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1. O advento das técnicas de biologia molecular possibilitou o estudo genético de diversos organismos, incluindo os seres humanos. Esses estudos têm trazido ganhos significativos no entendimento de doenças, síndromes e mecanismos de ação de substâncias. De acordo com a importância das técnicas de clonagem do DNA e construção de bibliotecas genômicas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas: ( ) As enzimas de restrição são utilizadas na construção de bibliotecas de DNA, com o objetivo de fragmentar o DNA genômico, já que podem ser conhecidas como tesouras moleculares. ( ) Os vetores são essenciais na técnica de clonagem e são utilizados tanto na construção de bibliotecas de DNA, quanto de cDNA, uma vez que carregam os fragmentos de DNA ou o cDNA extraído. ( ) As bibliotecas de cDNA são construídas a partir da extração do DNA de células ou tecidos, que posteriormente é submetido à clonagem do DNA. ( ) O mRNA é convertido em cDNA pela transcrição reversa, para então serem introduzidos em vetores e submetidos ao processo de clonagem para originar as bibliotecas de cDNA. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: V - V - F - V. F - F - V - F. a) b) Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! V - F - V - V. V - F - F - V. d) c) 2. Para detecção do DNA em bibliotecas de DNA, uma membrana é colocada em contato com as colônias na placa logo após o crescimento das colônias bacterianas em placas de cultivo contendo meio sólido. Algumas células irão se aderir à membrana, formando uma impressão das colônias presentes na placa. Em seguida, as células aderidas sofrem lise celular, a fim de liberar o DNA, que permanece aderido à membrana. Por fim, a membrana é incubada com sondas de hibridização marcadas, complementares à porção do gene de interesse, permitindo a visualização da posição dos clones que contêm o fragmento de interesse. Sobre a técnica exposta, assinale a alternativa CORRETA: Northen-blot. Southern-blot. Hibridização in situ. Hibridização em colônia. a) b) c) d) Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! 3. Com o passar do tempo, as técnicas de sequenciamento ficaram mais sofisticadas e automatizadas. Sobre o sequenciamento de segunda geração, analise as sentenças a seguir: I- O Next Generation Sequencing (NGS) não utiliza nucleotídeos terminadores de cadeira, permitindo a criação de plataformas mais eficientes e rápidas. II- Os métodos de segunda geração compreendem o uso de plataformas portáteis com processamento rápido e eficiente, em plataformas do tamanho de um pen drive. III- Os métodos de segunda geração compreendem o pirosequenciamento, o sequenciamento por síntese, sequenciamento por terminação de cadeia reversível, sequenciamento por hibridização e ligação, dentre outros. Assinale a alternativa CORRETA: Somente a sentença II está correta. Somente a sentença I está correta. As sentenças I e II estão corretas. As sentenças I e III estão corretas. a) b) c) d) Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! 4. A escolha do gel para a técnica de eletroforese deve-se dar através do tamanho da molécula a ser isolada e do objetivo do isolamento. Com base nas matrizes de agarose e poliacrilamida para a técnica de eletroforese em gel, analise as sentenças a seguir: I- A poliacrilamida pode separar fragmentos de DNA com até mesmo uma única base nitrogenada de diferença. II- A agarose, apresenta menor resolução, ou seja, cada banda presente no gel, representa um agrupamento de moléculas de tamanho semelhantes. III- No gel de poliacrilamida, uma menor faixa de tamanho das moléculas pode se movimentar, enquanto fragmentos maiores de DNA podem migrar facilmente no gel de agarose. Assinale a alternativa CORRETA: Somente a sentença III está correta. Somente a sentença II está correta. Somente a sentença I está correta. As sentenças I, II e III estão corretas. a) b) c) d) Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! 5. Uma das técnicas essenciais em biologia molecular é a capacidade de sequenciar o gene de um organismo. Esse sequenciamento é importante, pois identifica possíveis mutações, cadeias de transmissão e origem da chegada do vírus a uma região específica. De acordo com as técnicas empregadas para o sequenciamento de DNA, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas: ( ) Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de Sanger, em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese. ( ) O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita. ( ) O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes de sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de sequenciamento de DNA. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: F - F - V. V - V - F. V - F - V. V - F - F. a) b) c) d) Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! 