diagnostico imunologico de infecção bacteriana

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Diagnóstico imunológico de infecções bacterianas 
Profª Jéssica L Gomes 
Curso de Biomedicina
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Introdução 
As bactérias geralmente são diagnosticadas por meio de culturas, técnicas de coloração em lâminas ou isolamento de material genético, conforme a patologia investiga. 
No entanto, algumas abordagens imunológicas podem ser utilizadas no diagnóstico bacteriológico, tanto para a detecção de antígenos quanto para a detecção de anticorpos. 
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O diagnóstico microbiológico envolve a detecção de agentes infecciosos responsáveis por causar patologias, sejam eles virais, fúngicos ou bacterianos. De forma clássica, os microrganismos bacterianos são investigados por meio de cultura, em que a amostra é semeada e cultivada por um período de 24 a 48 horas. 
Além disso, técnicas de baciloscopia e coloração são comumente utilizadas. Porém, as infecções bacterianas também podem ser investigadas pelo uso de técnicas imunológicas, como os métodos de ELISA, imunocromatográficos e aglutinação.
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Papel do imunodiagnóstico em infecções bacterianas
A imunologia clínica, utiliza diversas técnicas para pesquisar um processo ou autoimune em que há a presença de antígenos e a formação de anticorpos. 
Existem duas abordagens básicas utilizadas no diagnóstico microbiológico: 
Utilização de anticorpos conhecidos para detectar os microrganismos; 
Utilização de antígenos conhecidos para detectar a presença de anticorpos no soro do paciente. 
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Dessa forma, percebe-se a grande aplicabilidade da imunologia clínica no diagnóstico de infecções. Com duas abordagens básicas, o uso de anticorpos conhecidos para detectar microrganismos e a utilização de antígenos conhecidos para detectar a presença de anticorpos, a imunologia pode ser uma grande aliada no diagnóstico de infecções bacterianas, fornecendo um diagnóstico mais rápido para a detecção e o acompanhamento de doenças.
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Exemplos de como as reações imunológicas:
Salmonelose: 
São bacilos gram-negativos que, conforme a espécie, podem ser causadores de enterocolite, febres entéricas e sepses. 
Os seus antígenos de parede celular (O), flagelo (H) e cápsula (Vi) 
A Salmonella entérica é uma bactéria anaeróbica facultativa fermentadora de glicose;
Responsável por 99% das salmoneloses humanas; 
Transmissão ocorre por meio de fezes contaminadas; 
 
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Salmonelose 
Salmonelose é uma zoonose, causadora de toxinfecção alimentar, podendo levar o individua a morte. 
A infecção é associada ao consumo de carne de aves, carne bovina, leite e ovos contaminados com sorotipos paratifoides de Salmonella spp. 
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Diagnóstico de salmonelose
O diagnóstico é realizado por meio da pesquisa do microrganismo Salmonella spp. no sangue, nas fezes e em outros sítios orgânicos, conforme a necessidade de investigação. 
Pode ser realizado com a técnica sorológica por meio de detecção de um aumento no título de anticorpos do paciente, conhecido como teste de Widal. 
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Teste de Widal
O teste de aglutinação e diluição em tubo, ou reação de Widal, é utilizado para detectar anticorpos contra antígenos O e H ; 
São necessárias 2 amostras de soro, coletadas em intervalo de 7 a 10 dias, para que seja possível comprovar uma elevação de título de anticorpos. 
Diluições seriadas de uma amostra (soro desconhecido) são testadas com antígenos de salmonelas representativas. 
Resultados falso-positivos e falso-negativos podem ocorrer. Quando apenas uma amostra é testada, o critério de interpretação pode variar , porém um titulo contra o antígeno O maior que 1:320 e contra o antígeno H maior que 1:640 é considerado positivo. 
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Brucelose
Causadas por espécies de Brucella, são pequenos bacilos gram-negativos que não apresentam cápsulas. 
Os três principais patógenos humanos são: Brucella melitensis, B. abortus e B, suis; 
Os seres humanos são hospedeiros acidentais;
Podem ser utilizadas técnicas sorológicas para o diagnóstico da infecção como: teste de aglutinação, teste de ensaio imunenzimático (ELISA) e pesquisas da anticorpos bloqueadores;
Antígeno Rosa Bengala (triagem de brucelose). 
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Técnica de antígenos de Rosa de Bengala
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Testes treponêmicos e não treponêmicos no diagnostico de sífilis
A sífilis é uma doença crônica, infectocontagiosa, que acomete exclusivamente o ser humano. 
Doença sexualmente transmissível; 
Bactéria Treponema pallidum.
Estágios:
Sífilis primária; 
Sífilis secundária;
Sífilis latente. 
