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53 ESTUDEMED – BIOQUÍMICA.2 – MIKAIO DELGADO EXAME PARASITOLÓGICO DE FEZES O EPF (Exame Parasitológico de Fezes) conhecido também como Protoparasitológico, é Utilizado para Identificar Modificações do Trato Gastrointestinal, sendo auxilio para o Diagnóstico de Parasitoses Intestinas pelas Fezes. É um Exame Barato não invasivo que é feito para auxilia o diagnóstico e evitar exames evasivos e caros como os de Imagem e Endoscopia. Este exame é dividido em uma Observação Primária Macroscópica e uma Observação Secundária Microscópica e classificam o que for identificado em Quantitativo e Qualitativo. • Observação Macroscópica: Observa-se a Consistência, Odor, Muco, Sangue, Vermes ou fragmentos deles. • Observação Microscópica: Possibilita a identificação de Ovos e Larvas de Helmintos (Vermes Parasitas), Trofozoítos, Oocistos e Cistos de Protozoários, sendo estes as Formas ativas destes Parasitas (Protozoários). Os Métodos Quantitativos são menos utilizados e Permitem a Identificação Quantificada dos Ovos destes parasitas presentes nas Fezes. Já o Método Qualitativo é mais utilizado e identifica não a quantidade, mas sim a Forma Morfológica do Parasita presente nas Fezes. SOBRE A COLETA E A CONSERVAÇÃO DA AMOSTRA A Coleta sem Conservantes deve ser tirada com cuidado sem contaminação e Armazenada em Temperatura Baixa (5 a 10ºC), podendo ser na Geladeira por até 14, já em caso de fezes líquidas a amostra deve ser enviada imediatamente ao Laboratório. Quando houver conservantes, o Laboratório se encarrega de exercer as instruções e frascos necessários para este exame, que é basicamente o mesmo processo de coleta, porém, sendo o Protoparasitológico de 3 dias, onde as fezes são colhidas e armazenadas durante 3 dias, para auxiliar não só em um diagnóstico, mas também no acompanhamento do quadro clínico do paciente. • Quantidade a Colher Em Fezes Líquidas: Em fezes líquidas, no mínimo 10ml de fezes, o que equivale a uma Colher de Sopa. • Quantidade a Colher Em Fezes Sólidas: Os Potinhos de coleta geralmente acompanham um índice de volume a ser colhido. • Observação: Vale salientar que se deve coletar uma boa quantidade de Fezes, pois para um diagnóstico poderá ser necessário fazes repetições de exames gerais e, às vezes exames mais específicos e para isso o frasco não pode ser enviado com poucas fezes. MÉTODOS Não há método que identifique todos os parasitas ao mesmo tempo, entretanto, há Métodos mais Gerais que identificam vários Parasitas como o Método de Hoffman, Pons e Janer e os Métodos de Centrifugação, MIFC, Ritchie e Cropotest. • MÉTODO DE HOFFMAN, PONS E JANNER – MÉTODO DE SEDIMENTAÇÃO ESPONTÂNEA Em um Frasco coloca-se 5ml de Água com 2g de Fezes e tritura-se as fezes com um bastão de vidro ou palito de picolé, depois se acrescenta mais 20ml de água, após isso Filtra-se a suspensão 54 ESTUDEMED – BIOQUÍMICA.2 – MIKAIO DELGADO com uma Tela Metálica ou de Náilon (de 80 a 100 malhas por cm2) em um Cálice Cônico com capacidade de 200ml. Agita-se então a amostra com o Palito ou Bastão e depois Completa-se o Volume do Frasco com Água. Deixa-se o material descansar por 24h, depois desse tempo se o Material estiver muito opaco, deve-se retirar a água com cuidado para o Sedimento abaixo não vazar, por mais água e esperar 1h. Por outro lado, caso o sedimento esteja com uma coloração mais nítida, retira-se o Sedimento de Fezes para examinar em uma Lâmina. • Helmintos – Vermes Detectados: Os principais detectados são da Família Schistosoma, segue- se também: Fascicola Hepática: Parasita Platelminto de Canais Biliares advindo do Porco, Boi, Ovelha, Cobra, é pouco comum. Hymenolepis Nana: Platelminto, uma Tênia causadora de Himinolepíase, bem advinda dos ratos. Hymenolepis Diminuta: que é outra Tênia comum em ratos. Ascaris Lumbricoide: da Família Ascaris os vermes adultos podem medir 15 a 40cm e desenvolvem-se no intestino delgado. Ancylostoma Ceylanicum: Um tipo de lombriga nomatóideo, numerosas e menores, nutrem-se do sangue, preferem o intestino delgado. Ancylostoma Duodenale: Outro tipo de lombriga nomatóideo que desencadeia ancilostomíase e pode levar a morte sem tratamento, prefere o Duodeno. Necator Americanus: Lombriga nomatóideo geradora de necatoríase, comum em locais tropicais. Trichuris Trichiura: Lombriga nomatóideo do Intestino Grosso, causadora de Tricuríase. Todos esses helmintos são encontrados na forma de ovos, ou em fragmentos de vermes e causam infecções do trato gastrointestinal. • Protozoários Detectados: Os principais são a Giárdia Duodenalis: muito encontrada no Duodeno e no Jejuno causando infecção do trato gastrointestinal. Entamoeba Histolytica: Causa Amebíase, o que gera desinterias severas