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Membrana Plasmática - Apresenta uma estrutura de natureza lipoproteica. - É formada por 2 camadas lipídicas (bicamada lipídica), onde estão inseridas as proteínas. - É assimétrica (tem uma face diferente da outra). - Face externa: presença do glicocálice (carboidrato associado ao lipídio: glicolipídio e à proteína: glicoproteína). - Face interna: é possível visualizar proteínas e o citoesqueleto (formado por espectrina), que vai manter a forma de um disco bicôncavo da hemácia. Definição: - circunda a célula - define seus limites - mantêm diferenças entre os meios interno e externo Estrutura geral para todas as membranas plasmáticas biológicas, apresentando algumas características especiais para membranas de cada organela. Funções: - Manutenção da integridade celular. - Permeabilidade seletiva (controle do movimento de substâncias para dentro e para fora da célula). - Regulação das interações célula-célula. - Reconhecimento de células estranhas e de células alteradas, através de receptores e antígenos. - Atuação como interface entre o citoplasma e o meio externo. - Estabelecimento de sistemas de transporte para moléculas específicas. - Transdução de sinais extracelulares físicos e/ou químicos em eventos intracelulares. Eritrócitos humanos (hemácias): - São os melhores modelos de membrana que existe para estudo. - Caso não possa trabalhar com eritrócitos de humanos, pegar de mamíferos. Outros grupos de animais possuem eritrócitos nucleados e com outras organelas membranas, então possuem vários tipos de membrana. - Nos mamíferos, os eritrócitos não são nucleados e a única membrana que existe é a plasmática. - Obtidos em grande número relativamente sem contaminação com outras células. - A membrana plasmática pode ser isolada sem contaminação por outras membranas. - Facilidade no preparo e obtenção da membrana plasmática (também denominadas de “fantasma”). - Pegar a hemácia, estourá-la, deixar extravasar a proteína (hemoglobina), ficando só com a membrana vazia (fantasma). - Têm a forma de disco bicôncavo. - Para retirar a hemoglobina de dentro da hemácia, colocá-la em meio hipotônico. - Em meio hipertônico, a hemácia perde água, fica murcha ou crenada. - Em meio isotônico, ela fica com a forma normal. - Em meio hipotônico, ela irá inchar. - Em meio muito hipotônico, ela irá lisar, estourar, deixando a hemoglobina sair, deixando apenas a membrana plasmática vazia (fantasma). Composição Química: lipoproteica Lipídios - MP - 40% - Organelas até 30% Proteínas - MP – 52% - Organelas até 70% Interações não covalentes Carboidratos – 8% Lipídios – Glicolipídios Proteínas - Glicoproteínas Lipídios: - A bicamada lipídica fornece a estrutura básica da membrana. - Serve como uma barreira relativamente impermeável à passagem da maioria das moléculas hidrossolúveis. - Algumas moléculas hidrossolúveis passam devido a proteínas que formam canais hidrossolúveis. - Constitui cerca de 50% da massa da maioria das membranas. - São moléculas anfipáticas (ou anfifílicas). Principais tipos de lipídios: - Fosfolipídios - Colesterol - Glicolipídios Fosfolipídios: - Mais abundantes. - Possuem cabeça polar (hidrofílica). - Possuem duas caudas de hidrocarboneto (hidrofóbicas). - As caudas tem: geralmente ácidos graxos e 14 a 24 (em média 18-20) átomos de carbono. - Uma das caudas tem uma ou mais (até quatro) duplas-ligações cis (insaturada). - A outra não contêm (saturada). - Cada dupla ligação causa flexão na cauda. - O comprimento e saturação das caudas mexe com o arranjo dos fosfolipídios e afetam a fluidez da membrana. Tipos de fosfolipídios: - Fosfatidilcolina - Esfingomielina - Fosfatidiletanolamina - Fosfatidilserina -carga negativa; está voltado para o lado do citoplasma. - Fosfatidilinositol –carga negativa; está voltado para o lado do citoplasma. pequena quantidade papel na sinalização celular - São raros os fosfolipídios -carga positiva Eletricamente neutros a pH fisiológico Lipídios – possíveis movimentos: - flexão - rotação - difusão lateral - flip-flop (ocorre raramente) (apenas o colesterol realiza) Colesterol: - Lipídio neutro, presente na maioria das membranas plasmáticas das células. - Quantidade: uma molécula ou mais para uma de fosfolipídio. - Organelas: presentes 5 a 10% dos lipídios. - Ausentes nos procariontes. - Nas células vegetais é substituído pelo ergosterol. - Tem um pequeno grupo polar, e daí vem a capacidade de realizar o movimento flip-flop, pois a ligação é fraca. - As células animais obtêm colesterol das dietas, e há a produção endógena (no fígado). Glicolipídios: - Descritos exclusivamente na face extracelular. - Atribui marcante assimetria a membrana plasmática. - Resultado da adição de açúcares no lúmen do aparelho de Golgi. - Provavelmente, ocorrem na membrana plasmática de todas as células animais. - Constitui cerca de 5% dos lipídios na face externa da membrana plasmática. Funções de glicocálice: - Proteção contra baixo pH. - Proteção contra enzimas digestivas. Funções de glicolipídios: - Podem alterar o campo elétrico da membrana plasmática. - Alteração na concentração de íons (Ca++). - GM1 – receptor para toxina bacteriana que causa a diarreia do cólera. Propriedades dos lipídios da membrana plasmática: - Assimetria da bicamada • Camada interna: Fosfatidiletanolamina Fosfatidilserina (carga