2019 Bezerra et al , vitamina D leish en pt TRADUZIDO

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PESQUISA ORIGINAL
publicado: 09 de abril de 2019 doi: 
10,3389 / fcimb.2019.00088
Fronteiras em Celular e Microbiologia Infecção | www.frontiersin.org 1 Abril 2019 | Volume 9 | artigo 88
Editado por:
Justin Boddey,
Walter e Eliza Salão Instituto de
Pesquisa Médica, na Austrália
Revisados ​​pela:
Manuel Soto,
Universidade Autónoma de Madrid,
Espanha
Clara Lúcia Barbieri,
Universidade Federal de São Paulo, Brasil
* Correspondência:
Herbert Leonel de Matos Guedes
herbert@biof.ufrj.br ; 
herbert@xerem.ufrj.br ; 
hlmguedes@gmail.com
† Estes autores contribuíram† Estes autores contribuíram
igualmente para este trabalho
seção Especialidade:
Este artigo foi submetido
Parasite e Host, uma 
seção da revista Frontiers in Cellular 
and Infection
Microbiologia
Recebido: 15 de janeiro de 2019Recebido: 15 de janeiro de 2019
Aceitaram: 12 de março de 2019Aceitaram: 12 de março de 2019
Publicados: 09 de abril de 2019Publicados: 09 de abril de 2019
Citação:
Bezerra IPS, Oliveira-Silva G, Braga dsfs, de 
Mello MF, Pratti JES, Pereira
JC, da Fonseca Martins-AM, 
Firmino-Cruz G, Maciel Oliveira-D, Ramos TD, 
Vale AM, Gomes OCD, Rossi-Bergmann B e de 
Matos Guedes HL (2019) Dietary vitamina D3
Deficiência aumenta a resistência à Leishmania 
(L.) amazonensis
Infecção em Ratos.
Frente. Célula. Infectar. Microbiol. 9:88. doi: 
10,3389 / fcimb.2019.00088
A vitamina D3 dietético Deficiência aumenta a 
resistência às Leishmania (L.) amazonensis Infecção resistência às Leishmania (L.) amazonensis Infecção resistência às Leishmania (L.) amazonensis Infecção 
em Ratos
Izabella Pereira da Silva Bezerra 1 †, Gabriel Oliveira-Silva 1 †,Izabella Pereira da Silva Bezerra 1 †, Gabriel Oliveira-Silva 1 †,Izabella Pereira da Silva Bezerra 1 †, Gabriel Oliveira-Silva 1 †,Izabella Pereira da Silva Bezerra 1 †, Gabriel Oliveira-Silva 1 †,
Danielle Sophia Ferreira Santos Braga 1, Mirian França de Mello 1,Danielle Sophia Ferreira Santos Braga 1, Mirian França de Mello 1,Danielle Sophia Ferreira Santos Braga 1, Mirian França de Mello 1,Danielle Sophia Ferreira Santos Braga 1, Mirian França de Mello 1,
Juliana Elena Silveira Pratti 1, Joyce Carvalho Pereira 1,Juliana Elena Silveira Pratti 1, Joyce Carvalho Pereira 1,Juliana Elena Silveira Pratti 1, Joyce Carvalho Pereira 1,Juliana Elena Silveira Pratti 1, Joyce Carvalho Pereira 1,
Alessandra Marcia da Fonseca Martins 1, Luan Firmino-Cruz 1, Diogo Maciel-Oliveira 1,Alessandra Marcia da Fonseca Martins 1, Luan Firmino-Cruz 1, Diogo Maciel-Oliveira 1,Alessandra Marcia da Fonseca Martins 1, Luan Firmino-Cruz 1, Diogo Maciel-Oliveira 1,Alessandra Marcia da Fonseca Martins 1, Luan Firmino-Cruz 1, Diogo Maciel-Oliveira 1,Alessandra Marcia da Fonseca Martins 1, Luan Firmino-Cruz 1, Diogo Maciel-Oliveira 1,Alessandra Marcia da Fonseca Martins 1, Luan Firmino-Cruz 1, Diogo Maciel-Oliveira 1,
Tadeu Diniz Ramos 1, André Macedo Vale 1, Daniel Claudio Oliveira Gomes 2,Tadeu Diniz Ramos 1, André Macedo Vale 1, Daniel Claudio Oliveira Gomes 2,Tadeu Diniz Ramos 1, André Macedo Vale 1, Daniel Claudio Oliveira Gomes 2,Tadeu Diniz Ramos 1, André Macedo Vale 1, Daniel Claudio Oliveira Gomes 2,Tadeu Diniz Ramos 1, André Macedo Vale 1, Daniel Claudio Oliveira Gomes 2,Tadeu Diniz Ramos 1, André Macedo Vale 1, Daniel Claudio Oliveira Gomes 2,
Bartira Rossi-Bergmann 1 e Herbert Leonel de Matos Guedes 1,3 *Bartira Rossi-Bergmann 1 e Herbert Leonel de Matos Guedes 1,3 *Bartira Rossi-Bergmann 1 e Herbert Leonel de Matos Guedes 1,3 *Bartira Rossi-Bergmann 1 e Herbert Leonel de Matos Guedes 1,3 *
1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brasil, 2 Núcleo de Doenças Infecciosas / Núcleo de 1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brasil, 2 Núcleo de Doenças Infecciosas / Núcleo de 1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brasil, 2 Núcleo de Doenças Infecciosas / Núcleo de 1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brasil, 2 Núcleo de Doenças Infecciosas / Núcleo de 
Biotecnologia da Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, Brasil, 3 Núcleo Multidisciplinar de Pesquisa UFRJ - Xerém em Biologia da UFRJ Campus Duque de Biotecnologia da Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, Brasil, 3 Núcleo Multidisciplinar de Pesquisa UFRJ - Xerém em Biologia da UFRJ Campus Duque de Biotecnologia da Universidade Federal do Espírito Santo, Vitória, Brasil, 3 Núcleo Multidisciplinar de Pesquisa UFRJ - Xerém em Biologia da UFRJ Campus Duque de 
Caxias Professor Geraldo Cidade - Universidade Federal do Rio de Janeiro, Duque de Caxias, Brasil
As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por Leishmania parasitas, que têm diferentes manifestações As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por Leishmania parasitas, que têm diferentes manifestações As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por Leishmania parasitas, que têm diferentes manifestações 
clínicas. Leishmania (L.) amazonensis é endémica na América do Sul e provoca a leishmaniose cutânea (CL), que clínicas. Leishmania (L.) amazonensis é endémica na América do Sul e provoca a leishmaniose cutânea (CL), que clínicas. Leishmania (L.) amazonensis é endémica na América do Sul e provoca a leishmaniose cutânea (CL), que 
podem evoluir para uma forma difusa, caracterizado por uma resposta imune anérgicas. Desde as leishmanioses 
afetam principalmente as populações pobres, é importante compreender o envolvimento de imunonutrição, como o 
sistema imunológico é modulada por nutrientes da dieta eo efeito que isso tem sobre
Leishmania infecção. Vitamina D3 (VITD) é um imunonutriente obtido a partir de dieta ou sintetizado endogenamente, que Leishmania infecção. Vitamina D3 (VITD) é um imunonutriente obtido a partir de dieta ou sintetizado endogenamente, que 
suprime as respostas Th1 e Th17, favorecendo T auxiliar (Th) 2 e células T reguladoras geração (Treg). Com base nestas 
descobertas, este estudo tem como objetivo avaliar VITD dietética influência sobre L. (L.) amazonensis infecção experimental descobertas, este estudo tem como objetivo avaliar VITD dietética influência sobre L. (L.) amazonensis infecção experimental descobertas, este estudo tem como objetivo avaliar VITD dietética influência sobre L. (L.) amazonensis infecção experimental 
em ratinhos / C C57BL / 6 e BALB. Assim, ratinhos C57BL / 6 e BALB / c VITD deficiente (VDD) ratinhos foram gerados por 
meio de restrição dietética VITD 45 dias antes da infecção. Ambas as estirpes de ratinhos VDD mostrou um desenvolvimento 
da lesão mais controlado, em comparação com os ratinhos com uma dieta normal (Ctrl). Não se verificaram diferenças nos 
níveis séricos de anti- Leishmania IgG1 e IgG2a, mas não houve uma diminuição nos níveis de IgE em ratinhos VDD BALB / níveis séricos de anti- Leishmania IgG1 e IgG2a, mas não houve uma diminuição nos níveis de IgE em ratinhos VDD BALB / níveis séricos de anti- Leishmania IgG1 e IgG2a, mas não houve uma diminuição nos níveis de IgE em ratinhos VDD BALB / 
c. Embora o número de células T CD4 + não foi alterado, a CD4 + IFN-y + população de células T foi aumentada em número c. Embora o número de células T CD4 + não foi alterado, a CD4 + IFN-y + população de células T foi aumentada em número 
absoluto e percentual em ratinhos C57BL / 6 e ratinhos VDD BALB / c em comparação com ratinhos Ctrl. Também não houve 
diferença nos níveis de IL-4 e IL-17 de produção, no entanto, houve uma redução de IL-10 endógeno em ratinhos VDD. Em 
conjunto, os nossos dados indicam que VITD contribui para murino susceptibilidade leishmaniose cutânea e que a populao 
de culas Th1 podem ser relacionadas com a resistência dos ratinhos ao VDD L. (L.) amazonensis infecção.de culas Th1 podem ser relacionadas com a resistência dos ratinhos ao VDD L. (L.) amazonensis infecção.de culas Th1 podem serrelacionadas com a resistência dos ratinhos ao VDD L. (L.) amazonensis infecção.
