Av1 - Tipos de Testes Para Identificação Viral

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1)
A técnica de western blotting também pode ser denominada proteína immunoblot e consiste na detecção de proteínas especificas em amostras de lisados celulares ou de tecidos. Os passos para a elaboração dessa técnica pode ser resumida em cinco etapas: (1) extração e quantificação das proteínas; (2) fracionamento das proteínas da amostra em um gel de poliacrilamida; (3) transferências proteínas para uma membrana; (4) incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína especifica a ser analisada; e (5) revelação dessa membrana para análise dos dados. Considerando esse contexto, analise as seguintes afirmativas:
 
I. Para a extração e quantificação de proteínas o ensaio de Bradford e? o mais utilizado e apresenta diversas vantagens em relação aos demais, como rapidez, não exige aquecimento e alta sensibilidade para baixas concentrações de proteínas. Para quantificar a concentração de proteínas na amostra deve-se fazer uma curva de padronização com concentrações conhecidas de uma proteína (comumente se utiliza soro albumina bovina, BSA) versus absorbância em 595 nm (comprimento de onda que o complexo proteína-corante absorve).
 
II. A etapa de fracionamento de proteínas a técnica mais utilizada e? a eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE). Inicialmente prepara-se o gel de SDS-poliacrilamida, que será? uma matriz inerte através da qual as proteínas poderão migrar. O gel e? preparado pela polimerização de monômeros de acrilamida e o tamanho dos poros do gel pode ser ajustado variando a concentração da acrilamida adicionada para retardar a migração da sua proteína de interesse.
 
III. Na etapa de transferência para membrana e? necessário utilizar anticorpos específicos para a proteína desejada, mas antes, e? preciso que essas proteínas estejam em um suporte sólido, como membranas de nitrocelulose, PVDF ou de catiônicas de nylon. Essa transferência das proteínas do gel para a membrana inicialmente era feita por meio da capilaridade, mas atualmente usa-se a transferência eletrofore?tica que e? muito mais rápida e eficiente.
 
IV. Para detectar a proteína especifica e? utilizado um anticorpo específico que vai reagir com um epi?topo da proteína, formando um complexo anticorpo-anti?geno. Esse anticorpo e? denominado anticorpo primário, pode ser policlonal (reconhece mais de um epi?topo) ou monoclonal (reconhece apenas um epi?topo da proteína de interesse) e e? produzido geralmente em camundongo ou em coelho.
Considerando as informac?o?es apresentadas, e? correto o que se afirma em:
Alternativas:
· a)
· I, apenas.
 b)
I e II, apenas.
 c)
II, III e IV, apenas.
 d)
I, II e IV, apenas.
 e)
I, II, III e IV.
Alternativa assinalada
2)
Nas de?cadas de 60 e 70, a ideia de transferir genes para curar doenc?as em humanos tornou-se mais pro?xima da realidade: desenvolveram-se linhas de ce?lulas geneticamente marcadas; compreendeu-se o mecanismo de transformac?a?o celular em mami?feros pelos vi?rus polioma e SV40 e, posteriormente, criaram-se as te?cnicas de DNA recombinante permitindo, assim, a primeira tentativa de transfere?ncia ge?nica em organismos complexos. Considerando o contexto apresentado, avalie as seguintes asserc?o?es e a relac?a?o proposta entre elas.
 
I. Dois tipos de te?cnicas, denominadas de ex vivo e in vivo, sa?o utilizadas para levar genes para o interior das ce?lulas soma?ticos do corpo humano. Na te?cnica ex vivo, retiram-se ce?lulas do paciente, faz-se cultura das mesmas, usam-se vetores para nelas inserir o gene previamente isolado e engenheirado, e, por infusa?o, essas ce?lulas tratadas sa?o levadas de volta ao paciente. As ce?lulas da medula sa?o as mais usadas em terapia ex vivo, embora existam testes em outros tipos de ce?lulas. Na te?cnica in vivo, o gene engenheirado e? levado diretamente ao organismo do paciente, tambe?m usando vetores, pore?m dispensando a retirada de ce?lulas e sua subsequente reintroduc?a?o no paciente.
PORQUE
II. O isolamento do gene e o seu teste em culturas de ce?lulas na?o constituem grandes problemas de ordem te?cnica e/ou bioe?tica para fins de tratamento de doenc?as. A tecnologia de DNA recombinante, desenvolvida em organismos simples, vem sendo, com sucesso, transposta para organismos complexos, inclusive o humano. O desenvolvimento de vetores, todavia, continua sendo um dos grandes problemas em terapia ge?nica, tanto do ponto de vista te?cnico como e?tico. O gene isolado e replicado precisa de um vetor que o transporte para dentro de ce?lulas especi?ficas do paciente, que o incorpore ao DNA destas ce?lulas e o ative para desempenho exclusivo e adequado da func?a?o corretiva desejada.
A respeito dessas asserc?o?es, assinale a alternativa CORRETA.
Alternativas:
· a)
As asserc?o?es I e II sa?o proposic?o?es verdadeiras, mas a II na?o justifica a I.
 
