Biotécnicas aplicadas à reprodução animal

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Liana Ribeiro 
Biotécnicas aplicadas à reprodução animal 
● Melhoramento genético; 
● Carne, leite, resistência, precocidade; 
● Sanitário: fluxo genético e eliminação e doenças venéreas; 
 
1. IA 
● Desde a coleta do sêmen, análise e processamento em laboratório, manutenção em períodos variáveis em 
condições extracorpóreas, até sua introdução no trato genital; 
● Aumento da eficiência reprodutiva; 
● 1930 - 1940; 
● Melhora a produção animal; 
● IATF: faz controle hormonal para induzir ovulação em tempo fixo e inseminação sem observação de cio; 
● DIA 0: P4 +benzoato´de estradiol; 
● DIA 8: retira o P4 + ciprionato de estradiol + PGF2 alfa; 
● Dia 10: IA; 
● Em bovinos de leite, usa-se benzoato de estradiol no dia 9; 
Métodos de coleta: 
● Vagina artificial; 
● Eletroejaculador; 
● Estimulação peniana; 
Avaliação do sêmen: 
● Concentração, motilidade, morfologia, armazenamento; 
Sexagem: ​baseado na quantidade de material genético; 
● Spz que contém o cromossomo X é mais denso; 
Genética: ​sexagem de spz; 
● Inseminação de diferentes fêmeas independente das condições do touro; 
● Tecnologias; 
 
IATF: 
● Aplicação de implante de progesterona transvaginal; 
● Induzir e sincronizar o momento da ovulação; 
● Concentra manejo; 
● Cinco dias após a IATF, repasse; 
Liana Ribeiro 
 
● Progesterona: limita ovulação; 
● Estrógeno: ovulação; 
 
2. Hiperestimulação ovariana e transferência embrionária 
● Obtenção de um maior número de oócitos por doadora; 
● Produção in vitro de embriões - PIVE; 
● Ovulações múltiplas; 
● Mais de um oócito ovulado - fertilizado = mais que um embrião; 
Técnica: 
● Controle da população de folículos; 
● Hiperestimulação do ovário com FSH; 
● Técnica poderá ser utilizada para ultrapassar barreiras anatômicas (oviduto, útero), se associada com Ovun 
Pick-up (OPU); 
● Dia 0: benzoato de estradiol + P4; 
● Dia 5 e 8: FSH duas vezes ao dia - manhã e tarde; 
● Dia 6 a 8: FSH duas vezes ao dia; 
● Dia 7: PGF 2 alfa e retirada de P4; 
● Dia 9: GNRH - aumenta liberação de LH - ovulação; 
● Dia 9 a tarde e 10 de manhã: 2 IA; 
● Coleta: ​7 dias após a segunda inseminação; 
1. Contenção adequada; 
2. Higienização; 
3. Lidocaína epidural - 3 ml; 
4. Passagem com o mandril; 
5. Infla o balão; 
6. Retira mandril; 
7. Insere equipo Y; 
8. Lavagem com PBS; 
 
● Transferência de um embrião de 7 dias para uma vaca que está 7 dias após o cio; 
 
 
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3. Produção in vitro de embriões 
● Técnica OPU; 
● Possibilita a obtenção de maior número de oócitos; 
● Maturação dos oócitos in vitro sem necessidade do animal; 
● Produção de embrião de animais de alto valor econômico, porém muito jovens; 
 
● Ovócito viável: camada espessa de células da granulosa em volta (cummulos oophus); 
● Após coletar ovócito, precisam sofrer o processo de maturação - meiose 1 para meiose 2; 
● Uso de incubadora de CO2 com meio de cultura específico (PBS, soro fetal bovino, atb) e tratamento hormonal - 
FSH e LH - manutenção por 24 horas; 
● Conforme ele vai crescendo, a maturação faz com que ele libere ÁCIDO HIALURÔNICO, expandido as células 
da granulosa = células do cummulus - mais fácil do spz chegar; 
● Incubadora:​ 5% de CO2 ou 20% e o restante de N2 - não simula necessariamente o útero (1,5 a 8 de O2, 5% de 
CO2 e o restante de N2); 
● Óleo mineral em cima da placa para manter estabilidade com a junção da atmosfera; 
● Grau - I até IV; 
● IV: totalmente desnudos ou degeneração - citoplasma com granulação e vesículas; 
● Após isso: ​inserir os espermatozóides - quantidade depende dos ovócitos em cada gota; 
○ 5 mil para cada oócito - gota; 
● Após isso: meio SOF - pegar os embriões e fazer o desnudamento com a pipeta, retirando as células em volta; 
○ Lavar e transferir para o meio de cultivo; 
○ Deixar em clivagem por 48 horas - após isso, fazer manutenção (troca de meio) e deixar crescer; 
○ No sétimo dia após cultivo: avaliar em qual fase ele se encontra; 
○ Ideal é que esteja na fase de BLASTOCISTO; 
○ Transferência; 
○ Embriões viáveis? como foi o desenvolvimento? 
 
Criopreservação de oócitos e embriões 
● Congelamento ou vitrificação; 
● Evitar formação de cristais - lenta ou rápida; 
● Crioprotetor: DMSO, glicerol, propanodiol; 
● Causam desidratação celular; 
1. Embriões na placa de petri - seleção e quais devem ser congelados; 
2. O grupo selecionado é lavado com solução de albumina bovina - BSA; 
3. Descanso em solução de crioprotetor com BSA - quantidade de crio depende do utilizado; 
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4. Uso de ATB; 
5. Envase dos embriões: aspirar embrião em cada palheta; 
6. Ar dentro da palheta ajuda manter a viabilidade do embrião; 
 
1. Forma lenta: ​faz com que a temperatura da palheta caia meio grau por minuto até chegar em -32ºC; 
● Após isso, pode ser colocado em N líquido e posteriormente, estão prontos para serem colocados no botijão; 
 
2. Forma rápida: ​vitrificação em palhetas abertas; 
● Insere-se uma [ ] alta de crioprotetor: 15% (glicerol) - 90 s em solução viscosa; 
● Envase - N líquido; 
 
Clonagem 
● Imortalizar genótipo sem garantia de fenótipo; 
● Duplicação do material genético; 
● Células troncos: ​células indiferenciadas que podem se transformar em diferentes tipos celulares; 
○ Multipotentes: células capazes de se diferenciar em quase todos os tecidos humanos, excluindo a placenta 
e anexos embrionários; 
○ Pluripotentes: dão origem a qualquer tecido do corpo - embrionários; 
○ Totipotentes: se transformam em qualquer outro tipo celular; 
● 
1. Utilização do oócito da doadora (maquinário); 
2. Enucleação do oócito: retirada do corpúsculo polar e metáfase 2; 
3. Coleta de célula somática do animal que iremos clonar (sanguínea, pele): cariotipo 2n (todo o material genético); 
4. Introdução da célula somática na zona pelúcida, ativando o oócito, fazendo com que o núcleo da célula somática 
fique dentro do oócito; 
5. Geração de um novo embrião; 
Clonagem terapêutica: ​produção do animal para fins terapêuticos; 
●