Grátis: [Laboratório Virtual - RT-PCR] Segundo o sumário da aula prática, a transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR - reverse... – Questões Respondidas

Biologia Molecular

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[Laboratório Virtual - RT-PCR] Segundo o sumário da aula prática, a transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR - reverse transcription polymerase chain reaction) é um método de biologia molecular utilizado desde o início da década de 1980. A partir de conhecimentos em virologia baseados em enzimas responsáveis pela replicação viral, os cientistas estudaram a atividade da enzima transcriptase reversa (RT - reverse transcriptase). Sobre os reagentes utilizados na reação de RT-PCR, analise as opções a seguir:

I- Amostra de RNA e Transcriptase reversa.
II- Primer F, primer R e OligoDT.
III- Buffer e MgCl 2 .
IV- dNTP, Taq DNA polimerase e indutor de RNAse.

Assinale a alternativa CORRETA:
A As opções II e IV estão corretas.
B As opções I e IV estão corretas.
C As opções I, II e III estão corretas.
D As opções I, III e IV estão corretas.

Ensinando Através de Questões

há 2 meses

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Respostas

Ed

há 2 meses

Vamos analisar cada uma das opções apresentadas sobre os reagentes utilizados na reação de RT-PCR: I- Amostra de RNA e Transcriptase reversa. Correta. A amostra de RNA é essencial para a transcrição reversa, e a transcriptase reversa é a enzima que catalisa essa reação. II- Primer F, primer R e OligoDT. Correta. Os primers são necessários para iniciar a síntese do DNA complementar a partir do RNA. OligoDT é um primer específico que se liga à cauda poli-A do RNA mensageiro. III- Buffer e MgCl 2. Correta. O buffer é necessário para fornecer o ambiente adequado para a reação, e o MgCl2 é um cofator essencial para a atividade da polimerase. IV- dNTP, Taq DNA polimerase e indutor de RNAse. Incorreta. Embora dNTPs e Taq DNA polimerase sejam necessários, o indutor de RNAse não é um componente típico da reação de RT-PCR. Na verdade, a RNAse é geralmente evitada para não degradar o RNA. Agora, vamos verificar as alternativas: A) As opções II e IV estão corretas. Incorreta. A IV está incorreta. B) As opções I e IV estão corretas. Incorreta. A IV está incorreta. C) As opções I, II e III estão corretas. Correta. Todas essas opções estão corretas. D) As opções I, III e IV estão corretas. Incorreta. A IV está incorreta. Portanto, a alternativa correta é: C) As opções I, II e III estão corretas.

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No processo de digestão in gel, os spots contendo as proteínas de interesse são submetidos a um processo de hidrólise química e enzimática, formando fragmentos proteicos menores, capazes de migrar pela malha do gel e se difundir no sobrenadante, formando a amostra que será analisada por espectrometria de massas. De acordo com a digestão in gel, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) As proteínas são apenas separadas de acordo com sua massa molecular, embora, nesse caso, as bandas obtidas do gel representem populações de proteínas com massas similares.
( ) A análise no espectrômetro de massas necessita que a carga líquida se torne negativa, ou seja, o processo de ionização não é necessário.
( ) A cromatografia líquida é utilizada como método de fracionamento, em que os peptídeos presentes na amostra são dissolvidos em uma fase líquida, bombeadas para passar por uma fase estacionária e direcionadas para espectrometria de massas.
( ) As amostras podem ser submetidas a outro fracionamento prévio à análise por MS, com o objetivo de reduzir a complexidade da amostra ou apenas complementar o fracionamento já realizado na eletroforese.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A $\quad \mathrm{V}-\mathrm{V}-\mathrm{F}-\mathrm{V}$.
B $\mathrm{V}-\mathrm{F}-\mathrm{V}-\mathrm{V}$.
C $\mathrm{F}-\mathrm{F}-\mathrm{V}-\mathrm{F}$.
D $\mathrm{V}-\mathrm{F}-\mathrm{F}-\mathrm{V}$.

