Aula 15 Biotécnica reprodução Reprodução in vitro

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Serviço Nacional de Aprendizagem Rural
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária
Alessandra Corallo Nicacio e Lindsay Unno Gimenes
Pesquisadoras Embrapa Gado de Corte
Campo Grande - MS
BIOTÉCNICAS DA REPRODUÇÃO: 
PRODUÇÃO IN VITRO 
SUMÁRIO
• Introdução 
• Produção in vitro de embriões
• Maturação in vitro
• Fecundação in vitro
• Cultivo in vitro
• 1959 - Primeiro sucesso em coelhos
• 1968 - FIV em camundongos
• 1978 - Louise Brown (primeiro “bebê de proveta”)
• 1982 - Primeiro bezerro produzido in vitro
• 1994 - Primeiro bezerro produzido in vitro no Brasil
INTRODUÇÃO
• 2000 – Início dos laboratórios comerciais
• 2003 – 60.000 embriões produzidos in vitro
• Brasil – Segundo maior produtor mundial de embriões (1o =
China)
• Rebanho de corte = 130 milhões de cabeças (8% IA)
INTRODUÇÃO
INTRODUÇÃO
Origem dos ovários:
▪ Matadouro - pesquisa
▪ In vivo (OPU) - comercial
PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES
MATADOURO
MATADOURO
LABORATÓRIO
LABORATÓRIO
Aspiração folículos:
In vivo – Ovum pick-up (OPU)
Equipamentos:
US, bomba de vácuo, agulhas, anestésico,
estereomicroscópio, meios, garrafa térmica.
ASPIRAÇÃO FOLICULAR
EQUIPAMENTOS
EQUIPAMENTOS
OPU
• Aspiração e sedimentação
• Procura e seleção dos oócitos
• Lavagem dos oócitos
• Maturação dos oócitos
MATURAÇÃO IN VITRO (MIV)
MATURAÇÃO IN VITRO (MIV)
Procura e seleção dos oócitos
Lavagem dos oócitos
MATURAÇÃO IN VITRO (MIV)
• Camadas completas de células 
da granulosa
• Compactação das células
• Coloração de citoplasma
MATURAÇÃO IN VITRO (MIV)
Seleção dos oócitos
Vida intrauterina Puberdade
MATURAÇÃO OOCITÁRIA
24 horas; estufa; 5% de CO2; alta 
umidade; 38,5oC.
MATURAÇÃO IN VITRO (MIV)
Oócito em vesícula 
germinativa
Oócito em Metáfase II
20 - 24 h
MATURAÇÃO IN VITRO (MIV)
• Lavagem dos oócitos
• Preparo do sêmen
• Fecundação propriamente dita
FECUNDAÇÃO IN VITRO (FIV)
Preparo do sêmen: fresco ou congelado
FECUNDAÇÃO IN VITRO (FIV)
Preparo do sêmen: separação de espermatozoides vivos e mortos
FECUNDAÇÃO IN VITRO (FIV)
PREPARO DO SÊMEN
AVALIAÇÃO DO SÊMEN
• Inseminação: 4L por gota
• Dose inseminante: 1 X 106 sptz/mL
FECUNDAÇÃO IN VITRO (FIV)
• Capacitação espermática
• Reação acrossômica
• Ligação dos sptz à ZP
FECUNDAÇÃO IN VITRO (FIV)
18 horas; estufa 5% de 
CO2; alta umidade; 38,5
oC
FECUNDAÇÃO IN VITRO (FIV)
• Remoção das células do cummulus
• Cultivo in vitro
CULTIVO IN VITRO (CIV)
• Remoção das células do cummulus
• Cultivo in vitro
• Avaliação da clivagem (D3)
• Avaliação dos embriões (D7 a 9)
CULTIVO IN VITRO (CIV)
DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO
Oócitos
Primeiras clivagens
Compactação de 
blastômeros
Formação da blastocele
Eclosão
• Alto custo X retorno financeiro
• Preconceito de produtores e veterinários
• Limitações e problemas
• Expansão da técnica
• Sêmen sexado
• Pesquisas
CONSIDERAÇÕES FINAIS
Alessandra Corallo Nicacio e Lindsay Unno Gimenes
Pesquisadoras Embrapa Gado de Corte
Obrigado.