Contagem de células

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Contagem de células
Contagem de células totais
- estima um número aproximado da quantida-
de de microrganismos presentes na amostra,
ou seja, sua contaminação.
- A população de bactérias costuma ser muito
grande, é muito comum que se utilizem pe-
quenas amostras desses grupos bacterianos
para realizar uma contagem. A maioria dos
casos, a quantificação da população bacteria-
na é feita levando em conta o número de
células presentes em 1 ml do meio líquido ou
de 1 grama de matéria sólida.
Métodos
Contagem microscópica direta
Serve para determinar a quantidade de micro-
organismos totais
- bactérias aerobias ou facultativas
- fungos
Procedimento
1 gota da amostra em câmaras especiais de
contagem (com grade) e contagem direta-
mente no microscópio.
Limitações
Não é possível diferenciar as células mor-
tas das vivas e por isso o resultado apre-
senta pouca precisão.
Células pequenas são difíceis de identifi-
car 
Amostra não corada tem que usar mi-
croscópio de fase 
Motilidade de células dificulta a contagem 
Contagem padrão em placas
- Viáveis
Obtemos a contagem apenas das células vi-
vas;
- Células vivas: aquelas co a capacidade de
se duplicar e gerar uma nova célula.
É realizada em meio sólido adequado partin-
do-se do princípio que cada célula viável
é capaz de originar uma colônia.
Metodo de superficie: Usa-se um volume pe-
queno pois o excesso não pode ser absorvido.
Método de profundidade: utiliza volumes mai-
ores, porém os microrganismos devem
resistir à exposição rápida à 45°C.
 - Por causa do ágar que deve estar liquido e
para isso deve ser aquecido nessa temperatu-
ra aproximadamente.
PLACAS BACTERIANAS: Contagem realizada
entre 25 e 250 (côlonias são menores)
PLACAS COM FUNGOS: Contagem realizada
entre 10 e 150 (côlonias são maiores)
Para efetuar a contagem realizamos diluições
decimais, que servem para diminuir a quanti-
dade de colônias por placa.
- não há uma diluição pré determinada
Némero de côlonias obtidas depende de diver-
sos fatores como: tamanho do inóculo quali-
dade do meio de cultura condições e tempo
de incubação. Estes padrões jão são definidos
para cada microrganismo.
É muito comum que a contagem de microrga-
nismos em placa considere que cada colônia
tem sua origem de crescimento e desenvolvi-
mento em uma bactéria, porém, nem sempre
isso é uma verdade, já que geralmente as
bactérias tendem a crescer em cadeias ou em
grumos e já que duas ou mais células associa-
das formam uma única colônia é por isto que
o resultado é expresso em termos de unida-
des formadoras de colônias (UFC).
Contagem paadrão de bactérias aeróbias
Irá detectar o número de bactérias aeróbias
ou facultativas presentes tanto na formavege-
tativa quanto esporulada.
A contagem padrão em placas pode:
indicar a qualidade higiênica dos alimen-
tos,
fornecer uma ideia sobre o tempo útil de
conservação.
Se obtivermos um resultado alto significará
que possuimos a matéria prima excessivamen-
te contaminadas, causadas por:
Limpeza e desinfecção de superfícies ina-
dequadas.
Condições inadequadas de tempo/tempe-
ratura durante a produção ou a conserva-
ção dos alimentos.
Ou a combinação destas circunstâncias.
MICRORGANISMO PSICRÓFILOS
- Causam alterações em produtos conserva-
dos na geladeira
- Indicam subprocessamento térmico ou con-
taminação pós processamento
- quando tenho um produto estocado em re-
frigeração por muito tempo e mesmo assim
há presença de microrganismo isto está asso-
ciado a uma estocagem prolongada ou que
aquele frio é insuficiente.
MICRORGANISMO TERMÓFILOS
- sobrevivem a tratamento térmico (pausteri-
zação), pois os esporos não são eliminados
- a presença deles pode indicar duas coisas:
1. qualidade higienica da matéria prima, ou
seja, ela já veio contaminada
2. processamento térmico insuficiente
Contagem de fungos
Filamentoso - bolor ou mofo
Não filamentoso - levedura
Fugos são heterotróficos
Temperatura de incubação irá definir o jeito
que ele irá crescer, bolor ou levedura
MOFOS OU BOLORES
- Organismo eucariotos
- Multicelular
- Parede celular rígida (manana ou quitina)
- Microscópicos mas há outros que não (ex:
cogumelo)
- Não ingerem alimentos, apenas absorvem
Micélio: é constituído por uma trama de fila-
mentos, onde cada filamento é chamado
de hifa.
O micélio vegetativo, é a parte corresponden-
te a sustentação e absorção de nutrientes, se
desenvolvendo no interior do substrato.
LEVEDURAS
- Fungos não filamentosos
- Unicelular
- Levedura X bactéria
levedura é maior e possui um formato
oval e alongado
- Leveduras se multiplicam por fissão ou bro-
tamento
Levedura
Cicatrizes - impedem a formação de novos brotos, en-
tão chega um momento que ela não irá brotar mais
Importância de fungos
- presente no meio ambiente, e fazem parte
da microbiota do alimento
- deterioram muitos alimentos
- resistentes ao calor, frio, antibiótico, irradia-
ção, formam toxinas
- transformam subtratos impróprios em favo-
raveis para desenvolvimento de bactérias pa-
togenicas
Análises
Contagem de bacté-
rias
Contagem de fungos
Meio PCA (agar para
contagem padrão)
Meio BDA acidificado
Incubação 35ºC/48h Incubação 20ºC/5
dias
Contagem das pla-
cas da diluição que
apresentam de 25 a
250 colônias
Contagem das pla-
cas da diluição que
apresentam de 10 a
150
Cálculos
Para Bactérias: 25 - 250
diluição 10 -2
10 -2 g ou ml de amostra --- 92 UFC
1 g ou ml de amostra ----- X
X = 9200 UFC
10 -2 g ou ml --- 78 UFC
1 g ou ml de amostra ----- X
X = 7200 UFC
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Média = 8,5.103 UFC/g ou ml
Para fungos: 10 - 150
diluição 10 -2
10 -2 g ou ml de amostra --- 92 UFC
1 g ou ml de amostra ----- X
X = 9200 UFC
10 -2 g ou ml --- 78 UFC
1 g ou ml de amostra ----- X
X = 7200 UFC
Diluição 10-3
10-3 g ou ml Amostra --- 10 UFC
1 g ou ml ------ x
X = 10 000
 10-3 g ou ml ---- 12 UFC
1 g ou ml ---- x
X = 12 000
Média 9,8.103 UFC/g ou ml