Palavras-chave: leishmaniose, Leishmania amazonensis, vitamina D, Th1, imunonutrição, IL-10Palavras-chave: leishmaniose, Leishmania amazonensis, vitamina D, Th1, imunonutrição, IL-10Palavras-chave: leishmaniose, Leishmania amazonensis, vitamina D, Th1, imunonutrição, IL-10
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology#editorial-board
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology#editorial-board
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology#editorial-board
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology#editorial-board
https://doi.org/10.3389/fcimb.2019.00088
http://crossmark.crossref.org/dialog/?doi=10.3389/fcimb.2019.00088&domain=pdf&date_stamp=2019-04-09
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https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology#articles
https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
mailto:herbert@biof.ufrj.br
mailto:herbert@xerem.ufrj.br
mailto:hlmguedes@gmail.com
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https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fcimb.2019.00088/full
http://loop.frontiersin.org/people/671097/overview
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http://loop.frontiersin.org/people/400559/overview
http://loop.frontiersin.org/people/525586/overview
http://loop.frontiersin.org/people/396717/overview
Bezerra et al. VDD aumenta a resistência à leishmaniose
INTRODUÇÃO
As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por protozoários do Leishmania As leishmanioses são um grupo de doenças causadas por protozoários do Leishmania 
género, que são transmitidas a hospedeiros mamíferos por ies areia fl fêmeas da 
família Phlebotominae. A cada ano, 0,7 a 1 milhão de novos casos ocorrem em todo 
o mundo e as manifestações clínicas são divididos em cutânea ea letal leishmaniose 
visceral (LV) ( Burza et al., 2018 ). leishmaniose cutânea (CL) é geralmente visceral (LV) ( Burza et al., 2018 ). leishmaniose cutânea (CL) é geralmente visceral (LV) ( Burza et al., 2018 ). leishmaniose cutânea (CL) é geralmente 
caracterizada por uma única úlcera de auto-cura. No entanto, dependendo das 
espécies de parasitas envolvidos na infecção e do estado imunológico do 
hospedeiro, que pode evoluir para uma manifestação mais grave ( Scott andNovais hospedeiro, que pode evoluir para uma manifestação mais grave ( Scott andNovais 
de 2016 ). Leishmania (L.) amazonensis, uma espécie do L. (L.) mexicana complexo, de 2016 ). Leishmania (L.) amazonensis, uma espécie do L. (L.) mexicana complexo, de 2016 ). Leishmania (L.) amazonensis, uma espécie do L. (L.) mexicana complexo, de 2016 ). Leishmania (L.) amazonensis, uma espécie do L. (L.) mexicana complexo, de 2016 ). Leishmania (L.) amazonensis, uma espécie do L. (L.) mexicana complexo, de 2016 ). Leishmania (L.) amazonensis, uma espécie do L. (L.) mexicana complexo, 
é endémica em muitos países da América do Sul e pode causar uso di ff CL, 
caracterizada por uma resposta imune anérgica e excesso de parasitas em múltiplas 
lesões. Além disso, os casos de VL causada pela L. (L.) amazonensis Foram lesões. Além disso, os casos de VL causada pela L. (L.) amazonensis Foram lesões. Além disso, os casos de VL causada pela L. (L.) amazonensis Foram 
relatados anteriormente ( Silveira et al., 2004 ). Desde a Leishmania spp. amastigota relatados anteriormente ( Silveira et al., 2004 ). Desde a Leishmania spp. amastigota relatados anteriormente ( Silveira et al., 2004 ). Desde a Leishmania spp. amastigota relatados anteriormente ( Silveira et al., 2004 ). Desde a Leishmania spp. amastigota relatados anteriormente ( Silveira et al., 2004 ). Desde a Leishmania spp. amastigota 
intracelular e são principalmente infectar macrófagos, o desenvolvimento de um T 
auxiliar (Th) uma resposta imune é desejável para o controlo da doença. Embora os 
ratinhos BALB / c são sensíveis e ratinhos C57BL / 6 são resistentes aos
L. (L.) major infecção, o desenvolvimento de um Th2, e uma resposta imune do tipo Th1, L. (L.) major infecção, o desenvolvimento de um Th2, e uma resposta imune do tipo Th1, 
respectivamente ( Heinzel et al., 1989; Launois et ai., 1997; Scott e Novais de 2016 ), Esta respectivamente ( Heinzel et al., 1989; Launois et ai., 1997; Scott e Novais de 2016 ), Esta respectivamente ( Heinzel et al., 1989; Launois et ai., 1997; Scott e Novais de 2016 ), Esta 
dicotomia não é observado em L. (L.) amazonensis infecção. A maioria das estirpes de dicotomia não é observado em L. (L.) amazonensis infecção. A maioria das estirpes de dicotomia não é observado em L. (L.) amazonensis infecção. A maioria das estirpes de 
ratos são sensíveis e desenvolver uma resposta imune de Th1 / Th2 misturado com baixo 
activação celular, como é observada em humanos ( Ji et al., 2002; Silveira et al., 2009; activação celular, como é observada em humanos ( Ji et al., 2002; Silveira et al., 2009; 
Velasquez et al., 2016 ).Velasquez et al., 2016 ).
Os tratamentos disponíveis contra leishmanioses são baseados em problemas de 
reposicionamento de drogas e havemany tais como elevada toxicidade, alto custo e o 
desenvolvimento de estirpes de parasitas resistentes. Além disso, existe ainda nenhuma 
vacina humana aprovado ( Rossi e Fasel, 2018 ). Assim, a compreensão imunobiologia doença vacina humana aprovado ( Rossi e Fasel, 2018 ). Assim, a compreensão imunobiologia doença vacina humana aprovado ( Rossi e Fasel, 2018 ). Assim, a compreensão imunobiologia doença 
é necessário para o desenvolvimento de estratégias que promovem o controle de infecção.
Neste contexto, imunonutrição é um fator chave para
ser considerados para se compreender melhor a modulação do sistema imune por 
nutrientes dietéticos, particularmente em doenças que um Effect populações pobres ( McCarthy nutrientes dietéticos, particularmente em doenças que um Effect populações pobres ( McCarthy 
e Martindale, 2018 ), Tal como as leishmanioses.e Martindale, 2018 ), Tal como as leishmanioses.
Vitamina D3 (VITD) é um imunonutriente importante que pode ser obtido a 
partir da dieta ou pode ser sintetizado endogenamente a partir de um precursor de 
colesterol (7-desidrocolesterol) através de incidência dos raios de sol-UVB na 
pele. Esta vitamina e seus metabolitos são essenciais para a homeostase do 
cálcio e também um crescimento celular Effect, di ff erentiation, e em função de 
muitos tecidos, incluindo o sistema imunitário ( Baeke et al., 2010; Bikle de 2011 ). muitos tecidos, incluindo o sistema imunitário ( Baeke et al., 2010; Bikle de 2011 ). muitos tecidos, incluindo o sistema imunitário ( Baeke et al., 2010; Bikle de 2011 ). 
VITD se liga ao receptor VITD nuclear (VDR), o qual forma um complexo com 
ácido retinóico receptor X (RXR) e promove a transcrição de vários genes através 
VITD elementos de resposta (VDREs) ( Pike e Meyer, 2012 ). VITD também induz VITD elementos de resposta (VDREs) ( Pike e Meyer, 2012 ). VITD também induz VITD elementos de resposta (VDREs) ( Pike e Meyer, 2012 ). VITD também induz 
nongenomics Effects relacionados para a célula de maturação, incluindo o factor 
de crescimento e de modulação de citocinas através de vias (citosólicas Hii e de crescimento e de modulação de citocinas através de vias (citosólicas Hii e 
Ferrante, 2016 ). Células imunes expressar VDR e que são capazes de Ferrante, 2016 ). Células imunesexpressar VDR e que são capazes de 
metabolizar circulante VITD para a forma activa de 1,25-di-hidroxicolecalciferol 
[1,25 (OH) 2 D 3], que suprime a resposta imunitária por bloqueio de culas dendricas [1,25 (OH) 2 D 3], que suprime a resposta imunitária por bloqueio de culas dendricas [1,25 (OH) 2 D 3], que suprime a resposta imunitária por bloqueio de culas dendricas [1,25 (OH) 2 D 3], que suprime a resposta imunitária por bloqueio de culas dendricas [1,25 (OH) 2 D 3], que suprime a resposta imunitária por bloqueio de culas dendricas 
(DC)
di ff erentiation e maturação, induzir um fenótipo estável tolerogénico ( Piemonti di ff erentiation e maturação, induzir um fenótipo estável tolerogénico ( Piemonti 
et al., 2000; Penna et al., 2005; Széles et al., 2009; Ferreira et al., 2012 ). et al., 2000; Penna et al., 2005; Széles et al., 2009; Ferreira et al., 2012 ). 
