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A clonagem molecular tem demonstrado ser uma técnica excepcional para o isolamento de fragmentos de DNA específicos de um organismo. Os processos de clonagem e isolamento de tais fragmentos começam com a construção de bibliotecas de DNA, cDNA ou genômicas. Uma biblioteca de cDNA não apresenta introns porque:
Não podem ser construídas a partir de genes.
Os introns são retirados in vitro depois da construção do cDNA, por ação de nucleases.
É construída a partir de DNA genômico.
É construída a partir de mRNA maduro.
Os introns são degradados pela transcriptase reversa.
a) I e II estão corretas.
b) II e III estão corretas.
c) III e IV estão corretas.
d) IV e V estão corretas.
e) I e V estão corretas.
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Desafios para Aprender

ano passado

Respostas

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ano passado

Vamos analisar as alternativas: a) I e II estão corretas: A primeira afirmação diz que uma biblioteca de cDNA não apresenta introns porque os introns são retirados in vitro depois da construção do cDNA, por ação de nucleases. A segunda afirmação não está correta, pois uma biblioteca de cDNA é construída a partir de mRNA maduro, não de genes. Portanto, a alternativa a está incorreta. b) II e III estão corretas: A segunda afirmação está correta, pois uma biblioteca de cDNA é construída a partir de mRNA maduro. No entanto, a terceira afirmação diz que uma biblioteca de cDNA é construída a partir de DNA genômico, o que está incorreto. Portanto, a alternativa b também está incorreta. c) III e IV estão corretas: A terceira afirmação está incorreta, pois uma biblioteca de cDNA não é construída a partir de DNA genômico, mas sim de mRNA maduro. Portanto, a alternativa c está incorreta. d) IV e V estão corretas: A quarta afirmação diz que uma biblioteca de cDNA é construída a partir de mRNA maduro, o que está correto. A quinta afirmação diz que os introns são degradados pela transcriptase reversa, o que não é verdade. Portanto, a alternativa d está incorreta. e) I e V estão corretas: A primeira afirmação diz que uma biblioteca de cDNA não apresenta introns porque os introns são retirados in vitro depois da construção do cDNA, por ação de nucleases, o que está correto. A quinta afirmação diz que os introns são degradados pela transcriptase reversa, o que não é verdade. Portanto, a alternativa e está incorreta. Portanto, nenhuma das alternativas está correta.

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Considerando um trecho de uma molécula de DNA fita dupla, podemos afirmar que Se existe 35% de timina, logo este trecho também possui 15% de citosina.
Se existe 10% de adenina, logo este trecho também possui 20% de timina.
Se existe 10% de adenina, logo este trecho também possui 10% de uracila.
Se existe 25% de guanina, logo este trecho também possui 15% de timina.
Se existe 20% de guanina, logo este trecho também possui 15% de timina.
a) II and IV are correct.
b) II, III, and IV are correct.
c) I, III, and IV are correct.

Considerando as aplicações da PCR, assinale a opção correta.

A RT-qPCR permite a amplificação por meio da adição de aminoácidos a novas fitas de polímero sintetizadas.
O uso correto da PCR requer cuidados para evitar a desnaturação do DNA na etapa em que as fitas são separadas.
Ao se planejar um experimento para identificação de indivíduos, deve-se ter o cuidado de escolher sondas para qPCR em regiões que não contenham mutações.
Uma das limitações da PCR é a impossibilidade de se amplificar diferentes sequências simultaneamente.
Amplificação de conjuntos de repetições em tandem curtas (short tandem repeats) facilita a identificação de indivíduos.

Quanto à organização do material genético em células, é correto afirmar que:
O uso correto da PCR requer cuidados para evitar a desnaturação do DNA na etapa em que as fitas são separadas.
Amplificação de conjuntos de repetições em tandem curtas (short tandem repeats) facilita a identificação de indivíduos.
A RT-qPCR permite a amplificação por meio da adição de aminoácidos a novas fitas de polímero sintetizadas.
Ao se planejar um experimento para identificação de indivíduos, deve-se ter o cuidado de escolher sondas para qPCR em regiões que não contenham mutações.
Uma das limitações da PCR é a impossibilidade de se amplificar diferentes sequências simultaneamente.
A resposta correta é: Amplificação de conjuntos de repetições em tandem curtas (short tandem repeats) facilita a identificação de indivíduos.

