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Química Analítica

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19. No cromatograma, a substância identificada pelo pico 1 (um) é tratada como uma substância que:


a) Está em maior concentração na amostra.
b) Está em menor concentração na amostra.
c) Há baixa interação com a fase estacionária.
d) Há baixa interação com a fase móvel.
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Questões Para a Compreensão

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Lista_de_Exerccio_HPLC_metodos_Instrumentais_plse_2023_1_vitoriaa
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No cromatograma, a substância identificada pelo pico 1 (um) é tratada como uma substância que: a) Está em maior concentração na amostra.

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Sobre a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, responda:
1. Sobre cromatografia líquida analise as seguintes afirmacoes como verdadeiras (V) ou falsas (F), justificando as falsas:
2. A figura a seguir esquematiza os elementos que compõem um cromatógrafo líquido de alta eficiência. Com base nisto, identifique os componentes e descreva as etapas operacionais que levam a obtenção do cromatograma.
3. Considere as seguintes condições cromatográficas em HPLC: coluna de sílica, eluente ACN:H2O (70:30, v/v), fluxo de 1 ml/min, detecção a 217 nm. O cromatograma apresentou 3 picos: Pico 1 Tr = 2 min Pico 2 Tr = 5 min Pico 3 Tr = 7 min. Qual pico representa o composto de menor polaridade? Justifique sua resposta.
4. Por que as fases estacionárias de sílica microporosa estão geralmente limitadas a operar na faixa de pH entre 2 e 8?
5. A cromatografia líquida de alta eficiência utiliza pressões elevadas para forçar a passagem de solventes através das colunas cromatográficas. Diante disto, por que é necessária alta pressão na HPLC e quais características as colunas analíticas devem apresentar para suportar essa pressão?
(F) A HPLC é uma técnica de ultra-microanálise, que de acordo com a substância e detector empregado é capaz de quantificar massas de componentes inferiores a 10-8 g. -> não é capaz
(F) As colunas analíticas são destinadas apenas para fins de identificação e quantificação, não sendo possível isolar os compostos de uma mistura. -> não é o objetivo, também é utilizado para fins de separação.
(V) Esse tipo de cromatografia foi inicialmente desenvolvida pelo russo Mikhail Tswett.
(V) Altura equivalente a um prato teórico, H, compreende o comprimento da coluna no qual o equilíbrio termodinâmico foi atingido entre a substância e a fase estacionária.

Com base na figura abaixo, identifique os componentes e descreva as etapas operacionais que levam a obtenção do cromatograma.
a. Fase móvel: A fase móvel é impulsionada pela bomba para se deslocar através do sistema cromatográfico.
b. Bomba: A bomba é responsável por acompanhar a fase móvel ao longo do sistema cromatográfico, permitindo que ela se misture com a amostra na coluna.
c. Injetor da amostra: O injetor da amostra é usado para introduzir a amostra no sistema cromatográfico, onde seus constituintes serão separados dentro da coluna.
d. Coluna: A coluna é onde ocorre a separação dos componentes da amostra com base nas temporariamente entre a fase móvel, fase estacionária e os componentes analisados.
e. Detector: O detector monitora as mudanças na fase móvel durante a separação cromatográfica. Ele detecta propriedades físicas específicas dos componentes, convertendo testes de variações em sinais elétricos que são enviados para o software de análise.
f. Descarte da fase móvel: É o local onde a fase móvel que passou pelo detector é descartada, uma vez que não possui mais utilidade para a análise.
g. Software: O software é responsável por receber e processar o sinal elétrico gerado pelo detector. Ele realiza o registro dos dados e realiza tratamentos matemáticos para gerar o gráfico ou cromatograma, que representam a separação dos componentes da amostra ao longo do tempo. O software também pode fornecer recursos adicionais de análise e interpretação dos resultados.

Considere as seguintes condições cromatográficas em HPLC: coluna de sílica, eluente ACN:H2O (70:30, v/v), fluxo de 1 ml/min, detecção a 217 nm. O cromatograma apresentou 3 picos: Pico 1 Tr = 2 min Pico 2 Tr = 5 min Pico 3 Tr = 7 min. Qual pico representa o composto de menor polaridade? Justifique sua resposta.


Por que as fases estacionárias de sílica microporosa estão geralmente limitadas a operar na faixa de pH entre 2 e 8?

A cromatografia líquida de alta eficiência utiliza pressões elevadas para forçar a passagem de solventes através das colunas cromatográficas. Diante disto, por que é necessária alta pressão na HPLC e quais características as colunas analíticas devem apresentar para suportar essa pressão?


7. Descreva as diferenças entre o bombeamento isocrático e por gradiente.

8. O detector emite um sinal elétrico o qual é registrado, que fornece informações de concentração ou a massa dos compostos da amostra que eluem ao longo da coluna cromatográfica. Descreva as propriedades, de maior relevância, que os detectores devem possuir.

Devem ser sensíveis.
Devem ser precisos.
Devem ser seletivos.
Devem ser exatos.

9. Aponte as diferenças, destacando as principais aplicações dos detectores empregados em HPLC: Detectores de absorbância no UV/Vis; Fluorescência; Índice de Refração; Eletroquímicos.

Detectores de Absorbância no UV/Vis: são amplamente utilizados devido à sua versatilidade e aplicabilidade em uma variedade de compostos. Podem ser usados para análises de fármacos, compostos orgânicos, poluentes ambientais, aminoácidos, entre outros.
Detectores de Fluorescência: são úteis para compostos que possuem propriedades de fluorescência. São amplamente empregados em aplicações biomédicas, ambientais e de alimentos, permitindo a detecção de baixas concentrações de analitos com alta sensibilidade e seletividade.
Detectores de Índice de Refração: são utilizados para analisar compostos não absorventes no UV/Vis, como açúcares, polímeros, lipídios e aminoácidos. São especialmente úteis quando os analitos não possuem grupos cromóforos ou quando a detecção de baixas concentrações é necessária.
Detectores Eletroquímicos: são utilizados para a análise de compostos redox ativos, como antioxidantes, compostos fenólicos, neurotransmissores e fármacos. São especialmente úteis na determinação de analitos eletroativos em matrizes complexas.

10. Qual coluna é mais eficiente: aquela com uma altura do prato igual a 0,1 mm ou 1 mm? Justifique sua resposta.

Uma altura do prato menor indica que a coluna é capaz de realizar uma maior quantidade de separações em um dado comprimento.
Isso pode resultar em uma melhor resolução.

11. Os cromatrogramas dos compostos A e B foram obtidos na mesma vazão em duas colunas de mesmo comprimento com eluente MeOH: H2O (35:65, v/v), coluna RP-C18 . Assinale a alternativa correta.

a) A coluna 2 tem resolução maior.
b) O composto B tem coeficiente de partição maior.
c) As colunas apresentam fator de retenção (k) diferente.
d) A coluna 2 é mais eficiente.


a) A coluna 2 tem resolução maior.
b) O composto B tem coeficiente de partição maior.
c) As colunas apresentam fator de retenção (k) diferente.
d) A coluna 2 é mais eficiente.

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