Além disso, as DC tratadas com
1,25 (OH) 2 D 3 estimular a geração de células T reguladoras (Treg) e prejudicar a 1,25 (OH) 2 D 3 estimular a geração de células T reguladoras (Treg) e prejudicar a 1,25 (OH) 2 D 3 estimular a geração de células T reguladoras (Treg) e prejudicar a 1,25 (OH) 2 D 3 estimular a geração de células T reguladoras (Treg) e prejudicar a 1,25 (OH) 2 D 3 estimular a geração de células T reguladoras (Treg) e prejudicar a 
activação de células T auto-reactivas ( van Halteren et al., 2004; Penna et al., 2005; activação de células T auto-reactivas ( van Halteren et al., 2004; Penna et al., 2005; 
Unger et al., 2009 ). Activo 1,25 (OH) 2 D 3 também induz a expressão CCR10 e Unger et al., 2009 ). Activo 1,25 (OH) 2 D 3 também induz a expressão CCR10 e Unger et al., 2009 ). Activo 1,25 (OH) 2 D 3 também induz a expressão CCR10 e Unger et al., 2009 ). Activo 1,25 (OH) 2 D 3 também induz a expressão CCR10 e Unger et al., 2009 ). Activo 1,25 (OH) 2 D 3 também induz a expressão CCR10 e Unger et al., 2009 ). Activo 1,25 (OH) 2 D 3 também induz a expressão CCR10 e 
pele-homing através da quimiocina CCL27, imprimindo epidermotropismo células T 
( Sigmundsdottir et al., 2007 ). Estas são funções fundamentais no contexto das ( Sigmundsdottir et al., 2007 ). Estas são funções fundamentais no contexto das ( Sigmundsdottir et al., 2007 ). Estas são funções fundamentais no contexto das 
doenças auto-imunes, alergias e immunopathologies, tais como leishmanioses.
Um estudo anterior demonstrou que o tratamento VITD tem um benéfico Effect on L. Um estudo anterior demonstrou que o tratamento VITD tem um benéfico Effect on L. 
(L.) mexicana infecção, controlando o desenvolvimento de lesões em ratinhos BALB / c ( Ramos-Martinez (L.) mexicana infecção, controlando o desenvolvimento de lesões em ratinhos BALB / c ( Ramos-Martinez (L.) mexicana infecção, controlando o desenvolvimento de lesões em ratinhos BALB / c ( Ramos-Martinez 
et al., 2013 ). Além disso, VITD também desempenha um papel favorável na infecção et al., 2013 ). Além disso, VITD também desempenha um papel favorável na infecção 
canina por
L. (L.) infantum, desde a progressão da doença é fortemente associada com VITD L. (L.) infantum, desde a progressão da doença é fortemente associada com VITD 
de fi ciência em cães ( Rodriguez-Cortes et al., 2017 ). Por outro lado, ratinhos BALB de fi ciência em cães ( Rodriguez-Cortes et al., 2017 ). Por outro lado, ratinhos BALB de fi ciência em cães ( Rodriguez-Cortes et al., 2017 ). Por outro lado, ratinhos BALB 
/ c VDR knockout ter aumentado a resistência L. (L.) major infecção ( Whitcomb et / c VDR knockout ter aumentado a resistência L. (L.) major infecção ( Whitcomb et / c VDR knockout ter aumentado a resistência L. (L.) major infecção ( Whitcomb et / c VDR knockout ter aumentado a resistência L. (L.) major infecção ( Whitcomb et 
al., 2012 ), Sugerindo um papel negativo para VITD. No geral, o papel de VITD emal., 2012 ), Sugerindo um papel negativo para VITD. No geral, o papel de VITD em
Leishmania infecção parece depender da espécie de parasita envolvido. Assim, este Leishmania infecção parece depender da espécie de parasita envolvido. Assim, este 
estudo tem como objetivo avaliar o Effect que dietética VITD tem sobre a infecção 
experimental com L. (L.) amazonensisexperimental com L. (L.) amazonensis
em ambos os ratinhos C57BL / 6 e BALB / c, incluindo o seu papel no 
desenvolvimento de uma resposta imune ao parasita.
MATERIAIS E MÉTODOS Ratos
Feminino C57BL / 6 e BALB / c de 6-8 semanas de idade do Instituto de 
Biofísica Carlos Chagas Filho, Universidade Federal do Rio de Janeiro (Brasil) 
foram mantidos em gaiolas esterilizados e recebeu filtradas água e regular de 
ração peletizada (AIN93M, Pragsoluções, Brasil). Dietary VITD deficiente (VDD) 
ratos foram submetidos a uma dieta comercial sem VITD (AIN-93M, 
Pragsoluções, Brasil) por 45 dias antes da infecção. A dieta foi mantida durante 
todo o experimento. Todos os procedimentos realizados estão em conformidade 
com os “Princípios Básicos para Pesquisa Envolvendo Uso de Animais”, 
aprovado e registrado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais em Pesquisas 
(CEUA / UFRJ número 157).
parasitas
Leishmania (L.) amazonensis promastigotas (MHOM / BR / 75) foram mantidas a Leishmania (L.) amazonensis promastigotas (MHOM / BR / 75) foram mantidas a 
26 ◦ C em Meio Essencial Mínimo 199 (MEM 199, Cultilab, Brasil) suplementado 26 ◦ C em Meio Essencial Mínimo 199 (MEM 199, Cultilab, Brasil) suplementado 26 ◦ C em Meio Essencial Mínimo 199 (MEM 199, Cultilab, Brasil) suplementado 
com 10% de soro de bovino fetal inactivado (HIFBS, Cultilab, Brasil), penicilina e 
estreptomicina (100 U / mL e 100 μ g / mL, respectivamente, StemCell estreptomicina (100 U / mL e 100 μ g / mL, respectivamente, StemCell estreptomicina (100 U / mL e 100 μ g / mL, respectivamente, StemCell 
Technologies, EUA) e hemina (5 μ g / mL, Sigma-Aldrich, EUA). Para assegurar a Technologies, EUA) e hemina (5 μ g / mL, Sigma-Aldrich, EUA). Para assegurar a Technologies, EUA) e hemina (5 μ g / mL, Sigma-Aldrich, EUA). Para assegurar a 
infectividade, os parasitas foram usadas no máximo até a quarta passagem de 
cultura, após o que, os parasitas foram novamente isoladas a partir de ratinhos / c 
pré-infectadas BALB.
Infecção
promastigotas de cultura na fase estacionária de crescimento foram utilizadas para a infecção. Os 
parasitas foram lavados com PBS por centrifugao a 1.500 g. Os ratinhos foram injectados 
subcutaneamente na almofada da pata traseira
Fronteiras em Celular e Microbiologia Infecção | www.frontiersin.org 2 Abril 2019 | Volume 9 | artigo 88
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology
https://www.frontiersin.org
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology#articles
Bezerra et al. VDD aumenta a resistência à leishmaniose
com 2 × 10 5 L. (L.) amazonensis promastigotas em um volume de 20 μ L. desenvolvimento com 2 × 10 5 L. (L.) amazonensis promastigotas em um volume de 20 μ L. desenvolvimento com 2 × 10 5 L. (L.) amazonensis promastigotas em um volume de 20 μ L. desenvolvimento com 2 × 10 5 L. (L.) amazonensis promastigotas em um volume de 20 μ L. desenvolvimento com 2 × 10 5 L. (L.) amazonensis promastigotas em um volume de 20 μ L. desenvolvimento com 2 × 10 5 L. (L.) amazonensis promastigotas em um volume de 20 μ L. desenvolvimento com 2 × 10 5 L. (L.) amazonensis promastigotas em um volume de 20 μ L. desenvolvimento com 2 × 10 5 L. (L.) amazonensis promastigotas em um volume de 20 μ L. desenvolvimento 
da lesão foi monitorizada por medição com um calibrador (No. 7301, Mitutoyo, Japão) 
uma vez a cada 7 dias para 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (ratinhos BALB / c) dias.
carga parasitária
cargas de parasitas foram avaliadas por ensaio de diluição limitante, como descrito 
anteriormente ( Torres-Santos et al., 1999 ). Brie fl y, no dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou anteriormente ( Torres-Santos et al., 1999 ). Brie fl y, no dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou anteriormente ( Torres-Santos et al., 1999 ). Briefl y, no dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 
99 (ratinhos BALB / c) pós-infecção, patas foram homogeneizados individualmente (2 
mL / pata), e diluído 1: 100 (apenas as amostras de ratos BALB / c) em MEM 199 . Os 
homogenatos foram diluídos em série 1: 4 em microplacas de 16 diluições (volume fi 
nal de 200 μ L / po), realizada em triplicado para cada amostra e incubou-se a 26 ◦ C nal de 200 μ L / po), realizada em triplicado para cada amostra e incubou-se a 26 ◦ C nal de 200 μ L / po), realizada em triplicado para cada amostra e incubou-se a 26 ◦ C nal de 200 μ L / po), realizada em triplicado para cada amostra e incubou-se a 26 ◦ C nal de 200 μ L / po), realizada em triplicado para cada amostra e incubou-se a 26 ◦ C 
durante 14 dias. O número inicial de amastigotas por almofada da pata foi calculada 
tomando como referência a última diluição na qual foram observadas ao microscópio 
óptico promastigotas, teoricamente equivalente a um único amastigota.
