reação de biureto

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REAÇÃO DE BIURETO
O Biureto é um reagente analítico, composto de Hidróxido de Sódio (NaOH 2,5N) e sulfato de cobre 1% (CuSO4). A reação do Biureto é detectar a presença de ligações peptídicas, dando positiva para proteínas e peptídeos com três ou mais resíduos de aminoácidos. A reação é também positiva para substâncias que contêm 2 carbonilas (-CONH2) ligadas diretamente ou através de um único átomo de carbono ou nitrogênio. Os compostos com duas ou mais ligações peptídicas atingem uma coloração violeta quando submetidos a uma solução diluída de sulfato de cobre em meio alcalino. A intensidade da cor varia com a concentração de proteínas.
Uma ligação peptídica ocorre entre duas moléculas quando o grupo carboxilo de uma molécula reage com o grupo amina de outra molécula, liberando uma molécula de água ( H2O ). Isto é uma reação de síntese por desidratação que ocorre entre moléculas de aminoácidos. Dependendo da complexidade da proteína ou do peptídeo em questão, a cor do produto de reação a presença do Biureto varia substancialmente: proteínas dão coloração violeta, peptídeos dão coloração rosa. Para que a reação do Biureto seja positiva há necessidade da presença de pelo menos duas ligações peptídicas na molécula, portanto, aminoácidos e dipeptídeos não apresentam reação positiva ao Biureto.
Resultados: Tubo 1: Resultado NEGATIVO Coloração azul muito pálida. A água não tem componentes de proteínas em sua composição.
Tubo 4: Resultado POSITIVO Coloração púrpura A Clara de ovo contém proteínas (albumina, inclusive) que apresentam ligações peptídicas.
tubo: resultado positivo a gelatina é feita de colágeno uma fonte rica de proteínas derivada da pele de animais
Voltando à gelatina, para a sua produção, a proteína colágeno é hidrolisada (de forma resumida, entenda isso como “quebrada quimicamente”), formando assim cadeias de peptídeos menores que nunca voltarão a ser colágeno novamente (lembre-se disso na próxima vez que alguém disser que consumir gelatina ou colágeno é a solução para recuperar a elasticidade da pele).
Quando estamos preparando a gelatina, as moléculas de peptídeos são dissolvidas na água, processo que é facilitado pelo fato de a água estar quente. Ao resfriar, com a diminuição da energia, as moléculas de peptídeos vão se religando, “tentando” refazer as ligações que tinham sido quebradas na hidrólise. Se houver moléculas em quantidade suficiente, o resultado dessa tentativa é uma rede tridimensional que aprisiona moléculas de água por capilaridade. Temos, então, o que chamamos de hidrocoloide
material 2:
O Teste do Biureto é um teste geral para proteínas e peptídeos com mais
de dois aminoácidos. A reação do Biureto é o resultado da formação de
um complexo entre Cu2+ e as proteínas ou peptídeos com mais de dois
aminoácidos. As ligações peptídicas são ligações amida, e o par de elétrons
dos átomos de nitrogênio das amidas encontram-se disponíveis, podendo
servir de ligante para o átomo de cobre II. O sulfato de cobre II em meio
alcalino apresenta coloração azul clara, na presença de proteínas ou peptídeos forma produto violeta caracterizando a formação do complexo de
coordenação entre o cobre e os átomos de nitrogênio das ligações peptídicas
adjacentes, agindo como um ligante bidentado (Figura 5). Os dipeptídeos
dão reação negativa por apresentarem apenas uma ligação peptídica. Os
aminoácidos também dão reação negativa por não apresentarem ligação
peptídica.