· b)
As asserc?o?es I e II sa?o proposic?o?es verdadeiras e a II justifica a I.
Alternativa assinalada
· c)
A asserc?a?o I e? uma proposic?a?o verdadeira e a II, falsa.
· d)
A asserc?a?o I e? uma proposic?a?o falsa e a II, verdadeira.
· e)
As asserc?o?es I e II sa?o proposic?o?es falsas.
3)
O processo de diagnóstico envolve a tomada de decisão clínica sobre a realização ou não de uma ação e qual ação deve ser tomada, o que envolve, de modo consciente ou não, a análise de probabilidades. O diagnóstico pode se basear nos sinais e sintomas clínicos apresentados pelo paciente (diagnóstico clínico) ou nos dados obtidos por exames laboratoriais, que são cruciais para confirmar ou descartar suspeitas percebidas pelo exame clínico.
Considerando o contexto apresentado, avalie as seguintes asserções e a relac?a?o proposta entre elas.
I. A capacidade de um teste de identificar corretamente uma doença é chamada de sensibilidade (S), que pode ser expressa como a porcentagem de indivíduos doentes com um teste positivo. Um teste com sensibilidade de 90% indica que, a cada 100 indivíduos testados pelo método a ser avaliado e sabidamente com a doença, 90 serão identificados e 10 não serão (falso-negativos); assim, quanto maior a sensibilidade, menor a quantidade de falso-negativos.
PORQUE
II. Para determinar a especificidade e a sensibilidade de um teste sorológico, é preciso compará-lo com um teste considerado “padrão-ouro”, que é o teste com a melhor capacidade dentre todos os existentes para detectar os verdadeiros positivos e os verdadeiros negativos. Em geral, este método é muito mais complexo e demorado que os métodos sorológicos, por isso raramente é utilizado na prática clínica
A respeito dessas asserções, assinale a alternativa CORRETA.
Alternativas:
· a)
As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não justifica a I.
 
· b)
As asserções I e II são proposições verdadeiras e a II justifica a I.
Alternativa assinalada
· c)
A asserção I e? uma proposição verdadeira e a II, falsa.
· d)
A asserção I e? uma proposição falsa e a II, verdadeira.
· e)
As asserções I e II são proposições falsas.
4)
Os anticorpos, sintetizados pelas células B, constituem o braço humoral do sistema imune adaptativo. Desde o início do século XX, a terapia com anticorpos (imunoterapia) se estabeleceu como uma ferramenta poderosa contra uma variedade de doenças infecciosas. Pertencem à família das imunoglobulinas, glicoproteínas presentes no soro e em outros fluidos. Na maioria dos mamíferos, as imunoglobulinas existem em cinco classes denominadas de isotipos, IgM, IgG, IgA, IgD e IgE. Quatro cadeias polipeptídicas formam a unidade básica do anticorpo, sendo duas pesadas (constant heavy domain – CH) idênticas entre si e duas leves (constant domain – CL), também idênticas entre si.
 
I. A tecnologia de hibridomas dribla essa limitação ao promover a imortalização dos plasmócitos através da fusão de linfócitos B retirados de baço de camundongos com células de mieloma murino deficientes na produção de anticorpos, numa associação em que os linfócitos carregam a informação genética para a síntese de anticorpo e as células de mieloma portam a capacidade de crescimento constante e ilimitado.
 
II. A seleção é realizadapela manipulação das vias de síntese de nucleotídeos, permitindo que somente os híbridos linfócito-mieloma sobrevivam no meio de cultura contendo elementos seletivos.
 