citocinas
IL-4, IL-17, e IL-10 foram medidos em sobrenadantes de homogenatos de lesão 
por Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). As concentrações de 
citocinas foram determinados a partir de curvas padrão utilizando citocinas 
recombinantes e anticorpos de murino, de acordo com as instruções do 
fabricante (BD Sistemas, EUA).
anticorpos
No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (ratos BALB / c) pós-infecção, as amostras de 
sangue foram recolhidas, e depois de repousar à temperatura ambiente durante 2 h, 
em seguida, centrifugadas a 2000 g para obter soro. Sérico de IgG1, IgG2a, IgA, IgE e 
anticorpos especí fi cos para L. (L.) amazonensis antigénios promastigotas (LaAg) anticorpos especí fi cos para L. (L.) amazonensis antigénios promastigotas (LaAg) anticorpos especí fi cos para L. (L.) amazonensis antigénios promastigotas (LaAg) 
foram quantificados por ELISA. LaAg foi preparado como descrito antes ( Pratti et al., foram quantificados por ELISA. LaAg foi preparado como descrito antes ( Pratti et al., 
2016 ). Brie fl y, as placas foram pré-tratados com LaAg (12016 ). Brie fl y, as placas foram pré-tratados com LaAg (12016 ). Brie fl y, as placas foram pré-tratados com LaAg (1
μ g / poço) e incubadas durante a noite a 4 ◦ C. As amostras foram diluídas 250 μ g / poço) e incubadas durante a noite a 4 ◦ C. As amostras foram diluídas 250 μ g / poço) e incubadas durante a noite a 4 ◦ C. As amostras foram diluídas 250 μ g / poço) e incubadas durante a noite a 4 ◦ C. As amostras foram diluídas 250 
vezes para a avaliação e os anticorpos biotinilados foram utilizados para a 
detecção (IgG1 de cabra anti-UNLB: ​​Cat. No. 1071-01, IgG2a de cabra 
anti-UNLB: ​​Cat No. 1101-01, cabra anti. IgE-UNLB: ​​Cat. No. 1110-05, cabra 
anti-rato IgAUNLB: ​​Cat. No. 1040-05, SouthernBiotec) de acordo com as 
recomendações do fabricante.
Citometria de fluxo
No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (ratinhos BALB / c) pós-infecção, poplítea 
lesão de drenagem linfonodos homogenatos foram preparados, 
celularidade foi realizada por contagem manual numa câmara de Neubauer e 
suspensões de células individuais foram incubadas com anti-CD3 (peridinina 
clorofila Complexo Proteico; PerCP-conjugado), anti-CD4 [R-ficoeritrina PE ea 
de corante de cianina Cy7 combinado; PE-Cy7 conjugada], e anti-IFN-y 
(aloficocianina; APC-conjugado) anticorpos monoclonais de acordo com as 
instruções do fabricante de eBioscience. As análises foram realizadas na 
Cúpula software. Portão estratégia é demonstrada em Suplementar Figura 5.Cúpula software. Portão estratégia é demonstrada em Suplementar Figura 5.
Análise estatística
Os resultados foram analisados ​​utilizando GraphPad Prism ROs resultados foram analisados ​​utilizando GraphPad Prism R
© versão 6.0© versão 6.0
Programas. Aluna t- foi utilizado o teste. Para o desenvolvimento de lesãoProgramas. Aluna t- foi utilizado o teste. Para o desenvolvimento de lesãoProgramas. Aluna t- foi utilizado o teste. Para o desenvolvimento de lesão
foi usada cinética de um ANOVA de duas vias com Bonferroni pós-teste. Os 
resultados são expressos como média ± desvio padrão (DP) e os rências di ff entre resultados são expressos como média ± desvio padrão (DP) e os rências di ff entre resultados são expressos como média ± desvio padrão (DP) e os rências di ff entre 
meios com P < 0,05 são considerados signi fi cativo. Todos os dados são meios com P < 0,05 são considerados signi fi cativo. Todos os dados são meios com P < 0,05 são considerados signi fi cativo. Todos os dados são 
representativos de três experimentos independentes.
RESULTADOS
Ratos VDD são mais resistentes a L. (L.) amazonensis InfecçãoRatos VDD são mais resistentes a L. (L.) amazonensis InfecçãoRatos VDD são mais resistentes a L. (L.) amazonensis Infecção
O desenvolvimento de L. (L.) amazonensis infecção foi avaliada em parcialmente O desenvolvimento de L. (L.) amazonensis infecção foi avaliada em parcialmente O desenvolvimento de L. (L.) amazonensis infecção foi avaliada em parcialmente 
susceptível C57BL / 6 e ratinhos BALB / c susceptíveis submetidos a restrição dietética 
VITD (VDD) ou alimentados com uma dieta normal (Ctrl). Ambos C57BL / 6 e ratinhos VDD 
BALB / c apresentaram um desenvolvimento da lesão mais controlada em comparação com 
aqueles na dieta normal ( As Figuras 1A, B) quando os ratinhos foram infectados com 2 × 10 5 aqueles na dieta normal ( As Figuras 1A, B) quando os ratinhos foram infectados com 2 × 10 5 aqueles na dieta normal ( As Figuras 1A, B) quando os ratinhos foram infectados com 2 × 10 5 aqueles na dieta normal ( As Figuras 1A, B) quando os ratinhos foram infectados com 2 × 10 5 aqueles na dieta normal ( As Figuras 1A, B) quando os ratinhos foram infectados com 2 × 10 5 aqueles na dieta normal ( As Figuras 1A, B) quando os ratinhos foram infectados com 2 × 10 5 
promastigotas. Em ratinhos C57BL / 6 VDD as lesões começaram a resolver pelo dia 60, ao 
passo que nos ratinhos Ctrl isso não ocorreu até ao dia 75. Em ratinhos BALB / c, as lesões 
continuaram a desenvolver-se até ao ponto final da expericia, com ratinhos BALB / c VDD 
ratos que mostram uma lesão fi signi cativamente menor ao longo deste tempo. Não houve 
di fi cativa ff erência signi nas cargas de parasita no local de infecção da C57BL / 6 VDD em 
comparação com ratinhos C57BL 6 ctrl / (dia 92) ou BALB / c VDD em comparação com 
murganhos BALB / c ctrl (dia
99) ( As Figuras 1C e D). Também foi avaliada a carga parasitária em gânglios 99) ( As Figuras 1C e D). Também foi avaliada a carga parasitária em gânglios 99) ( As Figuras 1C e D). Também foi avaliada a carga parasitária em gânglios 
linfáticos, e não foi observada nenhuma erência di ff entre os ratinhos infectados Ctrl 
e VDD, quer para murganhos C57BL / 6 e BALB / c ratinhos ( Figura Suplementar e VDD, quer para murganhos C57BL / 6 e BALB / c ratinhos ( Figura Suplementar 
1). É importante notar que a restrição dietética VITD não interferiu no aparecimento 1). É importante notar que a restrição dietética VITD não interferiu no aparecimento 
ou o peso corporal dos ratinhos ( Suplementar Figura 2). Além disso, quando uma ou o peso corporal dos ratinhos ( Suplementar Figura 2). Além disso, quando uma ou o peso corporal dos ratinhos ( Suplementar Figura 2). Além disso, quando uma 
alta challengemodel de 2 infectionwith × 10 6 promastigotas foi usado, sem erência di ff alta challengemodel de 2 infectionwith × 10 6 promastigotas foi usado, sem erência di ff alta challengemodel de 2 infectionwith × 10 6 promastigotas foi usado, sem erência di ff alta challengemodel de 2 infectionwith × 10 6 promastigotas foi usado, sem erência di ff alta challengemodel de 2 infectionwith × 10 6 promastigotas foi usado, sem erência di ff 
foi observada no tamanho da lesão entre a Ctrl e VDDmice para eachmouse estirpe ( Suplementar foi observada no tamanho da lesão entre a Ctrl e VDDmice para eachmouse estirpe ( Suplementar 
Figura 3).
Com base nisso, as experiências subsequentes foram realizados usando uma dosede infecção de dois × 10 5 parasitas. No entanto, como já tínhamos observado que a de infecção de dois × 10 5 parasitas. No entanto, como já tínhamos observado que a de infecção de dois × 10 5 parasitas. No entanto, como já tínhamos observado que a de infecção de dois × 10 5 parasitas. No entanto, como já tínhamos observado que a de infecção de dois × 10 5 parasitas. No entanto, como já tínhamos observado que a 
resolução da lesão foi mais acelerada nos C57BL / 6 ratos VDD ( Figura 1), avaliamos resolução da lesão foi mais acelerada nos C57BL / 6 ratos VDD ( Figura 1), avaliamos resolução da lesão foi mais acelerada nos C57BL / 6 ratos VDD ( Figura 1), avaliamos 
ainda mais a infecção pro fi le destes ratos para 149 dias para avaliar se houve 
resolução completa da lesão. No início da fase crónica não houve erência di ff entre 
os ratinhos VDD e CTRL, no entanto, mais tarde, na fase crónica, ratinhos VDD 
apresentou significativamente lesões menores em comparação com os ratinhos Ctrl 
( Suplementar Figura 4) indicando uma redução do tamanho da lesão, tanto no pico ( Suplementar Figura 4) indicando uma redução do tamanho da lesão, tanto no pico ( Suplementar Figura 4) indicando uma redução do tamanho da lesão, tanto no pico 
da infecção e em fase crónica tardia. No entanto, mais uma vez, não houve fi cativa 
di ff erência signi nas cargas de parasita no final esta pontos de tempo de fase 
crónica.
