Respostas - Guia de Revisão Teórica de CHG Módulo 1 (Manu Lamas)

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Guia de Revisão Teórica de CHG Módulo 1
1) Quais as três principais técnicas utilizadas no estudo da microscopia? Caracterize cada uma delas e as diferencie. 
 Microscópio ótico 
 Microscópio de varredura
 microscópio de transmissão 
 
2) Defina limite de resolução.
Mínima distância entre dois pontos para que eles sejam vistos de forma distintas
3) Quais as vantagens da técnica de criofratura (freeze-fracture) e quais estruturas são possíveis identificar nela? 
A vantagem é que a criofratura diminui artefatos de técnica e na imagem é possível ver a membrana plasmática com suas faces P (protoplamasmatica) e E (externa), assim como as proteínas de membrana.
4) Diferencie as técnicas de coloração histológica e histoquímica. Cite as principais delas e quais estruturas coram.
Coloração histológica cora estruturas celulares. HE, Polak e Aoyama
Coloração histoquímica cora moléculas. PAS (Glicogênio), Alcian blue (Tipos de mucina), feulgen (Bases púricas do DNA)
5) O que seria um artefato de técnica? Quais as principais ocorrências e por que eles ocorrem?
Artefato de técnica são quaisquer alterações da imagem causadas pelos corantes ou pelo processo de preparação da lâmina
6) Tendo em mente o conceito de Membrana Plasmática, caracterize-a , assim como sua função. Faça o mesmo para Unidade de Membrana e para o Modelo do Mosaico Fluido. Ressalte também o aspecto trilaminar das membranas.
Unidade de membrana é a estrutura trilaminar observada (duas na imagem). Já a membrana plasmática é a membrana que separa o espaço extracelular do citoplasma, sendo formada por duas partes hidrofílicas e uma hidrofóbica (gerando um aspecto trilaminar), garantindo a passagem seletiva de substâncias. O mosaico fluido se deve ao fato de que a membrana não é estática, sendo que os fosfolipídeos movimentam-se. Na imagem, em específico, vemos duas células e, logo, duas membranas, com o espaço intercelular entre elas.
7) Caracterize, mencionando o formato, a constituição e a(s) função(ões) das seguintes organelas celulares: 1- Mitocôndria; 2- Ribossomo; 3- Retículo Endoplasmático Rugoso; 4- Retículo Endoplasmático Liso; 5- Complexo de Golgi; 6- Lisossomo; 7- Proteassomo e Ubiquitina; 8- Peroxissomo.
1. Mitocôndria: formada por duas camadas, uma externa (lisa e com pouca passagem de proteínas) e uma interna (formada por dobras chamadas de cristas mitocondriais e com alta passagem de proteínas). Essa organela possui DNA e ribossomos próprios. Pode ter formato tubular, arredondado ou alongado de acordo com a especialização celular e é corada principalmente pelo método Polak. Ela atua na respiração celular, fornecendo energia.
2. Ribossomo: grânulo escuro e pequeno, podendo estar livre no citoplasma ou associado ao retículo endoplasmático. É corado pela hematoxilina devido ao RNA. Ele atua na síntese de proteínas, tanto internas quanto para exportação.
3. RER: lâminas paralelas e achatadas com grânulos (ribossomos) aderidos. Corada pela hemtaxolina. Ele atua na sintetização, modificação e distribuição de proteínas, principalmente para exportação.
4. REL: túbulos contorcidos ou vesículas arredondadas. Em caso de coloração PAS, o glicogênio associado a ele será corado. Ele tem função de solubilização da bile, desintoxicação do organismo, degradação de lipídeos, metabolismo de glicogênio, síntese de hormônios esteroides.
5. Complexo de Golgi: formado pela união de várias membranas com vesículas saindo e recebendo “pacotes” do REL. Corado por prata batida (Aoyama). As funções envolvem recebimento (face cis), empacotamento e secretação (face trans) de substâncias para o exterior celular. Também forma lisossomos e o acrossomo do espermatozóide, além de metabolizar lipídeos.
6. Lisossomo: vesícula com membrana simples. Corado por hematoxilina. O lisossomo primário é a bolsa com as enzimas digestivas. Após associar-se ao fagossomo, torna-se o lisossomo secundário, com a bolsa contendo moléculas e enzimas. É responsável pela digestão de moléculas externas ou de organelas velhas, atuando também na apoptose.
7. Proteassomo: degrada proteínas marcadas pela ubiquitina. Formato de barril, quatro anéis sobrepostos. São constituídos por complexos de proteases.
8. Peroxissomo: responsáveis pela degradação de substâncias tóxicas como água oxigenada e alcool, tranformando-os de moléculas danosas a outras mais inofensivas. São vesículas membranosas originadas do Retículo Endoplasmático Liso e são especialmente abundantes nos rins e fígados.
8) Conhecendo os constituintes do citoesqueleto celular (microtúbulos, filamentos intermediários e microfilamentos de actina), informe a constituição proteica, as estruturas que compõem e as principais regiões que cada um se encontra dentro da célula. (Corpúsculos Basais ou Axonemas).
Microfilamentos de actina: formam as microvilosidades e atuam na formação de redes ou feixes. Afetada pelas citocalosinas (impedem polimerização) e pelas falordinas (estabilização). Ficam abaixo da M.P. e dos pseudopodes. Conferem força mecânica, forma e movimento e contração muscular. Responsável pelo estado de gel do citoplasma
Filamentos intermediários: responsáveis pela sustentação devido a rigidez e estabilidade (suas proteínas se agregam espontaneamente). Podem formar desmossomos e receber tensão.
Microtúbulos (formados por unidades de tubulina): encontrados no citoplasma e prolongamentos celulares. Formam cílios, centríolos e flagelos. Os organizadores de microtúbulos dirigem a polimeracao (que é afetada pela concentração de cálcio, temperatura e pressão através da dieneina e kinesina). Afetado pela colchina e taxol.
 