III. Um anticorpo policlonal é secretado por um só clone de linfócitos T. Os anticorpos secretados são todos idênticos, representados por uma classe única de imunoglobulinas reconhecendo um determinado epítopo de um determinado antígeno, com a mesma especificidade e afinidade.
Considerando as informac?o?es apresentadas, e? correto o que se afirma em:
Alternativas:
· a)
I e III, apenas.
 
· b)
I e II, apenas.
Alternativa assinalada
· c)
III, apenas.
· d)
II, apenas.
· e)
I, apenas.
5)
A Engenharia Genética e? o conjunto de processos que permitem a manipulação do genoma de organismos vivos, com a consequente alteração das habilidades de cada espécie. Esta possibilidade de alteração das potencialidades genéticas dos organismos resultou na colaboração íntima e constante entre a chamada ciência básica e a ciência aplicada. São em grande número os objetivos práticos da pesquisa biológica, desde a satisfação da curiosidade humana sobre a natureza da vida, ate? o controle e eliminação de doenças humanas, de outros animais e de plantas, enfim, a melhoria da qualidade de vida. A tecnologia do DNA recombinante proporciona a produção de insulina artificial ou recombinante, trazendo enorme avanço na área da medicina e consequentemente na área industrial. Mesmo existindo ainda alguns limites (ética, preconceito, falta de informação e alto custo) para a aplicação prática da Engenharia Genética, não restam dúvidas de que a ciência dispõe de alta e promissora tecnologia para a solução de problemas que antes pareciam não ter solução. Considerando esse contexto, analise as seguintes afirmativas:
 I. A tecnologia do DNA recombinante (rDNA) se baseia em moléculas de DNA artificial contendo segmentos covalentemente ligados, derivados de duas ou mais fontes, são chamados de DNAs recombinantes. A Tecnologia do rDNA envolve modificação direta do DNA, de forma a alterar caracteri?sticas do organismo vivo ou introduzir novas caracteri?sticas.
 II. A clonagem do RNA envolve a separação de um gene específico e sua ligação a uma molécula de DNA transportadora e depois a replicação deste RNA modificado, o resultado e? uma amplificação seletiva de um gene particular. A bactéria Escherichia coli foi o primeiro organismo usado para o trabalho do rRNA e ainda e? a célula hospedeira mais comum.
III. São utilizados vetores de clonagem, nos quais a sequência de DNA de interesse e? inserida, utilizando a enzima DNA ligase. Quando necessário, o fragmento de DNA de interesse pode ser libertado do vetor por meio de enzimas de restrição.
 
Considerando as informac?o?es apresentadas, e? correto o que se afirma em:
Alternativas:
· a)
I, apenas. 
 
· b)
II, apenas.
· c)
III, apenas.
· d)
I e II, apenas.
· e)
I e III, apenas.
Alternativa assinalada
1)
 
A técnica de western blotting também pode ser denominada proteína immunoblot e 
consiste na detecção de proteínas especificas em amostras de lisados celulares ou de 
tecidos. Os passos para a elaboração dessa técnica pode ser resumida em cinco 
etapas: (1) ex
tração e quantificação das proteínas; (2) fracionamento das proteínas 
da amostra em um gel de poliacrilamida; (3) transferências proteínas para uma 
membrana; (4) incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína 
especifica a ser analisada; e 
(5) revelação dessa membrana para análise dos dados. 
Considerando esse contexto, analise as seguintes afirmativas:
 
 
 
I.
 
Para a extração e quantificação de proteínas o ensaio de Bradford e? o mais 
utilizado e apresenta diversas vantagens em relação aos demais, como rapidez, não 
exige aquecimento e alta sensibilidade para baixas concentrações de proteínas. Para 
quantificar
 
a concentração de proteínas na amostra deve
-
se fazer uma curva de 
padronização com concentrações conhecidas de uma proteína (comumente se utiliza 
soro albumina bovina, BSA) versus absorbância em 595 nm (comprimento de onda 
que o complexo proteína
-
corante 
absorve).
 
 
 
II.
 