Aumentar em células T CD4 + IFN γ + T população de células na Aumentar em células T CD4 + IFN γ + T população de células na Aumentar em células T CD4 + IFN γ + T população de células na 
lesão de drenagem de linfonodos de VDD Mice
Para compreender melhor o papel dos VITD na resposta imune à infecção, fenótipo 
celular em nodos linfáticos poplíteos de drenagem da lesão foi avaliada no ponto final 
de infecção, o dia 92 para ratinhos C57BL / 6, e dia 99 para ratinhos BALB / c. Não 
houve di erência ff no número total de células dos nodos linfáticos entre ratinhos VDD e 
CTRL, em ambas as estirpes de ratinhos, C57BL / 6 ( A Figura 2A) e BALB / cCTRL, em ambas as estirpes de ratinhos, C57BL / 6 ( A Figura 2A) e BALB / cCTRL, em ambas as estirpes de ratinhos, C57BL / 6 ( A Figura 2A) e BALB / c
Fronteiras em Celular e Microbiologia Infecção | www.frontiersin.org 3 Abril 2019 | Volume 9 | artigo 88
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology
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Bezerra et al. VDD aumenta a resistência à leishmaniose
FIGURA 1 | VDD ratinhos são mais resistentes aos L. (L.) amazonensis infecção. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea na almofada FIGURA 1 | VDD ratinhos são mais resistentes aos L. (L.) amazonensis infecção. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea na almofada FIGURA 1 | VDD ratinhos são mais resistentes aos L. (L.) amazonensis infecção. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea na almofada FIGURA 1 | VDD ratinhos são mais resistentes aos L. (L.) amazonensis infecção. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea na almofada 
da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas e desenvolvimento da lesão foi seguido semanalmente ( A, B). No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, as cargas de parasitas no local da infecção foram avaliadas por da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas e desenvolvimento da lesão foi seguido semanalmente ( A, B). No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, as cargas de parasitas no local da infecção foram avaliadas por da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas e desenvolvimento da lesão foi seguido semanalmente ( A, B). No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, as cargas de parasitas no local da infecção foram avaliadas por da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas e desenvolvimento da lesão foi seguido semanalmente ( A, B). No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, as cargas de parasitas no local da infecção foram avaliadas por da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas e desenvolvimento da lesão foi seguido semanalmente ( A, B). No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, as cargas de parasitas no local da infecção foram avaliadas por da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas e desenvolvimento da lesão foi seguido semanalmente ( A, B). No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, as cargas de parasitas no local da infecção foram avaliadas por da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas e desenvolvimento da lesão foi seguido semanalmente ( A, B). No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, as cargas de parasitas no local da infecção foram avaliadas por 
ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.ensaio de diluição limitante ( CD). Os dados (média ± SD; n = 5 *** P < 0,0001; * P < 0,05) são representativos de três experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.
( A Figura 2B). Também não houve erência di ff no número de células CD4 + entre ratinhos ( A Figura 2B). Também não houve erência di ff no número de células CD4 + entre ratinhos ( A Figura 2B). Também não houve erência di ff no número de células CD4 + entre ratinhos 
VDD e Ctrl ( As Figuras 2C e D), mas em termos da percentagem de células CD4 + células VDD e Ctrl ( As Figuras 2C e D), mas em termos da percentagem de células CD4 + células VDD e Ctrl ( As Figuras 2C e D), mas em termos da percentagem de células CD4 + células VDD e Ctrl ( As Figuras 2C e D), mas em termos da percentagem de células CD4 + células 
na população de células totais, houve uma redução em ratinhos C57BL/ 6 VDD ( Figura na população de células totais, houve uma redução em ratinhos C57BL / 6 VDD ( Figura 
2E) e um aumento em ratinhos BALB / c VDD ( Figura 2F) em comparação com seus 2E) e um aumento em ratinhos BALB / c VDD ( Figura 2F) em comparação com seus 2E) e um aumento em ratinhos BALB / c VDD ( Figura 2F) em comparação com seus 2E) e um aumento em ratinhos BALB / c VDD ( Figura 2F) em comparação com seus 
respectivos controles. Desde a Leishmania spp. são parasitas intracelulares e indução de respectivos controles. Desde a Leishmania spp. são parasitas intracelulares e indução de respectivos controles. Desde a Leishmania spp. são parasitas intracelulares e indução de 
resposta Th1 é geralmente associada com o controlo da doença, o número e percentagem 
de células CD4 + população de células produtoras de IFN- γ foi ainda avaliada. O CD4 + IFN γ de células CD4 + população de células produtoras de IFN- γ foi ainda avaliada. O CD4 + IFN γ de células CD4 + população de células produtoras de IFN- γ foi ainda avaliada. O CD4 + IFN γ de células CD4 + população de células produtoras de IFN- γ foi ainda avaliada. O CD4 + IFN γ de células CD4 + população de células produtoras de IFN- γ foi ainda avaliada. O CD4 + IFN γ 
+ população de células foi aumentado em número absoluto ( As Figuras 2G, H) e a + população de células foi aumentado em número absoluto ( As Figuras 2G, H) e a + população de células foi aumentado em número absoluto ( As Figuras 2G, H) e a + população de células foi aumentado em número absoluto ( As Figuras 2G, H) e a 
percentagem de células CD4 + dentro população ( As Figuras 2I, J) em ratinhos C57BL / 6 e percentagem de células CD4 + dentro população ( As Figuras 2I, J) em ratinhos C57BL / 6 e percentagem de células CD4 + dentro população ( As Figuras 2I, J) em ratinhos C57BL / 6 e percentagem de células CD4 + dentro população ( As Figuras 2I, J) em ratinhos C57BL / 6 e 
ratinhos VDD VDD BALB / c em comparação com os respectivos controlos. Esta população 
de células pode ser associada com a resistência de ratos a L. (L.) amazonensis infecção.de células pode ser associada com a resistência de ratos a L. (L.) amazonensis infecção.de células pode ser associada com a resistência de ratos a L. (L.) amazonensis infecção.
BALB / c VDD exibem uma redução nos níveis de IL-10 e IgE, 
sem afetar IgG1 e IL-4 Produção
Citocinas e a produção de anticorpos no ponto final de infecção, o dia 92 para 
ratinhos C57BL / 6 e dia 99 para ratinhos BALB / c, foram também avaliadas. Ambos 
C57BL / 6 e ratinhos VDD VDD BALB / c não mostrou ff erência di na IL-4 e IL-17 
em comparação com os controlos respectivos ( As Figuras 3A-D), no entanto, foi em comparação com os controlos respectivos ( As Figuras 3A-D), no entanto, foi em comparação com os controlos respectivos ( As Figuras 3A-D), no entanto, foi 
observada uma diminuição de IL-10 em ratinhos VDD em comparação com ratinhos 
Ctrl ( Figuras 3E, F). Além disso, tanto C57BL6 VDD e BALB / c VDD não tinha Ctrl ( Figuras 3E, F). Além disso, tanto C57BL6 VDD e BALB / c VDD não tinha Ctrl ( Figuras 3E, F). Além disso, tanto C57BL6 VDD e BALB / c VDD não tinha 
erência di ff na produção de IgG1, IgG2a, e IgA
anticorpos especí fi C durante L. (L.) amazonensis antigénios em comparação com os controlos anticorpos especí fi C durante L. (L.) amazonensis antigénios em comparação com os controlos anticorpos especí fi C durante L. (L.) amazonensis antigénios em comparação com os controlos 
respectivos ( As Figuras 4A-F). níveis No entanto, ratinhos BALB / c VDDmice mostraram uma redução respectivos ( As Figuras 4A-F). níveis No entanto, ratinhos BALB / c VDDmice mostraram uma redução respectivos ( As Figuras 4A-F). níveis No entanto, ratinhos BALB / c VDDmice mostraram uma redução 
de IgE, em comparação com os ratos de controlo com a dieta normal ( A Figura 4H).de IgE, em comparação com os ratos de controlo com a dieta normal ( A Figura 4H).
DISCUSSÃO
Desde as leishmanioses são doenças negligenciadas que, principalmente, um ff ect 
populações pobres, fatores dietéticos poderia provavelmente influenciar o 
desenvolvimento da infecção. A hipótese de um possível envolvimento VITD na 
regulação de processos imunitários era devido à presença de uma abundância de 
receptores de VDR em tipos de células di ff erent do sistema imunitário, tais como CD4 
+ e linfócitos T CD8 +, neutrófilos, células dendríticas e macrófagos ( Baeke et al., 2010 ). + e linfócitos T CD8 +, neutrófilos, células dendríticas e macrófagos ( Baeke et al., 2010 ). + e linfócitos T CD8 +, neutrófilos, células dendríticas e macrófagos ( Baeke et al., 2010 ). 