9) Atento aos conhecimentos sobre o núcleo celular, responda:
a) Caracterize o envoltório nuclear;
A carioteca separa o material genético do citoplasma. Ela é composta por duas membranas concêntricas e um espaço entre elas (cisterna perinuclear) porém com a presença de vários poros que permitem a passagem de determinadas substâncias (nucleoporina). A membrana externa contém polirribosomos aderidos e é contínua com o RER
b) Como podemos pressupor que uma célula é metabolicamente ativa ou quiescente (pouco ativa) atendo-se à observação do seu núcleo?
A heterocromatina é inativa (não atua na síntese de RNA) e aparece como elétron densa (escura) nas eletromicrografias. Já a eucromatina atua na transcrição e aparece clara na imagem. Assim, células muito ativas possuem o núcleo claro devido a forte presença de eucromatina e também é perceptível a presença de nuncleolos. Já celulas pouco ativas possuem núcleo escuro (elétron denso) e não é perceptível o nuncleolo. Fora isso, para caracterizar células muito ativas tendo ainda uma presença significativa de mitocôndrias, RER e complexo de golgi no citoplasma.
 
10) Sobre o processo de divisão celular (mitose), exponha cada fase, indicando qual micrografia abaixo corresponde à ela, e cite 02 principais características de cada. Faça o mesmo para as fases da intérfase. 
Profase: condensação da cromatina e formação de cromossomos, fragmentação da carioteca. Duplicação de centríolos (envolvidos pelas fibras do Aster)
Metáfase: máxima condensação cromossômica e alinhamento no Equador da célula 
Anáfase: separação das cromátides e encurtamento das fibras
Telófase: a carioteca começa a reaparecer (RE), cromossomos começam a se descondensar
Citocinese: divisão do citoplasma, é considerada uma fase apenas por alguns autores
Metáfase e Anafase
 Telofase e Citocinese 
11) Defina e diferencie os seguintes conceitos: Apoptose e Necrose. 
Na necrose ocorre infecção e a membrana plasmática é reconhecida como antígeno e será degradada. Na apoptose, não ocorre a autólise 
12) Diferencie os processos celulares de endocitose ( fagocitose, pinocitose, micropinocitose).
Fagocitose: é um processo de ingestão de moléculas relativamente grandes e sólidas, ocorrendo através de ampliações citoplasmáticas, os pseudopodes, que formam um fagossomo. É um processo seletivo.
Pinocitose: engloba moléculas relativamente grandes e liquídas de modo não seletivo. A célula modifica sua estrutura, formandoum canal através das invaginações para fomrar o fagosssomo.
Micropinocitose: ocorre para moléculas relativamente menores e de maneira seletiva. Receptores na parte externa da membrana captam a presença de uma substancia e acionam as proteínas, entre elas a clatrina, para auxiliar no processo de formação do fago e encaminharem-o até o local de digestão
13) Detalhe o processo de micropinocitose seletiva, um dos mecanismos celulares de endocitose, tal qual acontece com a transferrina em nossos células. Enfatize a diferença de lisossomo e endossomo.
 