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Manifestações clínicas da Sífilis
Sífilis primária – geralmente há presença de uma única ferida no local de entrada da bactéria (10 a 90 dias após a infecção) 
Sífilis secundária – 6 semanas a 6 meses após o aparecimento e a cicatrização da lesão inicial, podendo ocorrer febre, mal-estar, cefaleia e ínguas pelo corpo. 
Sífilis latente – é caracterizada pela ausência de sinais e sintomas, podendo ser dividida em recente, com menos de 2 anos de infecção, e tardia, com mais de 2 anos de infecção.
Sífilis terciária – pode surgir de 2 a 40 anos após o início da doença, em geral causam lesões cutâneas, ósseas, cardiovasculares e neurológicas, podendo ocorrer morte. 
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Diagnóstico de sífilis
Testes treponêmicos –
 detecção de anticorpos contra antígenos do Treponema pallidum;
Qualitativos.
Testes não treponêmicos –
Detectam anticorpos não treponêmicos, não específicos para Treponema pallidum
Quantitativos.
Qualitativos: são testes de triagem para determinar se a amostra é reagente. 
Quantitativos: servem para determinar o título dos anticorpos presentes de amostras reagentes no teste qualitativo, serve também de monitoramento de tratamento. 
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Titulação
O título é indicado pela última diluição da amostra que apresenta floculação visível. 
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Efeito prozona 
É a amostra reagente que apresenta ausência de reatividade em testes não treponêmicos. 
Isso ocorre quando há uma relação desproporcional entre as quantidades de antígenos e anticorpos presentes na reação não treponêmica, gerando resultados falso-negativos.
Excessos de anticorpos no soro testado 
Interferência na formação do complexo antígeno- anticorpo
Impede a reação de floculação 
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O Efeito prozona- acontece por um excesso de anticorpos e é necessário que realize diluição da amostra para que o resultado mais seguro, como já comentado anteriormente. 
É a amostra reagente que apresenta ausência de reatividade em testes não treponêmicos. 
Isso ocorre quando há uma relação desproporcional entre as quantidades de antígenos e anticorpos presentes na reação não treponêmica, gerando resultados falso-negativos.
Excessos de anticorpos no soro testado 
Interferência na formação do complexo antígeno- anticorpo
Impede a reação de floculação
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Testes treponêmicos 
No Brasil os testes treponêmicos mais utilizados são:
FTA-Abs; 
Testes de hemaglutinação ou aglutinação indireta ou passiva; 
Testes de ELISA ;
Testes quimioluminescentes; 
Testes rápidos. 
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FTA-Abs
É considerado o teste de referência (padrão-ouro) entre os testes treponêmicos, pode ser realizado em amostras de soro ou plasma, é o primeiro teste a se tornar reagente após a infecção. 
Técnica de imunofluorescência indireta que utiliza o T. pallidum fixadas em áreas demarcadas de lâminas de vidro.
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Testes de micro-hemaglutinação
Realizados no soro ou plasma; 
Baseia-se na ligação de hemácias que contêm, na superfície, antígenos de T pallidum com anticorpos treponêmicos presentes na amostra do paciente. 
A hemoglutinação é resultado da ligação dos anticorpos presentes no soro aos antígenos presentes na superfície das hemácias. 
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Testes de aglutinação indireta
Amostras de soro ou plasma; 
Não precisam de uma estrutura laboratorial;
Os antígenos do microrganismos são absorvidos à superfície de partículas de gelatina;
Os anticorpos presentes na amostra ligam-se aos antígenos de várias partículas de gelatina, resultando na aglutinação; 
Esses testes utilizam antígenos recombinantes de T. pallidum fixados em um fase sólida, na qual os anticorpos presentes na amostras irão se ligar. 
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Testes não treponêmicos
Detectam anticorposnão treponêmicos que não são específicos para T. pallidum, mas que estão presentes na sífilis. 
O teste VDRL é o mais utilizado da técnica de floculação;
A metodologia desse teste se baseia em uma suspensão antigênica, composta por uma solução alcoólica contendo cardiolipina, colesterol e lectinina purificada, utilizando soro inativado como amostra. 
A ligação desses componentes ocorre de forma aleatória, resultando a formação de estruturas arredondas, intituladas micelas. 
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Representação esquemática do antígeno dos testes não treponêmicos na forma de micelas.
Os anticorpos não treponêmicos presentes na amostra se ligam às cardiolipinas das micelas, e a ligação em várias micelas resulta na floculação, que pode ser visualizada ao microscópio. 
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Diagnóstico da sífilis
Devem ser realizados em duas etapas:
Triagem; 
Confirmação.
É essencial que toda amostra reagente seja submetida a um teste não treponêmica quantitativo e a um teste treponêmico. 
