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0 RELATÓRIO: CAPTURA DE MICRO-ORGANISMO COM SWAB, COLORAÇÃO DE GRAM E MÉTODO DE ISOLAMENTOS DE MICRO-ORGANISMOS. 1 SUMÁRIO 1 INTRODUÇÃO...................................................................................................... 02 2 MATERIAIS E METODOS................................................................................. 02 2.1 Materiais................................................................................................................. 02 2.2 Métodos................................................................................................................... 04 3 RESULTADOS E DISCUSSÃO........................................................................... 06 4 CONCLUSÃO........................................................................................................ 07 REFERÊNCIAS..................................................................................................... 07 2 RELATÓRIO DAS PRÁTICAS DE CAPTURA DE MICRO-ORGANISMO COM SWAB, COLORAÇÃO DE GRAM E MÉTODO DE ISOLAMENTOS DE MICRO- ORGANISMOS. 1 INTRODUÇÃO Micróbios são organismos que só podem ser vistos ao microscópio. Incluem os vírus, as bactérias, os protozoários, as algas unicelulares, fungos e os ácaros. Podem ser encontrados em diversas superfícies como mãos, calçados, aparelhos celulares, entre outros. Essa facilidade de encontra-los permite ter um amplo plano para sua captura, cultivo, observação e estudo. O cultivo de microrganismos é fundamental para o conhecimento científico biológico geral. A condição principal para o cultivo de micro-organismo é fornecer um ambiente nutritivo isolado para que ocorra o crescimento desejado do microrganismo. O isolamento é fundamental para a análise do micro-organismo, visto que qualquer agente externo pode interferir no comportamento do microrganismo, interferindo nos resultados finais do estudo. Os meios que possibilitam a captura desses organismos podem ser diversos, porém os que mais se destacam são por Swab, Esgotamento e Espalhamento, sua visualização ao microscópio é possibilitada através da coloração de Gram que é feita em cada lâmina a ser analisada. 2 MATERIAIS E MÉTODOS 2.1 Materiais: Prática 1: Swab Placa de Petri Pincel Capa de celular Tênis Lamparina Superfícies do corpo Isqueiro Prática 2: Placa com culturas de bactérias (coletadas na prática 1) Solução de cristal violeta Lugol Descolorante https://pt.wikipedia.org/wiki/Organismo https://pt.wikipedia.org/wiki/Microsc%C3%B3pio https://pt.wikipedia.org/wiki/V%C3%ADrus https://pt.wikipedia.org/wiki/Bact%C3%A9ria https://pt.wikipedia.org/wiki/Protozo%C3%A1rio https://pt.wikipedia.org/wiki/Alga https://pt.wikipedia.org/wiki/Fungos https://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81caro 3 Safranina Alça de platina Lamparina Caixa de lâminas Suporte para coloração de lâminas Água Pegador de lâminas Microscópio Óleo de imersão Prática 3: Tubos de ensaio com cultivo de bactérias em meio liquido Estante de tubos de ensaio Solução de cristal violeta Lugol Descolorante Safranina Alça de platina Lamparina Caixa de lâminas Suporte para coloração de lâminas Pegador de lâminas Microscópio Óleo de imersão Prática 4 Espalhador de células 4 Alça de platina Placa de Petri sem micro-organismos Tubos de ensaio com cultivo de micro-organismos em meio líquido Álcool Lamparina Estante de tubos de ensaio Pipeta Pincel 2.2 Métodos: Prática 1: Os alunos foram divididos em bancadas, cada um recebeu uma placa de petri, swabs e lamparinas. Primeiramente foram instruídos coletar bactérias de superfícies como a capa de seus celulares, tênis, orelhas, ponta dos dedos, para isso foram orientados a abrirem a embalagem dos swabs pela parte de baixo para que não houvesse contaminação, em seguida com a lamparina já ligada aproximaram o swab do fogo para realizarem sua esterilização, após isso faziam um esfregaço na região da superfície desejada e aplicavam na placa de petri já aberta. O processo se repetiu da mesma