Além disso, VITD desempenha um papel no desenvolvimento de Th2 e Treg respostas 
imunes, e na indução da expressão de linfócitos de moléculas alvo que homing de 
células para a pele ( Sassi et al., 2018 ). VDD ratinhos exibiram uma progressão da células para a pele ( Sassi et al., 2018 ). VDD ratinhos exibiram uma progressão da células para a pele ( Sassi et al., 2018 ). VDD ratinhos exibiram uma progressão da 
lesão menor pro fi cheiro, apesar de não apresentarem uma redução significativa na 
carga de parasitas, em comparação com ratinhos de controlo alimentados com uma 
dieta normal ( Figura 1). Este pro fi cheiro foi observada em ambos parcialmente dieta normal ( Figura 1). Este pro fi cheiro foi observada em ambos parcialmente dieta normal ( Figura 1). Este pro fi cheiro foi observada em ambos parcialmente 
susceptível C57BL / 6 e ratinhos / c susceptíveis BALB. Um estudo anterior descrito 
que murganhos C57BL / 6 KO-receptor VITD (VDRKO) ratinhos também são mais 
resistentes a L. (L.) major infecção em comparação com ratinhos de tipo selvagem resistentes a L. (L.) major infecção em comparação com ratinhos de tipo selvagem resistentes a L. (L.) major infecção em comparação com ratinhos de tipo selvagem 
(WT) ( Ehrchen et al., 2007; Whitcomb et al.,(WT) ( Ehrchen et al., 2007; Whitcomb et al.,
Fronteiras em Celular e Microbiologia Infecção | www.frontiersin.org 4 Abril 2019 | Volume 9 | artigo 88
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Bezerra et al. VDD aumenta a resistência à leishmaniose
A FIGURA 2 | Aumento do T CD4 + IFN γ + população de células em nódulos linfáticos de drenagem da lesão de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma A FIGURA 2 | Aumento do T CD4 + IFN γ + população de células em nódulos linfáticos de drenagem da lesão de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma A FIGURA 2 | Aumento do T CD4 + IFN γ + população de células em nódulos linfáticos de drenagem da lesão de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma A FIGURA 2 | Aumento do T CD4 + IFN γ + população de células em nódulos linfáticos de drenagem da lesão de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma A FIGURA 2 | Aumento do T CD4 + IFN γ + população de células em nódulos linfáticos de drenagem da lesão de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma A FIGURA 2 | Aumento do T CD4 + IFN γ + população de células em nódulos linfáticos de drenagem da lesão de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma 
vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, lesão de drenagem linfonodo vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea na almofada da pata com dois × 105L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, lesão de drenagem linfonodo vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, lesão de drenagem linfonodo vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, lesão de drenagem linfonodo vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, lesão de drenagem linfonodo 
celularidade ( A, B), número de linfócitos T CD4 + ( CD), percentagem de linfócitos T CD4 +celularidade ( A, B), número de linfócitos T CD4 + ( CD), percentagem de linfócitos T CD4 +celularidade ( A, B), número de linfócitos T CD4 + ( CD), percentagem de linfócitos T CD4 +celularidade ( A, B), número de linfócitos T CD4 + ( CD), percentagem de linfócitos T CD4 +celularidade ( A, B), número de linfócitos T CD4 + ( CD), percentagem de linfócitos T CD4 +
(E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são (E, F), número de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + (linfócitos G, H) e percentagem de IFN- γ produção de linfócitos T CD4 + ( EU J) foram avaliados por citometria de fluxo. Os dados (média ± SD; n = 5 ** P < 0,0001) são 
representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.
Fronteiras em Celular e Microbiologia Infecção | www.frontiersin.org 5 Abril 2019 | Volume 9 | artigo 88
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology
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Bezerra et al. VDD aumenta a resistência à leishmaniose
FIGURA 3 | Citocina pró fi le nas lesões de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via FIGURA 3 | Citocina pró fi le nas lesões de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via FIGURA 3 | Citocina pró fi le nas lesões de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via FIGURA 3 | Citocina pró fi le nas lesões de L. (L.) amazonensis- ratinhos infectados VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via 
subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6)ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) subcutânea na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, a citocina pró fi cheiro nas lesões foi avaliada por ELISA. IL-4 ( A, B), IL-17 ( CD), e IL-10 ( E, F) 
níveis em homogeneizados de tecidos foram quantificados. Os dados (média ± SD; n = 5;níveis em homogeneizados de tecidos foram quantificados. Os dados (média ± SD; n = 5;níveis em homogeneizados de tecidos foram quantificados. Os dados (média ± SD; n = 5;níveis em homogeneizados de tecidos foram quantificados. Os dados (média ± SD; n = 5;níveis em homogeneizados de tecidos foram quantificados. Os dados (média ± SD; n = 5;
* * *P < 0,001, ** P < 0,01) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.P < 0,001, ** P < 0,01) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.P < 0,001, ** P < 0,01) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.P < 0,001, ** P < 0,01) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.
2012 ). No entanto, os ratinhos BALB / c VDRKO apresentar nenhuma erência di ff no 2012 ). No entanto, os ratinhos BALB / c VDRKO apresentar nenhuma erência di ff no 
desenvolvimento da lesão durante L. (L.) major ratinhos infecção (comparedWT Whitcomb desenvolvimento da lesão durante L. (L.) major ratinhos infecção (comparedWT Whitcomb desenvolvimento da lesão durante L. (L.) major ratinhos infecção (comparedWT Whitcomb desenvolvimento da lesão durante L. (L.) major ratinhos infecção (comparedWT Whitcomb 
et al., 2012 ). Em conjunto, estes dados indicam que VDD, quer através da depleção VITD et al., 2012 ). Em conjunto, estes dados indicam que VDD, quer através da depleção VITD 
dietético ou a ablação de VITD-sinalização, leva a um aumento da resistência aos Leishmaniadietético ou a ablação de VITD-sinalização, leva a um aumento da resistência aos Leishmania
infecção. É importante notar que os modelos experimentais sem expressão de 
VDR são bastante erent di ff do modelo dietético privação VITD utilizado neste 
estudo. animais VDRKO tem uma ausência de uma resposta sistémica para 
VITD, uma célula di ff ff erentiation ecting e têm impacto sobre o sistema imune 
inata e adaptativa. Por outro lado, o uso de uma dieta deficiente não prejudica 
a síntese endógena de VITD ou sua sinalização
caminho, sendo o melhor modelo para estudar o impacto nutricional. Os nossos dados 
mostram que a utilização de ratinhos VDD, quer num fundo de C57BL / 6 ou BALB / c, uma 
resistência semelhante à L. (L.) amazonensisresistência semelhante à L. (L.) amazonensis
infecção foi observada, indicando um fenótipo forte usando a dieta VITD 
deficiente.
Ao contrário do que foi observado em CL, VITD de fi ciência está relacionada 
com a progressão da VL em cães ( Rodriguez-Cortes et al., 2017 ), Sugerindo com a progressão da VL em cães ( Rodriguez-Cortes et al., 2017 ), Sugerindo com a progressão da VL em cães ( Rodriguez-Cortes et al., 2017 ), Sugerindo 
rências di ff claras no envolvimento de macrófagos de pele e os órgãos viscerais, 
como o baço, o fígado e de medula óssea. Estudos clínicos em seres humanos 
deve ser realizada para melhor compreender o impacto da VITD deficiência de em 
CL e VL.
Fronteiras em Celular e Microbiologia Infecção | www.frontiersin.org 6 Abril 2019 | Volume 9 | artigo 88
https://www.frontiersin.org/journals/cellular-and-infection-microbiology
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Bezerra et al. VDD aumenta a resistência à leishmaniose
FIGURA 4 | L. (L.) amazonensis- especi fi produção de anticorpos em ratinhos c VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea FIGURA 4 | L. (L.) amazonensis- especi fi produção de anticorpos em ratinhos c VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea FIGURA 4 | L. (L.) amazonensis- especi fi produção de anticorpos em ratinhos c VDD. murganhos C57BL / 6 e BALB / c alimentados normalmente (Ctrl) ou sobre uma vitamina D-fi ciente de dieta (VDD) foram infectados por via subcutânea 
na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, L. (L.) amazonensis- especi fi c a produção de anticorpos no soro foi avaliada por ELISA. IgG1 ( A, B), IgG2a na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, L. (L.) amazonensis- especi fi c a produção de anticorpos no soro foi avaliada por ELISA. IgG1 ( A, B), IgG2a na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, L. (L.) amazonensis- especi fi c a produção de anticorpos no soro foi avaliada por ELISA. IgG1 ( A, B), IgG2a na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, L. (L.) amazonensis- especi fi c a produção de anticorpos no soro foi avaliada por ELISA. IgG1 ( A, B), IgG2a na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, L. (L.) amazonensis- especi fi c a produção de anticorpos no soro foi avaliada por ELISA. IgG1 ( A, B), IgG2a na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, L. (L.) amazonensis- especi fi c a produção de anticorpos no soro foi avaliada por ELISA. IgG1 ( A, B), IgG2a na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, L. (L.) amazonensis- especi fi c a produção de anticorpos no soro foi avaliada por ELISA. IgG1 ( A, B), IgG2a na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, L. (L.) amazonensis- especi fi c a produção de anticorpos no soro foi avaliada por ELISA. IgG1 ( A, B), IgG2a na almofada da pata com dois × 105 L. (L.) amazonensis promastigotas. No dia 92 (ratinhos C57BL / 6) ou 99 (BALB / c) pós-infecção, L. (L.) amazonensis- especi fi c a produção de anticorpos no soro foi avaliada por ELISA. IgG1 ( A, B), IgG2a 
( CD), IgA ( E, F), e IgE ( G, H) níveis foram quantificados. Significar ±( CD), IgA ( E, F), e IgE ( G, H) níveis foram quantificados. Significar ±( CD), IgA ( E, F), e IgE ( G, H) níveis foram quantificados. Significar ±( CD), IgA ( E, F), e IgE ( G, H) níveis foram quantificados. Significar ±( CD), IgA ( E, F), e IgE ( G, H) níveis foram quantificados. Significar ±( CD), IgA ( E, F), e IgE ( G, H) níveis foram quantificados. Significar ±( CD), IgA ( E, F), e IgE ( G, H) níveis foram quantificados. Significar ±( CD), IgA ( E, F), e IgE ( G, H) níveis foram quantificados. Significar ±
SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P < 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P< 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P < 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P < 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P < 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P < 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P < 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P < 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P < 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.SD; n = 5. Os dados (meios ± SD; n = 5; * P < 0,05) são representativos de duas experiências independentes que produzem o mesmo resultado pró fi cheiro.