6. O uso de bibliotecas de DNA ou cDNA permitem a manutenção e replicação do material genético em grandes coleções mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados. Sobre as bibliotecas de DNA e cDNA, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas: I- A bactéria E. coli é a principal célula hospedeira utilizada no processo de clonagem em vetores, inclusive na construção de bibliotecas de DNA e cDNA, em que cada bactéria irá internalizar apenas um vetor. PORQUE II- Assim que o vetor é inserido, em condições adequadas de diluição e meio de cultivo, em poucas horas corre a formação de diversos clones dos fragmentos inseridos, sendo cada um encontrado em uma colônia diferente de crescimento bacteriano. Assinale a alternativa CORRETA: As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I. As asserções I e II são proposições falsas. A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira. As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I. c) d) a) b) Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! 7. O RNA é uma molécula muito semelhante ao DNA, originado a partir do processo de transcrição, em que carrega informações contidas no DNA para fora do núcleo. Essas informações, darão origem à síntese de proteínas, através do processo de tradução. Sobre o RNA, assinale a alternativa CORRETA: O RNA é uma estrutura em fita simples, composta pelos nucleotídeos adenina, timina, citosina e guanina. O RNA é composto por cinco nucleotídeos, adenina, uracila, timina, guanina e citosina. O RNA é uma estrutura em dupla hélice, composta pela desoxirribose, nucleotídeos e fosfato. O RNA é uma estrutura em fita simples, composta pela pentose denominada como ribose; os nucleotídeos adenina, uracila, citosina e guanina e fosfato. a) b) c) d) 8. Com o desenvolvimento das técnicas de clonagem de DNA, tornou-se possível a construção de bibliotecas de DNA e cDNA. Sobre as bibliotecas, assinale a alternativa CORRETA: As bibliotecas de mRNA são originadas a partir da fragmentação do DNA com enzimas de restrição e, posteriormente, da clonagem do DNA. As bibliotecas de cDNA contêm somente os éxons de uma molécula de mRNA, que posteriormente é convertido em cDNA pela técnica de transcrição reversa. b) a) Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! A biblioteca de cDNA contém éxons e íntrons, já que são clonados todos os fragmentos de DNA, incluindo o não codificante. Uma biblioteca de DNA contém somente os íntrons de uma molécula de DNA, sendo extremamente específico para identificar o conteúdoexpresso em uma célula ou tecido. c) d) 9. Os ciclos do PCR (reação em cadeia da polimerase) são críticos para o sucesso da técnica. Em torno de 20-40 ciclos são programados no termociclador, a fim de se obter milhares de cópias de DNA. Sobre os ciclos do PCR associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Desnaturação. II- Anelamento. III- Extensão. ( ) Estágio em que os primers se ligam à fita do DNA na sua sequência complementar. ( ) Estágio inicial, em que ocorre abertura da dupla fita, liberando os nucleotídeos de cada uma das fitas simples. Esta etapa ocorre em uma alta temperatura, em cerca de 95º C. ( ) Estágio correspondente à adição de nucleotídeos pela DNA polimerase específica, denominada como Taq DNA polimerase, em uma temperatura de 72º C. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! I - III - II. II - I - III. III - II - I. I - II - III. a) b) c) d) 10 . A terceira geração de métodos de sequenciamento de DNA, possibilitaram analisar as sequências de nucleotídeos de uma única molécula de DNA, sem a necessidade de amplificar a molécula. Sobre esses métodos, assinale a alternativa CORRETA: É o mais recente avanço em biologia molecular, que permite o sequenciamento de DNA de forma portátil, capaz de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos, semelhantes a pen drives. A plataforma MinION é a mais utilizada. É um método totalmente automatizado, também conhecido como Illumina, em que o DNA a ser sequenciado é fragmentado por nebulização e os fragmentos são acoplados a uma placa de vidro por meio de primers adaptadores, formando uma biblioteca de DNA, que será submetida ao PCR. a) b) Parabéns! Você acertou a questão: Sua resposta está correta! Para os métodos de terceira geração, são utilizadas plataformas 454, que são esferas sólidas, nas quais são ligadas as sequências adaptadoras, com o DNA a ser sequenciado, formando uma biblioteca de DNA. A terceira geração de sequenciamento utiliza DNA fragmento que é transformado em fragmentos de DNA circular, os quais são replicados em chips com nano-poços. A cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita, ocorre a emissão de fluorescência e a detecção ocorre em tempo real. c) d)
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