PCR - apresentação

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PCR
Ana Letícia Diniz Gomes
Ana Raquel de Carvalho Marques
Anna Maria Fernandes da Luz
Darliane Jesus Moreira
Laura Ary de Matos
Letícia Gabrielly Marques Lobato
Maria Fernandes Nunes da Costa
R E A Ç Ã O D E C A D E I A E M P O L I M E R A S E
Técnica de clonagem gênica que ocorre dentro de
tubos de ensaio (in vitro).
Nela são utilizados primers (oligonucleotídeos
iniciadores), a taq polimerase (enzima DNA
polimerase) e ciclos de aquecimento e resfriamento,
através de um aparelho chamado Termociclador.
PCR
Foi desenvolvida por Kary Mullis em 1983,
recebendo o prêmio Nobel de química em 1994;
É uma técinica barata, fácil de fazer e com resultados
confiáveis. Nelas são produzidas grande quantidade
de cópias a partir de pequena quantidade de DNA;
Muito utilizado na medicina forence, laboratórios de
pesquisa, testes genéticos, diagnóstico, entre outros.
Laboratórios de pesquisa;
Ciências forences;
Testes genéticos e diagnósticos;
Amplificar genes associados a desordens 
genéticas a partir do DNA;
Testar DNA bacteriano ou viral.
AplicaçõesAplicaçõesAplicações
Procedimento doProcedimento do
 PCRPCR Reagentes
Reagentes
ConsideraçõesConsiderações 
Programas utilizadosProgramas utilizados 
 ReagentesReagentes 
utilizadosutilizados 
Água
Tampão 
DNA molde
iniciadores 
nucleotídeos 
mg++
DNA polimerase
Tubo pcr
Termociclador
Validade 
Número de
congelamento e
descongelamentos
Contaminação
Quantidade 
ConsideraçõesConsiderações 
Programas Primer3Plus ( free,
interface, web )
PrimerSelect 
Primer Express 
Primer Premier 
O procedimento de PCR
envolve três etapas, cada
uma repetida muitas vezes.
Desnaturação;Desnaturação;Desnaturação;
Anelamento ou hibridização;Anelamento ou hibridização;Anelamento ou hibridização;
Extensão ou polimerização.Extensão ou polimerização.Extensão ou polimerização.
111...
222...
333...
Etapas da PCREtapas da PCREtapas da PCR
Biologia Celular e Molecular
(96°C) Aquece fortemente a reação
para separar, ou desnaturar as fitas
de DNA. Isso proporciona um molde
de fita simples para a próxima etapa.
Desnaturação
AnelamentoAnelamentoAnelamento
(55-65°C) Resfria a reação para que os primers
possam se ligar às suas sequências
complementares no DNA molde de fita simples.
ExtensãoExtensãoExtensão
(72°C) Eleva a temperatura da reação para
que a Taq polimerase estenda os primers,
sintetizando novas fitas de DNA.
https://pt.khanacademy.org/science/biology/biot
ech-dna-technology/dna-sequencing-pcr-
electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr
Amplificação do de fragmento de DNA através da PCR;
Maior rapidez de execução;
Aspirado de linfonodos, medula óssea, e de leucócitos de sangue periférico;
Há grande variação na sensibilidade da PCR: método de extração do DNA
utilizado, escolha dos oligonucleotídeos iniciadores, amostras clínicas utilizadas,
tempo de infecção, homogenização das amostras (presença de coágulos);
PCR e LeishmaniosePCR e Leishmaniose
AplicaçõesAplicaçõesAplicações
da rotinada rotinada rotina
clínicaclínicaclínica
Causada por protozoário e
associada a mortalidade
neonatal, abortos,
natimortos e morte fetal.
Toxoplasmose
Zoonose bacteriana que
provoca retenção de placenta,
inflamação das articulações e
dos testículos, nascimento de
bezerros fracos.
Brucelose
Zoonose bacteriana
prevalente no mundo; causa
abortos, nascimento
prematuro e mortalidade
neonatal em animais 
 domésticos/de produção.
Leptospirose
AplicaçõesAplicaçõesAplicações
do DNAdo DNAdo DNA
recombinanterecombinanterecombinante
Hormônio do crescimento e insulina;
Produção de vacinas.
Indústria farmacêutica
Produção de
substâncias/enzimas.
Indústria
alimentícia
Desenvolvimento de
técnicas de diagnóstico.
Pesquisa médica
ReferênciasReferênciasReferências
http://www.pcs.uem.br/drgenetica/pcr/pcr-
convencional/quais-as-etapas
http://www.biomedicinapadrao.com.br/2011/10/reacao-em-
cadeia-da-polimerase-pcr.html?m=1
NUNES, CÁRIS M., et al. "Avaliação da reação em cadeia pela
polimerase para diagnóstico da leishmaniose visceral em
sangue de cães." Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária
16.1 (2007): 5-9.
Melo, A. N., et al. "Aplicações da técnica de PCR na reprodução
animal." R. bras. Reprod. Anim. (2012): 105-112.
http://pt.m.wikipedia.org/wiki/Reação_em_cadeia_da_polim
erase
http://youtu.be/XR7ZonN3vuQ