A etapa de fracionamento de proteínas a técnica mais utilizada e? a eletroforese 
em gel de SDS
-
poliacrilamida (SDS
-
PAGE). Inicialmente prepara
-
se o gel de SDS
-
poliacrilamida, que será? uma matriz inerte através da qual as proteínas poderão 
migrar. O gel e? preparado pela polimerização de monômeros de acrilamida e o 
tamanho dos poros do gel pode ser ajustado variando a concentração da acrilamida 
adicionada para retardar a migração da sua proteína de interesse.
 
 
 
III.
 
Na etapa de transferência
 
para membrana e? necessário utilizar anticorpos 
específicos para a proteína desejada, mas antes, e? preciso que essas proteínas 
estejam em um suporte sólido, como membranas de nitrocelulose, PVDF ou de 
catiônicas de nylon. Essa transferência das proteínas
 
do gel para a membrana 
inicialmente era feita por meio da capilaridade, mas atualmente usa
-
se a 
transferência eletrofore?tica que e? muito mais rápida e eficiente.
 
 
 
IV.
 
Para detectar a proteína especifica e? utilizado um anticorpo específico que vai 
reag
ir com um epi?topo da proteína, formando um complexo anticorpo
-
anti?geno. 
Esse anticorpo e? denominado anticorpo primário, pode ser policlonal (reconhece 
mais de um epi?topo) ou monoclonal (reconhece apenas um epi?topo da proteína de 
interesse) e e? produz
ido geralmente em camundongo ou em coelho.
 
Considerando as informac?o?es apresentadas, e? correto o que se afirma em:
 
 
Alternativas:
 
·
 
a)
 
·
 
I, apenas.
 
·
 
b)
 
I e II, apenas.
 
·
 
c)
 
II, III e IV, apenas.
 
1) 
A técnica de western blotting também pode ser denominada proteína immunoblot e 
consiste na detecção de proteínas especificas em amostras de lisados celulares ou de 
tecidos. Os passos para a elaboração dessa técnica pode ser resumida em cinco 
etapas: (1) extração e quantificação das proteínas; (2) fracionamento das proteínas 
da amostra em um gel de poliacrilamida; (3) transferências proteínas para uma 
membrana; (4) incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína 
especifica a ser analisada; e (5) revelação dessa membrana para análise dos dados. 
Considerando esse contexto, analise as seguintes afirmativas: 
 
I. Para a extração e quantificação de proteínas o ensaio de Bradford e? o mais 
utilizado e apresenta diversas vantagens em relação aos demais, como rapidez, não 
exige aquecimento e alta sensibilidade para baixas concentrações de proteínas. Para 
quantificar a concentração de proteínas na amostra deve-se fazer uma curva de 
padronização com concentrações conhecidas de uma proteína (comumente se utiliza 
soro albumina bovina, BSA) versus absorbância em 595 nm (comprimento de onda 
que o complexo proteína-corante absorve). 
 
II. A etapa de fracionamento de proteínas a técnica mais utilizada e? a eletroforese 
em gel de SDS-poliacrilamida (SDS-PAGE). Inicialmente prepara-se o gel de SDS-
poliacrilamida, que será? uma matriz inerte através da qual as proteínas poderão 
migrar. O gel e? preparado pela polimerização de monômeros de acrilamida e o 
tamanho dos poros do gel pode ser ajustado variando a concentração da acrilamida 
adicionada para retardar a migração da sua proteína de interesse. 
 
III. Na etapa de transferência para membrana e? necessário utilizar anticorpos 
específicos para a proteína desejada, mas antes, e? preciso que essas proteínas 
estejam em um suporte sólido, como membranas de nitrocelulose, PVDF ou de 
catiônicas de nylon. Essa transferência das proteínas do gel para a membrana 
inicialmente era feita por meio da capilaridade, mas atualmente usa-se a 
transferência eletrofore?tica que e? muito mais rápida e eficiente. 
 
IV. Para detectar a proteína especifica e? utilizado um anticorpo específico que vai 
reagir com um epi?topo da proteína, formando um complexo anticorpo-anti?geno. 
Esse anticorpoe? denominado anticorpo primário, pode ser policlonal (reconhece 
mais de um epi?topo) ou monoclonal (reconhece apenas um epi?topo da proteína de 
interesse) e e? produzido geralmente em camundongo ou em coelho. 
Considerando as informac?o?es apresentadas, e? correto o que se afirma em: 
 
Alternativas: 
 a) 
 I, apenas. 
 b) 
I e II, apenas. 
 c) 
II, III e IV, apenas.