A função do genoma pode ser investigada por meio da supressão da função gênica e, para tanto, algumas técnicas podem ser aplicadas, como, por exemplo, a promoção de mutações gênicas diretamente no DNA, a interferência na expressão gênica com a utilização de RNA de interferência (iRNA).
Sobre os RNAs de interferência (iRNAs), assinale a alternativa CORRETA:
a) Os iRNAs modificam a expressão ou tradução gênica, não afetando o DNA diretamente.
b) A utilização do iRNAs alteram a expressão gênica diretamente no DNA.
c) Os iRNAs promovem modificação permanente na expressão gênica.
d) O uso de moléculas de RNA conhecidas como microRNAs (miRNAs) se ligam a partes específicas do DNA e sinalizam para degradação do material genético.

A genômica estrutural busca determinar qual é esse local e onde estão os marcadores associados a cada um dos genes encontrados. Sobre os termos utilizados para denominar os locais de um cromossomo, assinale a alternativa CORRETA:
A O termo locus se refere a uma das formas em que um gene pode ser encontrado em um cromossomo.
B O termo homólogo se refere aos diferentes cromossomos, que apresentam genes heterógenos.
C O termo locus se refere ao local ou posição ocupada por um gene em um determinado cromossomo.
D O alelo se refere ao local ou posição ocupada por um gene em um determinado cromossomo.

Uma das descobertas mais intrigantes do projeto genoma humano foi identificar que somente uma pequena porcentagem de todo genoma codificava uma proteína. Com base nas sequências codificadoras e não codificadoras de proteínas, analise as sentenças a seguir:
Assinale a alternativa CORRETA:
I- Sequências codificadoras são chamadas de éxons e são responsáveis por originar sequências de aminoácidos específicas, que corresponde a uma proteína.
II- Sequências não codificadoras são denominadas de íntrons, não tendo função conhecida no genoma humano.
III- Sequências reguladoras são aquelas denominadas como éxons, regulando quando e quanto de um gene será expresso.
A Somente a sentença III está correta.
B Somente a sentença II está correta.
C As sentenças II e III estão corretas.
D As sentenças I e II estão corretas.

As avaliações proteômicas, especialmente por MS ou MS/MS, representam avaliações em larga escala. No entanto, até os métodos apresentados revelam certas limitações, especialmente associadas à perda de moléculas que possuam incompatibilidade por eletroforese em gel. Sobre as avaliações proteômicas, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:

I- A proteômica de shotgun é capaz de evitar as limitações impostas pela espectrometria de massas, se destacando pela ausência da digestão em gel.

# PORQUE

II- O extrato proteico é submetido à digestão e, portanto, todos os seus componentes são hidrolisados, incluindo aquelas proteínas incompatíveis com a eletroforese em gel.

Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são proposições falsas.
(11) As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
C A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
D As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.

Diferentemente do genoma, que é idêntico em todas as células somáticas de um mesmo organismo, uma importante característica do transcriptoma é ser específico em cada tipo celular e se apresenta de maneira bastante variável a diferentes condições, refletindo efeitos de diferentes estímulos, sejam eles químicos, fisiológicos, patológicos, entre outros. Sobre as técnicas utilizadas para análise do transcriptoma, assinale a alternativa CORRETA:

Tanto a metodologia utilizada pela EST quanto a ORESTES, comparam os dados obtidos com bancos de dados disponíveis, como o BLAST, a fim de identificar os genes correspondentes.
A ORESTES sequencia somente as extremidades do cDNA, identificando o RNA por meio de comparações com bancos de dados, como o BLAST.
A técnica do microarray, ou microarranjos de DNA limita a busca de genes a um pequeno número de cDNA, pois necessita de sondas específicas marcadas com fluoróforo.
O método EST tem todo o cDNA clonado sequenciado, fornecendo informações sobre a região codificadora do RNA mensageiro.

Com a biotecnologia da transcriptômica, proteômica e metabolômica, tornou-se possível analisar todo o conjunto que esteja sendo expresso em um determinado tipo celular em diferentes fases de desenvolvimento de um organismo.
Sobre as funções das "ômicas", avalie as asserções a seguir e relação proposta entre elas: I- As "ômicas" permitem obter informações relativas à progressão de doenças, à influência de fatores ambientais sobre os processos biológicos que estejam sendo investigados, ou ainda, determinar biomarcadores específicos para uma determinada condição. PORQUE II- Com o desenvolvimento e aplicação das "ômicas" obtêm-se informações ou dados em larga escala, capazes de elucidar respostas biológicas complexas. Assinale a alternativa CORRETA:
A A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
B As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
C As asserções I e II são proposições falsas.
D As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.