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Interpretação para diferentes combinações de resultados.
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Cicatriz ou memória sorológica 
Refere-se à persistência de resultados de testes treponêmicos reagentes com títulos baixos e/ou permanência de resultados reagentes nos testes treponêmicos após tratamento adequado para sífilis. 
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Situações falso positivos permanentes e transitórios
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Sífilis na gestação 
Ocorre quando a gestante apresenta evidencia clínica de sífilis e/ou sorologia não treponêmica reagente, independentemente do título;
Pré- natal (VDRL);
Em casos reagentes durante a gestação ou parto, deverá ser coletado o sangue periférico do recém-nascido para a realização de teste não treponêmico, seguido de exames de liquido cerebrospinal, raio X de ossos longos e hemograma. 
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Sífilis congênita
Ocorre como resultado da disseminação hematogênica do T. pallidum da gestante não tratada ou inadequadamente tratada para o embrião durante a gestação ou o parto. 
Precoce – Ocorre até o segundo ano de vida.
Tardia – Surge após o segundo ano de vida.
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Metodologias e principais aplicações da imunologia clínica na bacteriologia 
Técnicas imunológicas também podem ser utilizadas no diagnóstico de bactérias, como nos casos de tuberculose e infecção por Streptococcus.
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Tuberculose
Doença infectocontagiosa
Causada pelo Mycobacterium tuberculosis ou bacilo de Koch;
Transmitido por via aéreas; 
É diagnosticada por testes bacteriológicos: baciloscopia e cultura, e de imagem (RX do tórax);
Outros ensaios imunoenzimáticos podem ser utilizados :
Teste de tuberculínico; 
Testes imunoenzimáticos 
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Teste tuberculínico 
É um teste diagnótico de infecção latente da tuberculose que se baseia em uma reação de hipersensibilidade cutânea após aplicação de tuberculina PPD po via intradérmica, em que a leitura é relizada entre 48 e 72 horas após a aplicação, podendo ser estendida até 96 horas;
Tuberculina – é um filtrado de cultivo de sete cepas selecionadas do bacilo da tuberculose esterelizado e concentrado. 
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Teste tuberculínico 
A inoculação do antígeno provoca uma reação entre antígeno e anticorpo, seguida de uma resposta dependente da reatividade celular de linfócitos T sensibilizados, que, após a reexposição a antígenos do bacilo, tornam-se ativados, expressando-se no local de aplicação da tuberculina. 
Causam eritema e edema no local da derme, em casos positivos, com pico entre 48 e 72 horas após a administração do PPD. 
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Leitura da prova tuberculínica 
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Testes imunoenzimáticos
A técnica de ELISA para a detecção de anticorpos IgG permite detectar a presença desses anticorpos contra antígenos microbacterianos; 
Modo de especificidade da técnica depende da qualidade do antígeno utilizado; 
A técnica Elisa pode ser utilizada para detecção IgM em amostras de soro do paciente.
O diagnóstico de tuberculose é principalmente realizado pela técnica de baciloscopia.
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Testes imunonzimáticos
Os estreptococcus são cocos gram-positivos esféricos, organizado em cadeias ou pares , que podem causar diversas infecções.
A infecção de estreptococcus pode ser diagnosticada com o uso de técnicas imunológicas, como:
Reação de intumescimento capsular (Quellung); 
Teste da contraimunoeletroforese; 
ASLO.
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Referências 
BRASIL. Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Departamento de DST, Aids e Hepatites Virais. Diagnóstico de sífilis. Brasília: Ministério da Saúde, 2014a. Disponível em: https://telelab.aids.gov.br/moodle/pluginfile.php/22192/mod_resource/ content/2/S%C3%ADfilis%20-%20Manual%20Aula%201_SEM.pdf. Acesso em: 26 out. 2020.
 BRASIL. Ministério da Saúde. Departamento de Vigilância das Doenças Transmissíveis. Técnicas de aplicação e leitura da prova tuberculínica. Brasília: Ministério da Saúde, 2014b. Disponível em: http://bvsms.saude.gov.br/bvs/publicacoes/tecnicas_aplicacao_leitura_prova_tuberculinica.pdf. Acesso em: 26 out. 2020.
 BRASIL. Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Departamento de Vigilância, Prevenção e Controle das Doenças Sexualmente Transmissíveis, Aids e Hepatites Virais. Manual técnico para o diagnóstico da sífilis. Brasília: Ministério da Saúde, 2016.
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Referências 
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 FERNANDES, B. R. et al. Diagnóstico diferencial das meningites. Revista Médica de Minas Gerais, Belo Horizonte, v. 18, n. 3, supl. 4, p. S68–S71, 2008.
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Referências
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Estudar é conhecer mundos diferentes.
Autor Desconhecido
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