Fronteiras em Celular e Microbiologia Infecção | www.frontiersin.org 7 Abril 2019 | Volume 9 | artigo 88
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Bezerra et al. VDD aumenta a resistência à leishmaniose
Uma abordagem erent di ff mostraram que o tratamento intraperitoneal com a 
forma activa do VITD, 1,25-di-hidroxicolecalciferol [1,25 (OH) 2 D 3] reduz forma activa do VITD, 1,25-di-hidroxicolecalciferol [1,25 (OH) 2 D 3] reduz forma activa do VITD, 1,25-di-hidroxicolecalciferol [1,25 (OH) 2 D 3] reduz forma activa do VITD, 1,25-di-hidroxicolecalciferol [1,25 (OH) 2 D 3] reduz forma activa do VITD, 1,25-di-hidroxicolecalciferol [1,25 (OH) 2 D 3] reduz 
significativamente o tamanho da lesão, em ratinhos BALB / c infectados com L. (L.) significativamente o tamanho da lesão, em ratinhos BALB / c infectados com L. (L.) 
mexicana, mas sem reduzir a carga de parasitas. O tratamento com 1,25 (OH) 2 D 3 está mexicana, mas sem reduzir a carga de parasitas. O tratamento com 1,25 (OH) 2 D 3 está mexicana, mas sem reduzir a carga de parasitas. O tratamento com 1,25 (OH) 2 D 3 está mexicana, mas sem reduzir a carga de parasitas. O tratamento com 1,25 (OH) 2 D 3 está mexicana, mas sem reduzir a carga de parasitas. O tratamento com 1,25 (OH) 2 D 3 está mexicana, mas sem reduzir a carga de parasitas. O tratamento com 1,25 (OH) 2 D 3 está 
associado com uma cura pro fi le, aumentando eosinófilos e fibroblastos em lesões, 
aumentando a produção de colagénio, e diminuir os níveis de citocinas Proin 
inflamatória em comparação com ratinhos de controlo não tratados, sem uma 
eliminação ff ecting parasita ( Ramos-Martinez et al., 2013 ). No entanto, este modelo eliminação ff ecting parasita ( Ramos-Martinez et al., 2013 ). No entanto, este modelo eliminação ff ecting parasita ( Ramos-Martinez et al., 2013 ). No entanto, este modelo 
usa a forma activa de VITD após a infecção, enquanto o VITD deficiente dieta uma 
imunidade Effects nos ratinhos antes da infecção. Assim, não é suficiente para 
comparar os resultados entre estas abordagens erent di ff, e VITD dietética de fi 
ciência é o modelo mais adequado para avaliar o impacto da nutrição na imunidade 
contra a leishmaniose.
Comparando-se ratinhos C57BL / 6 (ctrl parcialmente resistente) para ratinhos ctrl BALB 
/ c (susceptíveis), C57BL / 6 ratos exibiram números mais elevados de IFN- γ- produção de / c (susceptíveis), C57BL / 6 ratos exibiram números mais elevados de IFN- γ- produção de / c (susceptíveis), C57BL / 6 ratos exibiram números mais elevados de IFN- γ- produção de 
células CD4 + células, que estão relacionadas com o controle (leishmaniose Figura 2). Tem células CD4 + células, que estão relacionadas com o controle (leishmaniose Figura 2). Tem células CD4 + células, que estão relacionadas com o controle (leishmaniose Figura 2). Tem células CD4 + células, que estão relacionadas com o controle (leishmaniose Figura 2). Tem 
sido demonstrado que VITD suprime a resposta Th1 ( Cantorna et al., 2015 ). Corroborando sido demonstrado que VITD suprime a resposta Th1 ( Cantorna et al., 2015 ). Corroborando sido demonstrado que VITD suprime a resposta Th1 ( Cantorna et al., 2015 ). Corroborando 
esta dados, os nossos resultados mostram que tanto C57BL / 6 e BALB / c VDD têm uma 
frequência aumentada e número de IFN- γ- produção de células CD4 + ( Figura 2). Este frequência aumentada e número de IFN- γ- produção de células CD4 + ( Figura 2). Este frequência aumentada e número de IFN- γ- produção de células CD4 + ( Figura 2). Este frequência aumentada e número de IFN- γ- produção de células CD4 + ( Figura 2). Este frequência aumentada e número de IFN- γ- produção de células CD4 + ( Figura 2). Este 
aumento da resposta Th1 está provavelmente relacionada com o desenvolvimento da lesão 
mais controlada em ratinhos infectados VDD. No entanto, o aumento de IFN- γ- células mais controlada em ratinhos infectados VDD. No entanto, o aumento de IFN- γ- células mais controlada em ratinhos infectados VDD. No entanto, o aumento de IFN- γ- células 
produtoras não foi suficiente para controlar a carga de parasitas, de modo que talvez outros 
mecanismos são necessárias, tais como a produção de espécies reactivas de oxigénio pelos 
macrófagos. Considerando que, ratinhos VDRKO também exibem um aumento nos IFN- γ produção macrófagos. Considerando que, ratinhos VDRKO também exibem um aumento nos IFN- γ produção macrófagos. Considerando que, ratinhos VDRKO também exibem um aumento nos IFN- γ produção 
por células T CD4 + e CD8 + As células T durante L. (L.) major infecção, este controla tanto o por células T CD4 + e CD8 + As células T durante L. (L.) major infecção, este controla tanto o por células T CD4 + e CD8 + As células T durante L. (L.) major infecção, este controla tanto o por células T CD4 + e CD8 + As células T durante L. (L.) major infecção, este controla tanto o por células T CD4 + e CD8 + As células T durante L. (L.) major infecção, este controla tanto o 
desenvolvimento de lesões e carga de parasita ( Ehrchen et al., 2007 ). Nas nossas desenvolvimento de lesões e carga de parasita ( Ehrchen et al., 2007 ). Nas nossas desenvolvimento de lesões e carga de parasita ( Ehrchen et al., 2007 ). Nas nossas 
experiências, não se observou qualquer erência di ff em células T CD8 + (dados não 
mostrados), que pode estar associada à incapacidade de controlar a carga parasitária.
