10. Tipos de coloração

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Prof. Msc. Juliana Munduruca
� Realizar uma coloração significa colorir um
microrganismo com um corante, para tornar
algumas estruturas mais visíveis.
� A fixação utiliza calor ou álcool para matar ou
fixar os microrganismos em uma lâmina.
� Um esfregaço é um filme delgado de material
usado para o exame microscópico.
� Os corantes são sais compostos de um íon positivo e um íon
negativo, sendo que o colorido é conhecido como cromóforo.
� A cor dos corantes básicos está no íon positivo e a dos corantes
ácidos, no íon negativo.
� Como as bactérias são carregadas negativamente em pH
neutro, o íon positivo do corante básico irá corar as células
bacterianas.
� O íon negativo de um corante ácido irá corar o fundo de um
esfregaço bacteriano, produzindo uma coloração negativa.
Essa coloração é importante para a observação da forma geral
da célula, tamanho e cápsula, pois a célula torna-se bem visível
contra um fundo escuro contrastante.
� É uma solução aquosa ou alcoólica
de um único corante básico.
� É usada é destacar todo o
microrganismo, para que a forma
celular e as estruturas básicas
fiquem visíveis.
� A coloração é aplicada ao
esfregaço por um certo período de
tempo, e então é lavada. A lâmina
é seca e examinada.
� Algumas vezes, uma substância química
(mordente) é adicionada à solução para
intensificar a coloração.
� Funções do mordente:
� Aumentar a afinidade de uma coloração a uma
amostra biológica;
� Revestir uma estrutura, tipo flagelo, para torná-la
mais espessa e mais fácil de ver após ser corada.
� Diferenciam as bactérias de acordo com suas
relações aos corantes.
� Ex: coloração de Gram e a coloração álcool-ácido
resistente
� As bactérias Gram-positivas e Gram-negativas absorvem de maneira idêntica
o corante primário e o fixador, adquirindo uma coloração violeta devido à
formação de um complexo cristal violeta-iodo, insolúvel, em seus
citoplasmas.
� O álcool descolorante dissolve a porção lipídica das membranas externas das
bactérias Gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é removido,
descorando as células.
� Por outro lado, o álcool descolorante desidrata as espessas paredes celulares
das bactérias Gram-positivas e provoca a contração dos poros do
peptideoglicano, tornando-as impermeáveis ao complexo; o corante primário
é retido e as células permanecem coradas.
� Em seguida, a amostra é tratada com um corante secundário, a fucsina
básica.
� Ao microscópio, as células Gram-positivas aparecerão coradas em violeta
escuro e as Gram-negativas em vermelho ou rosa escuro.
� O método de Gram é uma das mais
importantes técnicas de coloração em
microbiologia médica, porém os resultados
não são universalmente aplicáveis, pois
algumas células bacterianas coram-se
fracamente ou não adquirem cor.
� A reação de Gram é mas consistente quando
usada em bactérias jovens, em crescimento e
em culturas frescas.
� A reação de Gram de uma bactéria pode
fornecer informação valiosa para o tratamento
da doença.
� As bactérias gram-positivas tendem a ser mortas
facilmente por penicilinas e cefalosporinas.
� As bactérias gram-negativas geralmente são
mais resistentes, pois os antibióticos não podem
penetrar na camada de lipopolissacarídeo.
� A coloração de Ziehl-Neelsen ou coloração álcool-
ácido resistente se liga fortemente apenas a bactérias
que possuem material céreo em suas paredes
celulares.
� Os microbiologistas usam essa coloração para
identificar todas as bactérias do gênero
Mycobacterium, incluindo os dois importantes
patógenos: M. leprae (agente causador da lepra) e M.
tuberculosis (agente causador da tuberculose).
� Essa coloração também é indicada para identificar as
linhagens patogênicas do gênero Nocardia.
� Os micróbios álcool-
ácido resistentes 
retêm a carbolfucsina
após a descoloração 
com álcool-ácido e 
ficam vermelhos.
� Os micróbios não-
resistentes captam o 
contra corante azul de 
metileno e ficam 
azuis.
� Os corantes especiais são
usados para corar e isolar
partes específicas dos
microrganismos, como os
endósporos e os flagelos, e
para revelar a presença de
cápsulas.
� A coloração negativa é
usada para tornar visíveis
as cápsulas microbianas,
pois estas são solúveis em
água e não aceitam a
maioria dos corantes
biológicos.
� Os endosporos não podem ser
corados pelos métodos comuns
pois os corantes não penetram
em suas paredes.
� A coloração para endosporos
mais comumente usada é a
técnica de Schaeffer-Fulton,
utilizando o verde de malaquita
como corante primário, fixação
com calor e lavagem com água. A
safranina é usada como
contracorante.
� Em um esfregaço corretamente
preparado, os endosporos
aparecem em verde dentro das
células vermelhas ou rosadas.
� Os flagelos bacterianos são
estruturas de locomoção muito
pequenas para serem vistos com
um microscópio óptico sem
coloração.
� Um procedimento tedioso e
delicado de coloração usa um
mordente e um corante
carbolfucsina para aumentar o
diâmetro dos flagelos até que se
tornem visíveis no microscópio
óptico.
� Os microbiologistas usam o
número e arranjo de flagelos como
auxílios diagnósticos.