A técnica de PCR (ou Reação em Cadeia da Polimerase) é uma tecnologia que consiste na amplificação de uma região específica de DNA. Ou seja, com essa metodologia é possível produzir uma quantidade enorme de cópias de pequenas porções do DNA que se deseja estudar. Assim, ainda que a quantidade de DNA disponível na amostra seja muito pequena, a PCR torna possível a amplificação e manuseio do gene desejado. São as etapas da PCR:

Desnaturação

Inicialmente é necessário que as duas fitas de DNA a ser amplificado sejam separadas. A elevação da temperatura entre 90 a 95 ºC promove a separação da fita dupla de DNA em duas fitas simples. Muitas vezes a temperatura de desnaturação é determinada empiricamente e depende de alguns fatores como a quantidade de guanina e citosina do fragmento de DNA alvo.

Anelamento

Os primers utilizados nessa etapa são pequenos fragmentos sintéticos de DNA de fita simples que são sintetizados in vitro baseado na sequência do DNA a ser amplificado sendo esses complementares à sequência do segmento de DNA de interesse. Nas duas fitas surgem, assim, um pequeno fragmento de DNA de fita dupla intacta. Deve ser feito em temperatura inferior à de desnaturação ( 45 a 70 ºC).

Extensão

A partir dos primers, a DNA-polimerase liga os nucleotídeos entre si, completando assim as fitas simples e tornando-as duplas. A DNA-polimerase não reconhece apenas o bloco de início, mas também consegue diferenciar as duas extremidades dos primers (3’ e 5’). Ela inicia a reação sempre pela extremidade 3’ do primer, completando a fita simples daí em diante, sempre na direção do fragmento procurado.

Com base no texto apresentado, avalie as afirmações a seguir:

I – Para desnaturação da dupla fita de DNA é necessária uma temperatura de 75ºC

II – Para que ocorra a reação em cadeia da polimerase é necessária a adição in vitro de manose, glicose e frutose

III – a temperatura de Anelamento entre 45 a 70ºC é fundamental para que as duplas fitas de DNA se complementem

É correto apenas o que se afirma em:

*

1 ponto

a) Somente em I e II

b) Somente em II e III

c) Somente em I e III

d) Em I, II e III

e) Somente em III