Na extração de RNA todos os cuidados citados abaixo devem ser tomados exceto:
O DNA (ácido desoxirribonucleico), material genético de seres vivos, é uma molécula de fita dupla, que pode ser extraída de forma caseira a partir de frutas, como morango ou banana amassados, com uso de detergente, de sal de cozinha, de álcool comercial e de uma peneira ou de um coador de papel. O papel do detergente nessa extração de DNA é:
A resposta correta é: As células procarióticas possuem um único cromossomo, o qual se condensa no interior e é denominado de nucleoide.

No diagnóstico clínico-molecular, a reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real pode ser utilizada para a avaliação da carga viral ou bacteriana, para a determinação da resistência a antibióticos e, até mesmo, para o prognóstico de tumores malignos. A figura abaixo apresenta ciclos de amplificação de amostras por PCR em tempo real, sendo (A) uma amplificação de um determinado segmento gênico que identifica um determinado marcador tumoral em células neoplásicas e (B) uma amplificação do mesmo segmento gênico em células não neoplásicas. A partir das informações apresentadas, conclui-se que:
O aumento da fluorescência indica que a amplificação da sequência-alvo está ocorrendo, pois a cada ciclo, durante a desnaturação da dupla fita, ocorre liberação da fluorescência.
A linha paralela ao eixo referente ao número de ciclos, na altura em que se inicia a fase exponencial da amplificação gênica, denominado threshold, representa falsos sinais positivos por contaminação das amostras por DNA genômico.
O maior Ct (26) é observado no início da fase exponencial de amplificação em células não neoplásicas ( B ), e indica maior expressão comparativamente às células neoplásicas ( B ), que apresentam Ct = 17, não sendo esta sequência-alvo um bom marcador tumoral.
O Ct (ciclo threshold) pode ser determinado pela intersecção da linha do limiar de detecção da reação threshold, com a linha da amplificação gênica de cada amostra.
A análise comparativa das duas amostras deve ser realizada a partir da estabilização da amplificação, que ocorre na fase platô, sendo alcançada no ciclo 28 para a amostra A, e no ciclo 40, para a amostra B.

O DNA molde flanqueado pelos promotores torna a reação adversa a medicamentos possível. Os genes são os responsáveis pela informação hereditária, porém são fixos e não influenciam em como o organismo responde ao ambiente. É determinada pela existência de genes, pequenas estruturas nas quais os cromossomos se organizam. Variações no conteúdo genético, codificado pelo DNA, são umas das principais responsáveis pelas respostas alteradas a medicamentos.

a) Adição de grupamentos metila favorecem a compactação do DNA pelas histonas, impossibilitando a atuação da maquinaria transcricional.
b) Na extração de RNA usamos acetato de amônio para auxiliar a separação entre a fase orgânica e a aquosa.
c) Romper as membranas celulares para liberação do DNA em solução.
d) Os OGMs são organismos cujo material genético (RNA ou DNA) tenha sido modificado por qualquer técnica.
e) Southern Blot.

Você foi contratado por uma empresa de coleta de DNA para realizar testes de ancestralidade, a coleta é feita com swab pelo próprio cliente e o tubo chega em suas mãos. Leia as alternativas e marque a incorreta.
O kit utilizado para a coleta de DNA deve possuir informações claras e objetivas. A coleta pode ser realizada sem a necessidade de ir ao laboratório.
O tubo deve conter apenas o swab limpo dentro dele.
A amostra coletada pode ficar por até uma semana em temperatura ambiente.
É importante checar se tem dupla identificação através de um código de barras ou código numérico, além do nome do cliente.
O swab utilizado deve estar limpo, sem detritos, caso tenha marcas de batom ou restos de comida o cliente deve repetir o procedimento.
a) I e II estão corretas.
b) II e III estão corretas.
c) III e IV estão corretas.
d) IV e V estão corretas.
e) I e V estão corretas.

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