Existem, na membrana, regiões especializadas denominadas depressões revestidas onde encontramos muitos dos receptores. A porção citossólica destas depressões é revestida por clatrina, uma proteína destinada a formar redes ao redor de vesículas membranosas. Vários receptores se agrupam nas depressões revestidas esteja ou não presente um ligando, outros dependem da ligação à proteína para se agrupar.
O início da endocitose por receptor se dá pela invaginação de uma depressão revestida seguida da formação de uma vesícula revestida feita pela clatrina. Após a formação da vesícula revestida ocorre a perda da capa de clatrina e a fusão com um endossomo. Os endossomos se fundem uns com os outros formando vesículas maiores com diâmentro variando entre 200 e 600nm. A acidificação dos endossomos pelas bombas de prótons energizadas por ATP leva a dissociação dos complexos proteína-receptor possibilitando que cada um possa seguir um destino diferente. 
A via tomada pela transferrina e seu receptor é um dos quatro resultados potenciais. Cada molécula de transferrina transporta dois iontes Fe+3 de locais de absorção e armazenamento para locais de uso. A proteína sem ferro é chamada de apotransferrina e esta não se liga ao receptor. A ligação de Fe+3 envolve HCO3- e uma cadeia lateral de Tirosina sob a forma aniônica. A transferrina se liga ao receptor ocorre a formação de vesícula fusão com o endossomo acidificação do mesmo e consequente dissociação do ferro de deu transportador.
Parte da vesíciula portadora de apotransferrina ligada ao receptor se destaca e é direcionaad para a membrana citoplasmática, enquanto o Fe+3 é armazenado sob a forma de Ferritina no citossol. Quando a vesícula destacada se funde à membrana citoplasmática, a apotransferrina é liberada do receptor devido à súbita mudança de pH. Tanto o transportador de ferro quanto o receptor são reciclados, gerando poucas perdas.
O endossomo um compartimento da membrana endocítica via de transporte a partir da membrana plasmática para o lisossoma. Moléculas internalizadas a partir da membrana plasmática pode seguir este caminho para os lisossomas para a degradação, ou eles podem ser reciclados de volta para a membrana plasmática.
14) Na citologia, observa-se que a célula dispõe-se de uma determinada configuração para uma maior eficiência metabólica e secretora a partir de sinalizações apropriadas. Dessa forma, detalhe o processo de exocitose pela via lisossomal.
as proteínas sintetizadas no RER podem ficar inseridas na  membrana  (destaque 1), liberadas para o lúmen do RER para sofrer secreção (destaque 2) ou serem destinadas aos lisossomos (destaque 3). Todas estas classes de proteínas   são  transportadas via vesicular para o complexo de Golgi, passam de uma cisterna  para outra e chegam e face trans onde empacotas de forma seletiva em vesículas e são enviadas para os seus destinos finais
Veja no detalhe “1”  da figura acima que as proteínas de membrana ficam inseridas na membrana do RER, não são liberadas no lúmen, sendo transportadas ao longo do RER e complexo de Golgi sempre inseridas na membrana. Após a fusão das vesículas que brotam na face trans do complexo de Golgi com a membrana plasmática, como mostrado em “7” se difundem lateralmente e passam a fazer parte da membrana plasmática.
15) Como se dá o movimento ameboide? Com quais principais estruturas do citoesqueleto esse movimento se correlaciona?
Alguns tipos de células têm a capacidade de alterar rapidamente a consistência de seu citosol, gerando fluxos internos através de pseudopodes (formados pelos microtubulos) que permitem à célula mudar de forma e se movimentar. Esse tipo de movimento celular é chamado movimento ameboide.
16) Indique e caracterize cada tipo de junção da membrana, citando quais elementos os compõem, não esqueça de mencionar as principais estruturas proteicas e filamentares.
 
Zona de oclusão: vede o espaço entre células, submetendo as substâncias ao controle do transporte celular. Claudinas e ocludinas
Zona de adesão: garante a adesão e fixação de duas células vizinhas. Microfilamentos de actina
Desmossomo: fazendo uso dos filamentos intermediários, auxilia para que o citoesqueleto se prenda à membrana na presença de caderinas, une fortemente as células
Hemidesmossomos: unem célula epitelial à lâmina basal através de moléculas proteicas da classe das integrinas
17) Observe a estrutura representada na foto. Cite suas três divisões e seus respectivos componentes, além das funções de cada região. 
1) o centro fibrilar, com os organizadores nucleolares, RNA polimerase I, DNA topoisomerase e fatores de transcrição do RNAr; 
2) a região fibrilar densa ou nucleolonema, com RNA em síntese ainda sem dobramentos; e 
3) a região granulosa ou parte amorfa, com partículas ribossômicas precursoras maduras, já com seus dobramentos e associações às proteínas.
18) Identifique a estrutura apresentada abaixo e cite um tipo celular na qual ela está presente. Como você chegou a essa conclusão?
 
