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o que imunoprecipitado?

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Amanda

Imunoprecipitação é realizada com anticorpos ligados à agarose e sedimentação deste complexo por centrifugação. A ligação do anticorpo à agarose é geralmente feita através da proteína A bacteriana. Portanto, se acopla o anticorpo à proteína A agarose comercial e depois se adiciona este complexo ao lisado celular. Caso o antígeno estiver ligado a outras proteínas, estas também serão sedimentadas, o que é conhecido como co-imunoprecipitação. 

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RD Resoluções

Na imunoprecipitação usa-se um anticorpo ligado à minúsculas esferas agarose (que é uma resina) para precipitar o antígeno. Geralmente esta ligação entre anticorpo e agarose é feita através de uma proteína A, mas também pode ser feita através de outras pontes como a biotina/estreptoavidina.


Nesta técnica é importante mencionar que o lisado deve ser feito em um meio que permite ligação antígeno/anticorpo, isto é, contendo reduzidas concentrações de detergentes não iônicos e condição de pH e força iônica adequadas.


A este lisados, adiciona-se o anticorpo contra o antígeno que se deseja separar e depois a proteína A ligada à agarose. Como as esferas de agarose possuem um tamanho imenso quando comparadas com os componentes celulares encontrados no lisado, pode-se precipitá-las com facilidade usando uma centrifugação a baixa velocidade. Após esta centrifugação pode-se dissolver o precipitado (no qual está o antígeno ligado à agarose) em uma solução de eletroforese para que esta antígeno possa ser analisado através da técnica eletroforética.

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