com sangue e muco, 3ºcausadora de morte por parasitas e habita-se no Intestino Grosso. Entamoeba Coli: Protozoário (ameba) que não causa danos ao organismo humano. Entamoeba Díspar: outro Protozoário Não Patogênico. Entamoeba Hartmanni: Outro Protozoário (Ameba) Não Patogênica. Endolimax Nana: Protozoário (menor ameba vivente nos humanos) Não Patogênico, raramente pode dar enjoos ou diarreias. Iodomoeba Butschilii: Ameba do Intestino Grosso, Protozoário Não Patogênico. Dientamoeba Fragilis: Pode aparecer em todo o trato gastrointestinal, pode gerar transtornos em algumas pessoas e em outras não. Balantidium Coli: Se aloja no Intestino Grosso, transmitida por contato com fezes de suínos e gera a Blantidiose, uma infecção que gera diarreia, febre, fraqueza, muco e sangue nas fezes, pode levar a desidratação. Todos esses se encontram na forma de Trofozoítos (protozoários). • Cryptosporidium Parvum: Pode levar a Criptosporidiose, uma infecção do Trato Gastrointestinal que em crianças, pessoas imunodeprimidas (principalmente aidéticos) pode levar a quadros de febre, cólicas intestinas, diarreias. Transmite-se pela má higienização de alimentos ou contato com animais afetados. Isospora Belli: Protozoário que é transmitido por má higienização, em pessoas imunodeprimidas pode gerar diarreias, febre, cólicas intestinais. Esses se encontram na forma de Oocistos. MÉTODO DE MIFC OU DE BLAGG – SEDMENTAÇÃO POR CENTRIFUGAÇÃO As Fezes são colhidas em um Líquido conservante de MIF (Composto de Formol, Mercúrio, Cromo, Glicerina e Água) devendo ser bem homogênea. Depois as fezes são colocadas em uma 55 ESTUDEMED – BIOQUÍMICA.2 – MIKAIO DELGADO Gaze Cirúrgica dobrada 4x e colocadas em um corpo descartável. Depois 2ml são levados a um Tubo Cônico de Centrifugação de 15ml, adicionando 5ml de Éter Sulfúrico e agitando bastante a amostra. Depois é Centrifugado a 1500rpm por minuto. Observa- se que para ser mais específico para o Cryptosporidium é necessário fazer o mesmo, porém, centrifugando por 10mn. Com um Bastão ou Palito de Picolé retira-se os detritos ligados ao tubo, depois vira-se o tubo para que o conteúdo possa ser despejado e ir passando o bastão até limpar o tubo. Depois se adiciona Salina (e) ou Lugol, então põe-se a amostra em uma lâmina para análise. Essa Análise mostra todos os Helmintos e Protozoários citados acima, porém, com um a mais, o Protozoário Cyclospora Cayetenasis: É transmitido por água e alimentos contaminados com fezes, causa diarreia, vômitos, cólicas enjoo. Apresenta-se em forma de Oocisto. Esse exame é bastante utilizado para o Parasitológico de Fezes de 3 dias, pois garante a conserva da Amostra. MÉTODO DE FORMOL-ÉTER – RICHIE Idem ao Método de MICF, exceto o fato de que esse usa Formol a 10%. COPROTEST É um processo de Centrifugação mais simples, onde o Paciente compra ou recebe um Coletor Coprotest que já vem com Formol a 10%. Então o paciente põe as Fezes, agita por 2 minutos e leva para o Laboratório. MÉTODO DE STOLL-HAUSHER Em um Erlenmayer de 56 a 60ml é adicionado uma Solução de Cloreto de Hidróxido de Sódio (NaOh) 0,1N, até marcar 56ml, então éAdicionado as Fezes até marcar os 60ml. As fezes então são distribuídas em 10 frascos de Pérolas de Vidro e agitadas até estarem com aspecto homogêneo. Retira-se 0,15ml da amostra a pondo em Lâmina para Análise, em aumento 10x faz-se a contagem, multiplica-se a contagem de Ovos por 100. Esse exame é utilizado de forma Quantitativa, principalmente para Avaliar o estado da Infecção de Ancilostomídeos (como os Acylostomas, Nector Americanos etc.), porém, também é utilizado para análise de outros Helmintos. MÉTODO DE KATO-KATZ Uma Solução Verde Malaquita é preparada para as Fezes serem Conservadas e os Parasitas serem Classificados. Num papel celofane semipermeável cortado em pedaços de 24mm por 30mm, mistura-se os papeis com as fezes e esperando 24h. Depois das 24h em um pedaço de Papel Higiênico são adicionadas uma parte das fezes e sobre elas uma tela metálica ou de náilon onde há compressão das Fezes, então irá passar ovos de helmintos e pequenos detritos pequenos como os ovos. Com um palito retira-se as fezes que passaram a Tela e as colocam em uma Lâmina para Análise. 56 ESTUDEMED – BIOQUÍMICA.2 – MIKAIO DELGADO Espera-se 2h para analisar a lâmina, conta-se os ovos e multiplica-se por 23. A OMS indica esse método para análise Quantitativa de Schitosoma Mansoni: Um platelminto causador da Esquistossomose, perigosa a saúde, presente em rios e lagos com fezes humanas, pode entrar por via Oral e até mesmo penetrado a Pele. No demais serve para análise das Lombrigas Ancylostoma e Trichuris Trichiura. Esse método não avalia Cistos de Protozoários.
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