Curva padrão Lowry

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Sabrina B 
 
 
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Curva Padrão – Método de Lowry modificado: 
 
OBS.: Se as amostras tiverem alta quantidade de proteína utilize a curva concentrada ao invés da curva 
diluída. Neste caso, usar os seguintes volumes de padrão concentrado de albumina (1mg/ml), em ul:0, 
10, 15, 20, 30, 40. Não esquecer que a quantidade água deve ser para completar 400ul, isto é, 400, 390, 
385, 380, 370, 360. 
 
 
Sabrina B 
 
 
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• Todos os tubos, com exceção do Branco, são em duplicata. 
• Numerar tubos de vidro finos, colocá-los em uma estante e proceder conforme a 
tabela. 
• Utilizar micropipetas para o padrão e demais reagentes. 
• Manter os reagentes e os tubos em água morna a fim de evitar que o SDS do Lowry 
precipite e interfira na leitura. 
• Ler em 750 nm (luz visível), zerando com o Branco e começando pela Curva. 
Obs.: Preparar a Curva e as Amostras concomitantemente, começando pela Curva que deve 
ser lida antes. 
 
 
Cálculo da quantidade de proteína: 
1. Fazer a média das absorbâncias obtidas. 
2. Calcular o fator da curva de calibração, dividindo a quantidade de albumina no 
tubo pela absorbância obtida neste tubo. 
3. Usar o fator da curva de calibração para o cálculo da quantidade de proteína nas 
amostras (em mg/ ml): 
4. [ ] amostras = 
𝐴𝑏𝑠 𝑑𝑎 𝑎𝑚𝑜𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑥 𝐹
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑑𝑎 𝑎𝑚𝑖𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑢𝑡𝑖𝑙𝑖𝑧𝑎𝑑𝑜 (𝑒𝑚 𝜇𝐿)
 
Preparo das Soluções: 
 
 
CTC 
• Carbonato de sódio: Na2CO3 (20g) + H2O MiliQ qsp 100mL 
• Sulfato de Cobre: CuSO4 (0,2g) + H2O MiliQ qsp 40mL 
• Tartarato Na+ e K+ Taratarato (0,4g) + H2O MiliQ qsp 40 mL 
Misturar a solução de sulfato de cobre com a solução de tartarato de Na+ e K+ e leve ao volume 
de 100mL. Despejar a solução de carbonato de sódio sobre a solução de cobre-tartarato 
– Fundamental que seja nesta ordem. 
Guardar em frasco âmbar. 
Válido por 2 meses. 
 
 
1. Reagente de Lowry: 
Misturar as soluções estoque de CTC (cobre-tartarato-carbonato); NaOH, SDS 10% e água nas 
seguintes proporções: 
• CTC -----------------10 ml 
Sabrina B 
 
 
3 
 
• SDS 10% --------- 10 ml 
• NaOH 1N ---------- 8 ml 
• H2O --------------- 12 ml 
OBS.: Esta solução é estocável por 2 semanas a temperatura ambiente. 
 
 
2. Reagente de Folin 0,4N: 
Diluir a solução estoque de Folin 2N na proporção 1:5 em H 2 O Milli-Q. 
Validade: indeterminada quando guardada em frasco âmbar. 
 
 
3. Solução padrão de Albumina 1mg/mL: 
• Albumina --------------- 0,05 g 
• Água destilada--------- 50 mL 
Preparar o estoque em balão volumétrico. Aliquotar e guardar no congelador.