tecnicas utilizadas no diagnostico molecular

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Técnicas Utilizadas no Diagnóstico Molecular - Parte I | Biologia Molecular Aplicada ao Diagnóstico Laboratorial Fernanda Khouri
Técnicas utilizadas no 
diagnóstico molecular 
Parte I
Técnicas Utilizadas no Diagnóstico Molecular - Parte I | Biologia Molecular Aplicada ao Diagnóstico Laboratorial Fernanda Khouri
Diversas técnicas de biologia molecular são atualmente utilizadas no âmbito da ciência
forense e em investigações epidemiológicas, diagnóstico e controle de doenças virais e
bacterianas. Dentre as técnicas disponíveis, destaca-se a Reação em Cadeia da
Polimerase (PCR). Dentre os princípios da PCR, assinale a alternativa correta:
Treinando...
a) Utiliza uma enzima para promover a desnaturação da dupla fita do DNA e,
consequente duplicação.
b) Baseia-se na duplicação conservativa do DNA, na qual se observa a síntese
de uma fita complementar de DNA a partir de uma outra já existente.
c) Fundamenta-se na produção de muitas cópias de uma região específica do
DNA (região alvo).
d) Necessita de enzimas de restrição para cortar o DNA em sítios específicos e
assim garantir a especificidade da reação.
Questão de Concurso
Técnicas Utilizadas no Diagnóstico Molecular - Parte I | Biologia Molecular Aplicada ao Diagnóstico Laboratorial Fernanda Khouri
Resumo da Aula
 Mecanismos moleculares
 PCR
 Nested PCR
 RT-PCR
 Real Time PCR
Técnicas Utilizadas no Diagnóstico Molecular - Parte I | Biologia Molecular Aplicada ao Diagnóstico Laboratorial Fernanda Khouri
Mecanismos Moleculares
 Principais aplicações dos ácidos nucleicos:
 Diagnóstico laboratorial
 Genética Forense
 Base para as técnicas de biologia molecular:
Replicação
Transcrição
Tradução
Transcrição Reversa
Replicação:
DNA → DNA
Transcrição:
DNA → RNA
Tradução:
RNA → Proteínas
Transcrição Reversa:
RNA → DNA
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Obtenção do Material Genético
Nota
 Extração do material
genético
* Sangue, saliva,
ossos, sêmen...
 Material genético → ácidos nucléicos → DNA e RNA
 Principal técnica de biologia molecular: Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
 Mecanismo-Base para a PCR → Replicação
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Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
 Método de amplificação de DNA in vitro
 Replicação semi-conservativa
Não se esqueça!
 Processo semi-
conservativo
 Regra para a duplicação:
Replicação:
DNA → DNA
A T
G C
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Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
 Princípio da técnica:
 Gerar múltiplas cópias de uma sequência específica de nucleotídeos de um
determinado organismo, com alta sensibilidade e especificidade
DNA-alvo
 DNA molde
 Primers
 DNA polimerase (Taq polimerase)
 Desoxirribonucleotídeos trifosfatos (dNTPs)
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Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
 Desnaturação
 Pareamento de primers
 Extensão
Termociclador
Amplificação exponencial
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Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
 Amplificação exponencial
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Principais Tipos de PCR
 PCR
 RT-PCR
 Nested PCR
 Real Time PCR (qPCR)
Amplificação
Amplificação
AmplificaçãoAmplificação
Amplificação
Amplificação
Amplificação
Amplificação
Amplificação
Amplificação
Termociclador
Qualitativo e quantitativo
Qualitativo
Qualitativo
Qualitativo
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Aplicações 
 Exemplo: HIV (Vírus da Imunodeficiência Humana)
Paciente 
infectado 
com o HIV-1
Extração do 
RNA viral 
no soro 
RT-PCR PCR/Nested PCR
PCR/Nested PCR
Avaliação da 
resistência do 
HIV-1 às drogas 
antirretrovirais
PCR em Tempo Real
Carga viral
RNA cDNA
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 Diagnóstico de doenças
 Teste de paternidade
 Ciência forense
 Pesquisa básica e clínica
 Análise de expressão gênica
 Sequenciamento
 Genotipagem
Aplicações 
Técnicas Utilizadas no Diagnóstico Molecular - Parte I | Biologia Molecular Aplicada ao Diagnóstico Laboratorial Fernanda Khouri
Diversas técnicas de biologia molecular são atualmente utilizadas no âmbito da ciência
forense e em investigações epidemiológicas, diagnóstico e controle de doenças virais e
bacterianas. Dentre as técnicas disponíveis, destaca-se a Reação em Cadeia da
Polimerase (PCR). Dentre os princípios da PCR, assinale a alternativa correta:
Agora ficou fácil!
a) Utiliza uma enzima para promover a desnaturação da dupla fita do DNA e,
consequente duplicação.
b) Baseia-se na duplicação conservativa do DNA, na qual se observa a síntese
de uma fita complementar de DNA a partir de uma outra já existente.
c) Fundamenta-se na produção de muitas cópias de uma região específica do
DNA (região alvo).
d) Necessita de enzimas de restrição para cortar o DNA em sítios específicos e
assim garantir a especificidade da reação.
Questão de Concurso
Semi-conservativa
Técnicas Utilizadas no Diagnóstico Molecular - Parte I | Biologia Molecular Aplicada ao Diagnóstico Laboratorial Fernanda Khouri
Uma serie de variações baseadas na técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
tem sido descritas na literatura e estão, atualmente, padronizadas para o uso em
diagnostico. Como pode ser descrita, sumariamente, a variação “Nested PCR”?
(COMANDO DA AERONÁUTICA - 2014)
a) Compreende duas reações de PCR consecutivas, sendo que o produto da
primeira amplificação servira como alvo para a segunda.
b) Esta técnica e utilizada para amplificar o RNA, ao contrario da reação PCR
clássica que amplifica apenas fitas de DNA. Para isso são utilizadas enzimas
diferentes.
c) Ao adicionar enzimas especificas, a amplificação do DNA ocorre
isotermicamente, não necessitando das elevações de temperatura da reação
da PCR clássica.
d) Diferencia da reação de PCR clássica por utilizar, ao mesmo tempo, mais de
um par de iniciadores, ocorrendo, portanto, uma coamplificação de dois ou
mais alvos diferentes.
Questão de Concurso
2º round
1º round
Produto da PCR
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A técnica de PCR, reação em cadeia da polimerase, é considerada uma técnica
revolucionária no âmbito da biologia molecular. Dentre suas vantagens, assinale a única
alternativa INCORRETA:
(Perito Criminalístico - 2014)
a) Necessidade de pequenas quantidades de DNA.
b) Grande número de cópias de sequências específicas, amplificadas
simultaneamente.
c) A possibilidade de se utilizar DNA degradado a fragmentos de algumas
centenas de pares de bases.
d) Permite a separação de misturas de mais de 4 indivíduos no caso de uma
contaminação.
e) A existência de kits comerciais para a sua realização.
Questão de Concurso