Na parte esquerda (de quem observa), vemos várias mitocôndrias de formato tubular. No canto inferior direito há um núcleo com evidência de eucromatina. Na parte superior direita há pontos gordurosos. Próximo às mitocôndrias, observa-se várias vesículas, REL. A célula é do tipo secretora de esteroides por tudo isso, presente nos ovários, por exemplo. (mentira, eu só decorei a legenda da micrografia)
19) Qual o processo metabólico representado na figura? Em que tipo celular ele costuma ser encontrado?
 
Metabolismo de Glicogênio associado ao REL em hepatócito
20) Caracterize a célula abaixo de acordo com o seu metabolismo.
 
Célula produtora de proteínas para acumulo citoplasmático (Muita eucromatina, pouco Golgi e RER, vários ribossomos livres).
21-a) Qual o corante utilizado? PAS
b) O que ele cora? Moléculas ricas em carboidratos, como o glicogênio
c) O que aconteceria se adicionássemos amilase salivar antes de corar essa célula? E antes de corar a célula do intestino? A amilase salivar degradaria esses carboidratos e o resultado seria PAS negativa. Já para o intestino, a enzima não funcionaria por estar em pH em que ela não atua e ele continuaria sendo corado.
 22) Qual o corante utilizado e o que ele cora?
Reação de Feulgen (cora DNA) contra corado com Alcian Blue (cora mucinas ácidas).
24-a) Qual componente celular esta sendo corado?
b) Qual a sua função nesse determinado órgao?
Complexo de Golgi de células epididimais. A função do epididimo é maturação e armazenamento de espermatozoides, no qual o golgi auxilia ao preparar as enzimas que eles utilizam para entrar no óvulo
25) Identifique as 3 estruturas abaixo e diga qual componente do citoesqueleto os forma. Cite quais as funções (em geral e não só nessas micrografias) de cada um desses componentes 
A primeira mostra um corte transversal de microvilosidades (formadas por microfilamentos de actina), a segunda mostra corte transversal de cílios (formados por microtubulos). As duas últimas consistem no fuso mitótico (microtubulos) em corte longitudinal e transversal.
Microfilamentos de actina: formam as microvilosidades e atuam na formação de redes ou feixes. Afetada pelas citocalosinas (impedem polimerização) e pelas falordinas (estabilização). Ficam abaixo da M.P. e dos pseudopodes. Conferem força mecânica, forma, movimento e contração muscular. Responsável pelo estado de gel do citoplasma.
Filamentos intermediários: responsáveis pela sustentação devido à rigidez e estabilidade(suas proteínas se agregam espontaneamente). Podem formar desmossomos e receber tensão.
Microtúbulos (formados por unidades de tubulina): encontrados no citoplasma e prolongamentos celulares. Formam cílios, centríolos e flagelos. Os organizadores de microtúbulos dirigem a polimeracao (que é afetada pela concentração de cálcio, temperatura e pressão através da dieneina e kinesina). Afetado pela colchina e taxol.
26) O que as setas vermelhas estao indicando? Qual a importancia dessa estrutura?
Lamina fibrosa acoplada ao envoltório nuclear, servindo como ponto de fixação da cromatina interfásica.
27)Identifique as 2 estruturas, os componentes do citoesqueleto que a formam e diga qual a importancia delas na divisao celular.
 
A primeira é um centríolo, formado por microtúbulos. É o responsável pelo fuso mitótico e pela orientação da divisão celular. Próximo há os satélites pericentriolares, onde ocorre a polimerização da tubulina.
A segunda mostra o processo de citocinese em célula animal. Actina e miosina. Responsáveis pela separação completa do citoplasma em duas células.
28)Identifique a técnica utilizada em cada lamina e qual substancia ela esta corando.
PAS contra hematoxilina. A PAS cora moléculas ricas em carboidratos e a hematoxilina substâncias basófilas (no caso, o núcleo ácido)
 Hematoxilina e Alcian Blue. O Alcian Blue consegue corar as células caliciformes devido à especialização delas em secreção, sendo a maior parte constituída de vesículas a serem secretadas.
29) Identifique quais os 3 processos de endocitose estão ocorrendo e escreve as principais diferenças entre eles.
 Fagocitose = grandes partículas sólidas, pseudopodes
Pinocitose = grandes partículas líquidas, lamelipodios
Micropinocitose = seletiva, clatrina