negativa) Fosfatidilinositol (carga negativa) • Camada externa: Fosfatidilcolina Esfingomielina - Esses lipídios mexem com a fluidez da membrana. - Esses lipídios apresentam regiões chamadas de microdomínios lipídicos. Fluidez da membrana: - Facilidade com que as moléculas lipídicas e proteicas se movem no plano da bicamada. Fatores que influenciam na fluidez: - Insaturação e comprimento dos fosfolipídios: quanto mais fletida a cauda com 1 a 4 duplas ligações cis do lipídio for, mais insaturada ela será. - Quantidade de colesterol. - Temperatura. Importância: - Difusão das proteínas no plano da bicamada. - Interação com outras proteínas. Insaturação dos fosfolipídios: ↑ insaturação ↑ fluidez ↑ saturação ↑ viscosidade ↓ fluidez ↓ comprimento ↑ fluidez Quantidade de colesterol: ↑ colesterol ↑ solidez da membrana ↓ fluidez Temperatura: ↑ temperatura ↑ fluidez Microdomínios lipídicos: - Em formato de mosaico, a dupla camada lipídica é um fluido bidimensional no qual os lipídios e as proteínas se propagam livremente. - As membranas são formadas por macro e microdomínios, que compreendem os dois folhetos da dupla camada lipídica. - A membrana plasmática é um mosaico de microdomínios lipídicos, denominados “rafts” separados por regiões “NÃO rafts”. - O tamanho desses microdomínios pode variar; eles também podem fusionar uns com os outros ou mesmo dissociar-se. - Os microdomínios podem se fundir formando macrodomínios. Os macrodomínios podem se dissociar em microdomínios. Importância dos microdomínios: - Servem como plataforma para a fixação de proteínas membranárias. - Intervêm na expressão dos genes. - Ativação de algumas enzimas. - Biogênese da membrana e divisão celular. - Exerce papel estabilizador: anexina II liga o citoesqueleto cortical aos “rafts”. Proteínas: - Menos numerosas que os lipídios (1 proteína a cada 100 lipídios). - São até 50X mais volumosas que os lipídios. - Representam 50% da massa da membrana. - Desempenham a maioria das funções específicas da membrana. - Associa-se à carboidratos formando a cobertura celular ou glicocálice. - Existem proteínas que possuem domínios específicos dentro da membrana plasmática. Características das moléculas proteicas: - Possuem duas extremidades: Aminoterminal (NH2). Carboxiterminal (COOH). Ambas são hidrofílicas. - Partes intramembranárias são hidrofóbicas: Interagem com as caudas dos lipídios. Descrevem uma hélice alfa. Associaçãoproteínas/bicamada lipídica: - As proteínas unipasso é integral. - As proteínas multipassos formam canais que deixam passar material hidrossolúvel. - Algumas proteínas não tocam a bicamada: proteínas periféricas. Proteínas intrínsecas/integrais: - Proteínas que atravessam a bicamada lipídica: • Uma só vez: Simples α-hélice Glicoforinas Geralmente atuam como receptores. • Várias vezes: Múltiplas α-hélice ou β-barril banda 3 Atuam como canais. - Síntese assimétrica no RE. Proteínas periféricas: - Localizadas fora da dupla camada • Face externa da MP Ancoragem através do GPI N-CAM (molécula de adesão celular neural) • Face citosólica Ancoragem através de longas cadeias hidrocarbonadas Tirosina quinase Src Excepcionalmente Glicosiladas Funções das proteínas: - Transporte através da membrana - Recepção de informações - Reconhecimento celular - Inibição por contato - Aderências entre células - Diversas atividades enzimáticas - União citoesqueleto à membrana plasmática - Fixação de substâncias (medicamentos) - Fixação de vírus, toxinas ou de células Proteínas da membrana plasmática dos eritrócitos humanos: - Molécula cilíndrica longa, fina e flexível. - Comprimento – 100nm. - Principal componente do citoesqueleto. - Heterodímero formado por duas cadeias polipeptídicas antiparalelas (alfa e beta). Entrelaçadas frouxamente. Espectrina - Uma extremidade (COOH) é fosforilada. - Anomalia genética – indivíduos anêmicos. Eritrócitos esféricos e frágeis. Espectrina e o citoesqueleto - Fica na face interna da membrana do eritrócito, formando uma rede que vai manter a forma do disco bicôncavo. Ela não se prende sozinha. Glicoforina - Uma das maiores proteínas que estão expostas para a superfície externa dos eritrócitos. - Glicoproteína transmembrana (uma parte externa e outra interna). • 131 aminoácidos de extensão. • 100 resíduos de carboidratos. • 90% ou mais - ácido Siálico (confere carga negativa à membrana plasmática). - Segmento a-helicoidal hidrofóbico. Cerca de 20 aminoácidos. Localização bicamada lipídica não polar. Cobertura celular – glicocálice - Camada fibrilar que forma a parte externa da membrana celular. - Composição Oligossacarídeos das: • Glicoproteínas Transmembrana • Proteoglicanos Transmembrana • Glicoproteínas Absorvidas • Glicolipídios - Ligações covalentes às proteínas e lipídios. - Evidenciação pelos corantes: • Vermelho de Rutênio (ajuda na adesão celular). glicocálice - O glicocálice está sobre e entre as células. Funções do glicocálice: - Dependem de seus constituintes glicosilados. • Proteção da membrana plasmática. • Carga de Superfície: Ácido Siálico (carga negativa). • Função de armadilha: • Captura de Cátions Ca++ Mg+ K+ • Atividades enzimáticas. • Atua na adesão celular. microvilosidades cortadas transversalmente Visualiza-se: - 2 camadas eletrondensas (escuras) separadas por uma camada eletronlucente (clara).
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