Biofísica Fotocolorimetria: Análise de Concentração

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Biofísica
fotocolorimetria
A fotocolorimetria é um método
biofísico de análise que possui
objetivo de determinar a
concentração de soluções.
- quanto mais concentrada uma
solução mais escura ela se
apresenta, ou seja, maior é a
quantidade de luz absorvida.
fundamentos teóricos:
- existe uma relação direta e
exponencial entre a concentração
de uma solução e luz por ela
absorvida.
- tomando-se dois recipientes
iguais, transparentes, contendo a
mesma substância em solução,
porém com concentrações
diferentes (C1 e C2), sendo C2>C1,
observa-se que a intensidade de
luz emergente do recipiente 2 (i2) é
menor que a do recipiente 1 (i1), (i2 <
i1)
- dois recipientes com C3=C4, sendo
o recipiente 4 maior que o 3,
(D4>D3), o i4< i3. Assim, a luz
emergente depende também do
percurso óptico, ou seja, a
distância percorrida pela luz
através da solução.
a partir dos experimentos eles
chegaram a Lei de Lambert- Beer
sendo:
I = luz emergente de uma solução
I0 = intensidade luminosa incidente
C = concentração
d = percurso óptico
k = constante de absorção que é
característica de cada substância.
Fotocolorímetro:
- usa apenas radiações
eletromagnéticas na região da luz
visível
Fonte de luz: deve ter estabilidade
na intensidade emitida e um
espectro de emissão adequado. é
utilizada uma lâmpada de filamento
de tungstênio alimentada por uma
tensão proveniente de um circuito
regulador de voltagem. é
necessária que a lâmpada emita luz
branca , ou seja, todos os
comprimentos de onda do espectro
de luz visível.
Filtro: através de filtros ópticos é
possível separar desta luz branca
as diferentes cores que as
constituem. cada cor corresponde
a uma faixa de comprimento de
onda ( ) do espectro de
radiações eletromagnéticas.
- o espectro de radiações
eletromagnética inclui os raios x,
UV, luz visível, infravermelho,
microondas e ondas de rádio.
- estes diferentes níveis de energia
acarretam diferentes
características, como o poder de
penetração dos raios x ou o
aquecimento infravermelho
- propriedades que lhe são comuns:
propagação pelo espaço com a
velocidade da luz, sofrem reflexão,
refração, difração e interferência.
Cubeta: recipiente onde se coloca a
a solução a ser analisada.
Confeccionado com um vidro
especial, ou descartáveis de
poliestireno e acrílico, ou cubetas
de quartzo que são utilizadas nos
espectrofotômetros.
Fotocélula: é um dispositivo opto-
eletrônico que tem a propriedade
de converter luz em corrente
elétrica.
Miliamperímetro: é um dispositivo
que mede a corrente elétrica
gerada pela fotocélula.
Espectrofotômetro
-são equipamentos semelhantes
aos fotocolorímetros, que utilizam
além das radiações
eletromagnéticas na região da luz
visível, radiação infravermelha e UV.
além de ser usado para
determinação da concentração de
soluções, é usado para a
identificação de substâncias e
determinação do seu grau de
pureza.
● O fotocolorímetro mede a
transmitância ou
absorbância das soluções.
transmitância
- expressa a quantidade de luz que
se transmite através de uma
solução.
Absorbância
- expressa a capacidade que tem
uma solução de absorver uma
certa quantidade de energia do
feixe de luz emergente.
relação entre absorbância e
transmitância:
A= 2 - log T%
Espectro de absorção:
absorbância x lambida
- o objetivo é descobrir o fotopico
( comprimento de onda com maior
absorbância). o uso do fotopico
aumenta a sensibilidade na
determinação de concentrações
desconhecidas no gráfico da curva
padrão.
curva padrão
absorbância x concentração
- teoricamente devia formar uma
reta, mas na prática isso não
ocorre. é preciso fazer a regressão
linear ( média dos valores da curva
padrão) para se obter a reta.