Avaliação da produção de citoquinas no local da infecção na fase crónica 
demonstrou que os ratinhos VDD, tanto murganhos C57BL / 6, e BALB / c, não têm 
erência di ff em IL-4 ( Figura 3), que também foi observado em L. (L.) major infecção erência di ff em IL-4 ( Figura 3), que também foi observado em L. (L.) major infecção erência di ff em IL-4 ( Figura 3), que também foi observado em L. (L.) major infecção erência di ff em IL-4 ( Figura 3), que também foi observado em L. (L.) major infecção erência di ff em IL-4 ( Figura 3), que também foi observado em L. (L.) major infecção 
de camundongos C57BL 6 ratinhos / VDRKO ( Whitcomb et al., 2012 ). Em vitro Estudos de camundongos C57BL 6 ratinhos / VDRKO ( Whitcomb et al., 2012 ). Em vitro Estudos de camundongos C57BL 6 ratinhos / VDRKO ( Whitcomb et al., 2012 ). Em vitro Estudos de camundongos C57BL 6 ratinhos / VDRKO ( Whitcomb et al., 2012 ). Em vitro Estudos de camundongos C57BL 6 ratinhos / VDRKO ( Whitcomb et al., 2012 ). Em vitro Estudos 
indicam que VITD regula positivamente a actividade de células Th2 ( Boonstra et al., indicam que VITD regula positivamente a actividade de células Th2 (Boonstra et al., 
2001; Staeva-Vieira e Freedman de 2002 ). IL-4 é uma citoquina associada à 2001; Staeva-Vieira e Freedman de 2002 ). IL-4 é uma citoquina associada à 
susceptibilidade a L. (L.) amazonensis ratinhos infecção e IL-4-fi ciente de BALB / c, susceptibilidade a L. (L.) amazonensis ratinhos infecção e IL-4-fi ciente de BALB / c, susceptibilidade a L. (L.) amazonensis ratinhos infecção e IL-4-fi ciente de BALB / c, 
são mais resistentes a infecção, dependendo do parasita inoculo inicial, o 
desenvolvimento de lesões menores e uma maior resposta de Th1, com maior IFN- γ, e desenvolvimento de lesões menores e uma maior resposta de Th1, com maior IFN- γ, e desenvolvimento de lesões menores e uma maior resposta de Th1, com maior IFN- γ, e 
a produção de IgG2a de murganhos WT ( Guimarães et al., 2006 ). Além disso, a a produção de IgG2a de murganhos WT ( Guimarães et al., 2006 ). Além disso, a a produção de IgG2a de murganhos WT ( Guimarães et al., 2006 ). Além disso, a 
patogénese leishmaniose está associado com o bloqueio de uma resposta Th1 
desenvolvimento, levando a um maior número de IL-4 e IL-células produzindo-10 nas 
lesões ( Carvalho et al., 2016 ). Estudos com ratinhos C57BL / 6 mostram que apenas lesões ( Carvalho et al., 2016 ). Estudos com ratinhos C57BL / 6 mostram que apenas lesões ( Carvalho et al., 2016 ). Estudos com ratinhos C57BL / 6 mostram que apenas 
30% da IL-4-receptor-de animais fi cientes desenvolver uma lesão após a inoculação 
de L. (L.) amazonensis e eles têm maior IFN- γ produção em comparação com ratinhos de L. (L.) amazonensis e eles têm maior IFN- γ produção em comparação com ratinhos de L. (L.) amazonensis e eles têm maior IFN- γ produção em comparação com ratinhos de L. (L.) amazonensis e eles têm maior IFN- γ produção em comparação com ratinhos de L. (L.) amazonensis e eles têm maior IFN- γ produção em comparação com ratinhos 
WT ( Felizardo et al., 2012 ). Apesar do fato de que VITD está relacionada com um WT ( Felizardo et al., 2012 ). Apesar do fato de que VITD está relacionada com um WT ( Felizardo et al., 2012 ). Apesar do fato de que VITD está relacionada com um 
desenvolvimento resposta imune Th2, VITD dietética de fi ciência não impactou a 
produção de IL-4 durante
L. (L.) amazonensis infecção. Também tem sido demonstradoL. (L.) amazonensis infecção. Também tem sido demonstrado
VITD que suprime erentiation Th17 célula di ff ( Cesto et al, 2012.; Fawaz et al., 2016 ), VITD que suprime erentiation Th17 célula di ff ( Cesto et al, 2012.; Fawaz et al., 2016 ), VITD que suprime erentiation Th17 célula di ff ( Cesto et al, 2012.; Fawaz et al., 2016 ), 
Uma citoquina relacionada com a patogénese de L. (L.) mexicana infecção ( Pedraza-Zamora Uma citoquina relacionada com a patogénese de L. (L.) mexicana infecção ( Pedraza-Zamora Uma citoquina relacionada com a patogénese de L. (L.) mexicana infecção ( Pedraza-Zamora Uma citoquina relacionada com a patogénese de L. (L.) mexicana infecção ( Pedraza-Zamora 
et al., 2017 ). No entanto, não foi observada nenhuma erência di ff no nível de IL-17 entre et al., 2017 ). No entanto, não foi observada nenhuma erência di ff no nível de IL-17 entre 
os ratinhos VDD e CTRL.
Nós demonstramos que VDD ratos apresentou uma redução de IL-10 em 
comparação com os ratinhos Ctrl ( Figuras 3E, F). Um fenipo similar foi observado comparação com os ratinhos Ctrl ( Figuras 3E, F). Um fenipo similar foi observado comparação com os ratinhos Ctrl ( Figuras 3E, F). Um fenipo similar foi observado 
em ratinhos C57BL6 VDRKO, com uma diminuição de IL-10 por PCR em tempo 
real em comparação com ratinhos WT ( Whitcomb et al., 2012 ). a produção de real em comparação com ratinhos WT ( Whitcomb et al., 2012 ). a produção de real em comparação com ratinhos WT ( Whitcomb et al., 2012 ). a produção de 
IL-10 tem sido associada a susceptibilidade a L. (L) amazonensis infecção ( Padigel IL-10 tem sido associada a susceptibilidade a L. (L) amazonensis infecção ( Padigel IL-10 tem sido associada a susceptibilidade a L. (L) amazonensis infecção ( Padigel IL-10 tem sido associada a susceptibilidade a L. (L) amazonensis infecção ( Padigel 
et al., 2003 ) E a redução de IL-10 está relacionada com a diminuição do tamanho et al., 2003 ) E a redução de IL-10 está relacionada com a diminuição do tamanho 
da lesão ( Padigel et al., 2003; Firmino-Cruz et al., 2018 ). Além disso, a produção da lesão ( Padigel et al., 2003; Firmino-Cruz et al., 2018 ). Além disso, a produção da lesão ( Padigel et al., 2003; Firmino-Cruz et al., 2018 ). Além disso, a produção 
de IFN- γ inibe a produção de IL-10 por macrófagos ( Herrero et al., 2003 ). de IFN- γ inibe a produção de IL-10 por macrófagos ( Herrero et al., 2003 ). de IFN- γ inibe a produção de IL-10 por macrófagos ( Herrero et al., 2003 ). de IFN- γ inibe a produção de IL-10 por macrófagos ( Herrero et al., 2003 ). de IFN- γ inibe a produção de IL-10 por macrófagos ( Herrero et al., 2003 ). 
Portanto, sugerimos VITD de fi ciência promove o aumento de IFN- γ que inibe a Portanto, sugerimos VITD de fi ciência promove o aumento de IFN- γ que inibe a Portanto, sugerimos VITD de fi ciência promove o aumento de IFN- γ que inibe a 
produção de IL-10, que está associado com a redução do tamanho da lesão.
A produção de anticorpos tem sido associada à patogênese em
L. (L.) amazonensis infecção ( Firmino-Cruz et al., 2018 ). Os nossos resultados mostram que L. (L.) amazonensis infecção ( Firmino-Cruz et al., 2018 ). Os nossos resultados mostram que L. (L.) amazonensis infecção ( Firmino-Cruz et al., 2018 ). Os nossos resultados mostram que L. (L.) amazonensis infecção ( Firmino-Cruz et al., 2018 ). Os nossos resultados mostram que 
não tinha VDDmice erência di ff em antigénio específico cIgG1 fi e a produção de IgG2a em 
comparação com ratinhos Ctrl ( A Figura 4).comparação com ratinhos Ctrl ( A Figura 4).
No entanto, foi demonstrado que murganhos C57BL / 6 infectados com VDRKOmice L. No entanto, foi demonstrado que murganhos C57BL / 6 infectados com VDRKOmice L. 
(L.) major produzir mais IgG2a em comparação com ratinhos WT ( Whitcomb et al., 2012 ). (L.) major produzir mais IgG2a em comparação com ratinhos WT ( Whitcomb et al., 2012 ). (L.) major produzir mais IgG2a em comparação com ratinhos WT ( Whitcomb et al., 2012 ). (L.) major produzir mais IgG2a em comparação com ratinhos WT ( Whitcomb et al., 2012 ). 
No que diz respeito a ratinhos VDD BALB / c, houve um nível de soro superior de IgE 
em comparação com ratinhos ctrl, que está relacionado com uma resposta imunitária de 
Th2. Nos seres humanos, VITD deficiência de está relacionado com o aumento de IgE 
com directa Effect em células B durante alergia ( James et ai, 2016.; Guo et al., 2018 ). com directa Effect em células B durante alergia ( James et ai, 2016.; Guo et al., 2018 ). com directa Effect em células B durante alergia ( James et ai, 2016.; Guo et al., 2018 ). 
Estudos utilizando modelos experimentais demonstram que a falta de VITD também 
interfere com a resposta imune a outros agentes patogénicos. VDD ratos aumentaram a 
susceptibilidade à infecção por pulmão Aspergillus fumigatus, o desenvolvimento de uma susceptibilidade à infecção por pulmão Aspergillus fumigatus, o desenvolvimento de uma susceptibilidade à infecção por pulmão Aspergillus fumigatus, o desenvolvimento de uma 
excessiva na resposta inflamatória ( Li et al., 2014 ). VITD também desempenha um excessiva na resposta inflamatória ( Li et al., 2014 ). VITD também desempenha um excessiva na resposta inflamatória ( Li et al., 2014 ). VITD também desempenha um 
papel-chave na imunidade contra Mycobacterium tuberculosis Em ratos. Após a papel-chave na imunidade contra Mycobacterium tuberculosis Em ratos. Após a papel-chave na imunidade contra Mycobacterium tuberculosis Em ratos. Após a 
estimulação BCG, IFN- γ níveis significativamente aumentada e níveis de IL-10 estimulação BCG, IFN- γ níveis significativamente aumentada e níveis de IL-10 estimulação BCG,