E)
 
 Todas as alternativas estão incorretas
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(C)
Comentários:
D) O processo de introduzir deliberadamente ácidos nucleicos, tais como ácido
desoxirribonucleico (ADN) ou de ácido ribonucleico (ARN) em células eucarióticas
é conhecido como A transfecção é realizada quando se na célula de mamífero. O
mesmo procedimento é referido como transformação, quando são realizados em
bactérias, plantas, fungos e algas. Transfecção é um processo muito útil
utilizada no estudo de genes e conceber estratégias relacionadas com a terapia
de genes. 
A) O processo de introduzir deliberadamente ácidos nucleicos, tais como ácido
desoxirribonucleico (ADN) ou de ácido ribonucleico (ARN) em células eucarióticas
é conhecido como A transfecção é realizada quando se na célula de mamífero. O
mesmo procedimento é referido como transformação, quando são realizados em
bactérias, plantas, fungos e algas. Transfecção é um processo muito útil
utilizada no estudo de genes e conceber estratégias relacionadas com a terapia
de genes. 
B) O processo de introduzir deliberadamente ácidos nucleicos, tais como ácido
desoxirribonucleico (ADN) ou de ácido ribonucleico (ARN) em células eucarióticas
é conhecido como A transfecção é realizada quando se na célula de mamífero. O
mesmo procedimento é referido como transformação, quando são realizados em
bactérias, plantas, fungos e algas. Transfecção é um processo muito útil
utilizada no estudo de genes e conceber estratégias relacionadas com a terapia
de genes. 
C) O processo de introduzir deliberadamente ácidos nucleicos, tais como ácido
desoxirribonucleico (ADN) ou de ácido ribonucleico (ARN) em células eucarióticas
é conhecido como A transfecção é realizada quando se na célula de mamífero. O
mesmo procedimento é referido como transformação, quando são realizados em
bactérias, plantas, fungos e algas. Transfecção é um processo muito útil
utilizada no estudo de genes e conceber estratégias relacionadas com a terapia
de genes. 
Exercício 5:
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A tecnologia básica envolvida no processo de engenharia genética difere em
muitos pontos do cruzamento seletivos feito pela genética clássica. Sobre a
engenharia genética, podemos afirmar que:
 
I. A possibilidade de transferência de genes é bastante limitada entre
organismos de diferentes espécies.
II. Na transfecção ou na transformação faz-se a transferência de um gene
conhecido, enquanto que no cruzamento seletivo, essa transferência ocorre ao
acaso.
III. Há barreiras taxonômicas à transferência de genes, ou seja, só pode ocorrer
se limitada à troca entre organismos da mesma espécie.
IV. A transferência do gene de um organismo para outro ocorre através de um
pequeno fragmento de DNA chamado vetor, que pode ser um vírus ou um
plasmídio.
Indique a alternativa em que todas as afirmativas são falsas.
 
 
A)
 
a) II, III e IV.
 
 
B)
 
b) II e III.
 
 
C)
 
c) I, II e IV.
 
 
D)
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d) I e III.
 
E)
 
e) Todas as alternativas são falsas
O aluno respondeu e acertou. Alternativa(D)
Comentários:
B) É um conjunto de tecnologias, baseadas na tecnologia do DNA recombinante,
utilizadas para alterar a composição genética de um ser vivo, incluindo o
isolamento, a manipulação e a transferência de genes intra e interespecíficos
para produzir organismos novos ou melhorados.A clonagem de DNA acontece em
sequencia. Dessa forma, as novas moléculas de DNA produzidas são inseridas
em células bacterianas que são amplificadas por replicação resultando em
clones bacterianos idênticos que contêm o DNA recombinante. 
D) É um conjunto de tecnologias, baseadas na tecnologia do DNArecombinante,
utilizadas para alterar a composição genética de um ser vivo, incluindo o
isolamento, a manipulação e a transferência de genes intra e interespecíficos
para produzir organismos novos ou melhorados.A clonagem de DNA acontece em
sequencia. Dessa forma, as novas moléculas de DNA produzidas são inseridas
em células bacterianas que são amplificadas por replicação resultando em
clones bacterianos idênticos que contêm o DNA recombinante.