maneira para todas as regiões, exceto para as dos dedos que não houve o uso do swab, onde houve o contato direito da ponta dos dedos com a placa. Depois da coleta das bactérias os alunos fecharam suas placas e escreveram seus nomes. As placas foram armazenadas em ambiente adequado para reprodução. Prática 2: As placas contendo os micro-organismos da prática anterior foram observadas de como depois do período entre uma aula e outra tinham se multiplicado. As placas foram utilizadas para a produção de lâminas, onde foi demonstrado as etapas para a coloração de Gram que são: em primeiro lugar realizar a esterilização da alça de platina, após isso realizar a captura dos micro-organismos contidos na placa de petri e com o auxilio de uma gota de água realizar o esfregaço. Após o esfregaço ocorre a secagem passando a lamina perto do fofo da lamparina , em seguida se inicia os métodos de coloração primeiro com cristal violeta ( 1 minuto), lugol (1 minuto), descolorante ( 30 segundos) e por fim safranina ( 30 segundos), após a coloração de lâminas os alunos foram instruídos a observa sua lâmina no microscópio utilizando a lente branca com o auxilio do óleo de imersão. 5 Prática 3: Micro-organismos em tubos de ensaio em meio liquido foram utilizados para a produção de lâminas, onde foi demonstrado as etapas para a coloração de Gram que são em primeiro lugar realizar a esterilização da alça de platina, após isso realizar a captura dos micro-organismos contidos no meio liquido dentro do tubo de ensaio, fazer a secagem da lamina aproximando-a do fogo e em seguida realizar o esfregaço. Após o esfregaço se inicia os métodos de coloração primeiro com cristal violeta ( 1 minuto), lugol (1 minuto), descolorante ( 30 segundos) e por fim safranina (30 segundos), após a coloração de lâminas os alunos foram instruídos a observa sua lâmina no microscópio utilizando a lente branca com o auxílio do óleo de imersão e realizar a identificação de sua bactéria, quanto a estrutura e forma. Prática 4 Os alunos foram divididos em bancadas, em cada uma delas havia placa de petri, espalhador de células, lamparina, pipeta, pincéis, tubos de ensaio contendo micro-organismos e alça de platina. Foram demonstrados os métodos por esgotamento e por espalhamento, o primeiro utilizando a alça de platina que foi esterilizada de início, para haver a captura do micro- organismo dos tubos de ensaio (tomando cuidado para não chocar a alça de platina com as paredes do tubo), em seguida foi realizado movimentos de zigue zague na placa durante 10 vezes em um ponto específico da superfície , em seguida mais 2 movimentos de esgotamentos em pontos diferentes da placa. O segundo método (espalhamento) utilizando o espalhador de células que foi imerso no álcool para haver sua esterilização no fogo foi utilizado para realizar movimentos semelhantes a o de um rodo para haver o espalhamento dos micro-organismo que foram retirados dos tubos de ensaio com o auxílio da pipeta. Após a realização dos dois métodos a placas foram fechadas e armazenadas. 6 3 RESULTADOS E DISCUSSÃO Prática 1 Após o fim do armazenamento das placas foi observado o grande crescimento das bactérias coletadas nas regiões de dedos, orelha, sapato e capa de celular. Prática 2 Foi observada a lâmina produzida e o micro-organismo que ela possuía. Prática 3 Foi observada a lâmina produzida e o micro-organismo que ela possuía, observando sua forma e estrutura. 7 Prática 4 Após o fim do armazenamento das placas foi observado o grande crescimento das bactérias coletadas e como cada método possibilitou uma trajetóriade crescimento diferente. 4 CONCLUSÃO Desse modo, é evidente a importância do cultivo de micro-organismo por demonstrar a velocidade de reprodução das bactérias, de como o método de captura interfere na trajetória do crescimento e a importância da coloração de Gram nas lâminas que possibilita a observação e estudo do micro-organismo presente. REFERÊNCIAS TORTORA FUNKE CASE. Microbiologia. 12. ed. 2016
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