Vamos analisar as afirmativas sobre as etapas do teste de ELISA indireto: I. Inclusão de substrato, contendo cromógeno, que atuará na enzima presente no conjugado. - Esta etapa ocorre no final do teste, onde o substrato é adicionado para gerar a reação colorimétrica. Está correta. II. Adição de anticorpos a serem testados na placa. - Esta etapa é uma das primeiras, onde os anticorpos do soro do paciente são adicionados à placa. Está correta. III. Produto colorimétrico na reação enzima-substrato, visualizado por espectrofotometria. - Esta etapa ocorre após a adição do substrato e a reação, onde a intensidade da cor é medida. Está correta. IV. Adição de anticorpo marcado com enzima. - Esta etapa também é uma das primeiras, onde um anticorpo secundário, que é marcado com enzima, é adicionado após a incubação com os anticorpos do paciente. Está correta. Agora, vamos organizar a sequência correta das etapas do ELISA indireto: 1. Adição de anticorpos a serem testados na placa (II). 2. Adição de anticorpo marcado com enzima (IV). 3. Inclusão de substrato, contendo cromógeno (I). 4. Produto colorimétrico na reação enzima-substrato, visualizado por espectrofotometria (III). Portanto, a sequência correta para a metodologia do teste de ELISA indireto é: II, IV, I, III. Se houver uma alternativa que siga essa sequência, essa será a correta. Se não, você terá que verificar as opções disponíveis.