Microscopia Óptica e Eletrônica

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ALUNA: Milvia Rodrigues da Costa 
Matrícula: 20181013090030 
 
01.Quais as diferenças entre a microscopia óptica e a eletrônica? 
A diferença entre as duas é basicamente a visualização com relação ao tamanho do 
microrganismo, do tamanho da imagem gerada e consequentemente o princípio dessas duas 
microscopias é diferente. A microscopia óptica utiliza a luz visível para gerar a imagem ampliada 
do micro-organismo que está sendo estudado, enquanto a microscopia eletrônica utiliza feixe 
de elétrons e isso faz com que haja um nível de detalhamento muito maior na microscopia 
eletrônica, fazendo dela uma microscopia mais complexa com relação a preparação do micro-
organismo e do analista para manusear esse equipamento, ela também é mais cara que a 
microscopia óptica. 
02. Qual a finalidade da técnica em gota pendente? 
Técnica na qual o inoculo (cultura de microrganismo) fica suspenso em uma lâmina escavada 
(lâmina de Koch). Essa técnica serve para observar a mobilidade e/ou presença de bactérias. 
 
03. Diferencie o termo ampliação e resolução. 
Resolução capacidade de distinguir dois objetos que sejam visíveis(adjacentes) como distintos e 
separados; determinada pelas propriedades da própria lente (não pode ser alterada pelo 
analista, são propriedades da própria lente) e propriedades físicas da luz como comprimento de 
onda. 
Ampliação é a capacidade de fazer um objeto parecer maior do que ele realmente é. 
 
04. Como é calculado o diâmetro do menor objeto distinguível no microscópio óptico? 
Diâmetro do menor objeto distinguível: 0,5λ 
abertura numérica 
 
onde, 
λ: comprimento de onda da luz 
Abertura numérica: Já definido na lente pelo fabricante 
 
 
 
 
05. Qual a finalidade das técnicas de coloração? 
Para aumentar o contraste e consequentemente, melhorar a visualização. 
06. Como os corantes atuam nas células dos micro-organismos? 
Através do poder de atração entre ambos onde os corantes são básicos e carregados 
positivamente e se ligam as superfícies celulares que tendem a ser carregadas negativamente. 
07. Descreva os procedimentos para realização da coloração de gram e explique por que ao final 
do procedimento as bactérias gram-negativas se colorem de rosa e as gram-positivas de roxo 
Procedimento: 
- Cobrir o esfregaço fixado pelo calor com cristal violeta por 1 min; 
-Adicionar solução de iodo por 1 min; 
-Descorar rapidamente com álcool- cerca de 20seg; 
- Coloração de contraste com Safranina por 1-2 min. 
A coloração de Gram consiste em tratar bactérias sucessivamente com cristal violeta, lugol, 
álcool-acetona e fuccina (ou safranina). O cristal violeta e o lugol formam um complexo 
denominado iodopararosanilina, o qual confere coloração roxa tanto pelas bactérias Gram-
positivas, quanto as Gram-negativas. Com a adição de álcool-acetona, as bactérias Gram-
negativas liberam o complexo formado, pois a camada de peptidoglicano é de pequena 
espessura, enquanto as Gram-positivas retêm o complexo, permanecendo roxas. A adição de 
fuccina (ou safranina) não altera a cor das Gram -positivas, mas confere a cor avermelhada às 
bactérias Gram-negativas, que foram descoloradas pelo álcool-acetona. 
 
08. Diferencie as microscopias de campo claro, de contraste de fase, de campo escuro e 
fluorescência 
Campo claro: Espécimes são visualizados em virtude das discretas diferenças de contraste 
(densidade) existentes entre eles e o meio circundante. É o microscópio “padrão”, Em geral, 
requer que a amostra seja fixada e corada antes da observação. Entretanto, desde que a 
iluminação seja ajustada fechando-se um pouco mais a passagem de luz pela condensadora, é 
possível observar células a fresco, isto é, sem coloração prévia. 
Contraste de fase: Baseada no princípio de que as células diferem de seu meio circundante 
quanto ao índice de refração. Dispensa o uso de corantes, permitindo a observação de células 
vivas. Um sistema de filtros (anéis de fase) interfere no trajeto da luz, criando um contorno 
claro/escuro em torno das estruturas celulares. Esse contraste permite a observação de células 
vivas, mas se elas estiverem muito aglomeradas, a imagem se torna confusa, requerendo um 
sistema óptico mais elaborado. 
Campo escuro: O espécime é atingido apenas lateralmente pela luz e a única luz que atinge a 
lente corresponde aquela desviada pelo espécime. (é levemente melhor que o campo claro). 
Fluorescência: O Microscópio de fluorescência é utilizado para visualizar espécimes que 
fluorescem. 
 
 09. A microscopia óptica também pode produzir a visualização de células em três dimensões, 
explique. 
O microscópio confocal de varredura proporciona secções ópticas finas, e pode ser usado para 
reconstruir uma imagem tridimensional, células vivas podem ser observadas em contraste de 
fase, contraste de interferência diferencial, ou óptica de campo escuro. Todas as formas de 
microscopia óptica são facilitados por técnicas de processamento eletrônico de imagens, que 
ampliam e retiram a imagem. 
 
10. Qual a finalidade da microscopia eletrônica? Diferencie, com relação à utilização, o 
Microscópio eletrônico de varredura e o Microscópio eletrônico de transmissão. 
O microscópio eletrônico possui dois tipos de transmissão e de varredura. A microscopia 
eletrônica de transmissão permite a observação do interior da célula e de suas estruturas e 
organelas. Infelizmente, como a observação é em geral feita em fatias muito finas das células, 
temos sempre imagens bidimensionais de objetos que, na realidade, são tridimensionais. Essa 
dificuldade foi, ao menos parcialmente contornada pela microscopia eletrônica de varredura, 
onde a resolução de detalhes da célula se combina à observação da sua estrutura tridimensional. 
11. Dentre os microscópios ópticos apresentado as em sala, qual você escolheria para compor 
um laboratório de microbiologia? Justifique. 
Óptico de campo claro, pois é o mais utilizado em todos os laboratórios de microbiologia e o 
microscópio confocal que possui, além de uma fonte de luz visível, uma fonte de luz ultravioleta 
e uma fonte de raio laser.