Soluções alcalinas que contenham biureto desenvolvem uma coloração violeta, quando em presença de sulfato de cobre (CUSO4). Esse fenômeno deve-se à formação de um complexo entre o íon Cu2+ e os átomos de nitrogênio presentes na molécula do biureto. O esquema
O aparecimento de coloração violeta indica que os íons Cu2+ provenientes do CuSO4 formaram complexo com ligações peptídicas presentes na amostra, indica que se trata de uma proteína ou peptídeo
O método de biureto tem sido aplicado para determinar a concentração de proteínas totais em diversos meios, sendo eles: soro ou plasma sangüíneo15,16,18,19, líquido cérebro espinhal (líqüor)20,21, urina22-24, alimentos25-29, saliva30, fibrinogênio31 e tecido animal32. O método de biureto tem sido, também, utilizado em análise por injeção em fluxo19, assim como em alguns métodos cinéticos21,33. Apesar de ser rápido, utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas9,20,21,30, este método não é muito sensível, como foi destacado por diversos autores20,24,30, colocando-o em grande desvantagem, em relação a outras metodologias, e por isto tem sido, ao longo dos anos, substituído por métodos mais sensíveis. Mesmo assim, o método de biureto continua sendo recomendado para a determinação da concentração de proteínas totais em plasma sangüíneo pela Associação Americana de Análises Clínicas e por diversos autores15,16,34, bem como para a determinação de proteínas totais em saliva30 e leite29, quando comparado com outros métodos.
Interferentes
Verifica-se que o método de biureto está sujeito à interferência de substâncias que possam reagir com os íons cobre (II). Na tabela 1 estão listados alguns interferentes; os métodos para sua eliminação variam conforme o caso, como discutido nas referências citadas nessa tabela, no entanto, recomendamos a precipitação das proteínas com ácido tricloroacético e posterior solubilização para determinação das mesmas.
Essa ligação carbono- -nitrogênio, chamada ligação peptídica, é obtida formalmente por exclusão intermolecular de uma molécula de água (Figura 1), o que leva à formação de uma cadeia polipeptídica, denominada de estrutura primária da proteína. A estrutura primária .Essa ligação carbono- -nitrogênio, chamada ligação peptídica, é obtida formalmente por exclusão intermolecular de uma molécula de água (Figura 1), o que leva à formação de uma cadeia polipeptídica, denominada de estrutura primária da proteína. A estrutura primária
Determinar proteínas tem relevância em várias áreas como, por exemplo, em análises clínicas, favorecendo o diagnóstico de certas doenças correlacionadas com a alteração da quantidade de proteínas nos fluidos biológicos; em nutrição animal, destacando o aproveitamento racional de nutrientes; em problemas relacionados à nutrição humana, devendo certas dietas apresentar teor balanceado de proteínas; em tecnologia e ciências de alimentos, objetivando o aproveitamento da matéria prima e o melhoramento dos produtos; entre outros. É ampla a variedade de compostos capazes de reagir com proteínas e formar compostos coloridos
Uma reação geral que caracteriza ligações peptídicas é chamada reação de biureto, nome dado à estrutura originada a partir da decomposição da ureia, quando esta é submetida a uma temperatura de aproximadamente 180 o C (Figura 10) e que fornece resultado positivo nesse teste (Petkowicz, 2007). O biureto, ao reagir com íons Cu2+ em meio alcalino, resulta em uma solução de coloração violeta, sendo este o princípio do método utilizado para determinar biureto em fertilizantes e suplementos alimentares animais e é recomendado pela Association of Official Analytical Chemists (AOAC) como método oficial (Ferreira et al., 2007).
originam as proteínas. O método de biureto tem sido aplicado para determinar a concentração de proteínas totais em diversos meios como soro, urina e alimentos. Apesar de ser rápido, utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas, esse método apresenta a desvantagem de baixa sensibilidade, pois os métodos que envolvem a reação de biureto requerem alta concentração de proteína na amostra como destaca o trabalho de Zaia et al. (1998), o que
tornam desvantajosos em comparação a outros métodos existentes
Atualidades:
urina
Neste trabalho é apresentado um método direto para dosagem de proteínas na urina, o Método de Bradford. O método caracteriza-se por ser colorimétrico, direto, rápido e sem necessidade de um tempo crítico para o ensaio, o queindica a sua aplicabilidade nas dosagens efetuadas em Laboratórios de Análises Clínicas. Este estudo teve como finalidade a aplicação desta metodologia à dosagem de proteínas na urina e a demonstração de sua utilização para detectar a macroproteinúria, sinal precoce de patologia renal no paciente com Diabete mellitus. Foram dosadas 114 amostras de urina de 24 horas, incluindo as de indivíduos normais, pacientes com patologias renais e diabéticos. As amostras foram determinadas em comparação com o método do Biureto. Os resultados indicam que o método de Bradford, com suas respectivas modificações, pode ser aplicado à dosagem de proteínas na urina e por ser direto, facilita o trabalho de rotina laboratorial.